乙肝病毒检测的方法学评价

乙肝病毒检测的方法学评价第一页，共三十页，编辑于2023年，星期四（一）乙型肝炎病毒结构特点HBsAg：是HBV感染的主要标志HBsAb：保护性抗体HBcAg：仅存于感染的肝细胞核内，一般不存在于血循环中HBcAb:非保护性抗体，HBcAb-IgM提示HBV处于复制状态HBeAg：HBV复制及强感染性的指标HBeAb：有一定的保护作用，预后良好第二页，共三十页，编辑于2023年，星期四患者血清中存在三种基本形态大球型颗粒，又称Dane颗粒；小球型颗粒；管型颗粒小球型颗粒；管型颗粒管型颗粒第三页，共三十页，编辑于2023年，星期四乙型肝炎病毒的实验室诊断（一）血清学检查（二）生化学检查（三）HBVDNA、基因型和变异检查

第四页，共三十页，编辑于2023年，星期四血清学检查项目：HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe、抗-HBc以及抗-HBcIgM方法ELISA(enzyme-linkedimmunosorbentassay，最常用，定性)第五页，共三十页，编辑于2023年，星期四HBsAg

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感染的标志Anti-HBs–

既往感染/接种疫苗Anti-HBcIgM

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急性感染标志Anti-HBcIgG

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既往或慢性感染HBeAg–

急性病毒复制，有传染性

Anti-HBe–病毒不再复制HBV-DNA

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急性病毒复制，比HBeAg更准确；主要用于监测治疗反应第六页，共三十页，编辑于2023年，星期四HBV血清学标志物的临床意义感染模式HBsAgHBeAgHBc(IgM)抗HBc(IgG)抗HBe抗HBs临床意义1+-----急性乙肝潜伏期后期，携带者。2++----急性乙肝早期或潜伏期3+++---急性乙肝早期4++-++--急性乙肝后期5++-+----急性或慢性乙肝，有HBV复制6+++-+-+-急性或慢性乙肝。急性期或无症状携带者7+-+-++-阴性慢性乙肝8+---+-慢性乙肝，无或低度HBV复制，乙肝恢复期，既往感染，隐匿性9---+-+乙肝恢复期，既往感染，隐匿性10-----+慢性乙肝，接种过乙肝疫苗。第七页，共三十页，编辑于2023年，星期四两对半的意义—

乙型肝炎的诊断—

判断传染性—

判断预后—

筛查献血员—

流行病学调查第八页，共三十页，编辑于2023年，星期四乙肝三系定性检查是用来判断是否感染乙肝或粗略估计病毒复制水平的初步检查，对患者病情程度的评估参考性不大，所以乙肝患者在做乙肝三系定性检查的时候，应结合肝功能检查、乙肝病毒DNA检查、B超检查等来判定病情的轻重，第九页，共三十页，编辑于2023年，星期四ELISA检测灵敏低的原因及局限ELISA法受其自身敏感性和特异性的限制;HBVS和前C基因区出现位点突变导致HBsAg和HBeAg表达缺陷。影响因素多,如加样时间,试剂平衡时间,样本溶血程度等等。特别是低浓度样本易导致假阴性结果,使弱阳性样本漏检。急性感染的窗口期;HBsAg检测方法灵敏度不足;血清亚型的漏检等。标本中病毒颗粒少;第十页，共三十页，编辑于2023年，星期四血清学检测的局限性HBV具有“检测窗口期假阴性结果无法检测突变株及抗体第十一页，共三十页，编辑于2023年，星期四乙肝病毒的定量检测1、乙肝表面抗原（HBsAg）定量检测：1）参考值：0-0.05IU/mL2）临床意义：（1）可作为HBV携带者乙肝病毒复制的参考指标（2）评价拉美呋定的治疗效果（3）监测应用alpha-干扰素治疗病人的乙肝病毒复制（4）确定肝移植病人免疫球蛋白的使用剂量第十二页，共三十页，编辑于2023年，星期四2.乙肝表面抗体（抗-HBs）定量测定：

是HBsAg刺激机体产生的特异性抗体，是一种保护性抗体，能中和HBV。（1）抗-HBs含量在0-10mIU/ml，表示不具有保护性，需要注射乙肝疫苗（3针：0-1-6方案）。（2）抗-HBs含量在10-100mIU/ml，表示具有保护性，但较弱，需要乙肝疫苗强化注射（1针）。（3）抗-HBs含量大于100mIU/ml，表示具有很强的保护性，不需要注射乙肝疫苗。第十三页，共三十页，编辑于2023年，星期四3、乙肝病毒e抗原（HBeAg）HBeAg增高说明病毒复制，具有很强的传染性。4、乙肝病毒e抗体（抗-HBe）抗-HBe阳性说明病毒复制减少，传染性弱，但并非没有传染性。抗HBe不是保护性抗体。第十四页，共三十页，编辑于2023年，星期四5、乙肝病毒核心抗体（抗-HBc）抗-HBc：不是中和抗体，有IgG和IgM两种形式。IgM在早期出现，而IgG在恢复期出现，可持续多年或终身存在。第十五页，共三十页，编辑于2023年，星期四乙肝五项定量检测的优点由于乙肝病毒容易发生变异，再加上乙肝定性检测方法的局限性，会出现假阴性结果，导致不能及时发现乙肝的感染，也就不能得到及时的治疗，对医护人员和其他患者也存在着被感染的威胁。乙肝五项定量应用目前最先进的化学发光法检测，避免了假阴性和漏检的问题，而且准确，尤其对乙肝病人的疗效观察提供了依据，这是检验发展的趋势。第十六页，共三十页，编辑于2023年，星期四两对半定量检测极大地提高了检测的灵敏度，LiCa技术检测HBsAg灵敏度可达0．5ng/ml，而ELISA检测HBsAg达到2ng/ml时才会阳性。急性乙肝早期定量能及早检出HBsAg，确证HBV感染，几乎能与PreSi同时检测，在病程观察中大大缩短了“窗口期”，而酶标检测在乙肝早期往往HBsAg呈阴性。慢性乙肝一些患者由于机体常缺乏对HBV包膜蛋白的免疫应答，HBsAg表达较低，酶标检测可出现HBsAg和HBsAb均阴性的情况，而定量检测则可避免这些情况的出现，为正确判断病情提供依据。灵敏度如病毒发生变异后，表达量较低，常规ELISA测不出抗原，而定量检测具有极高的灵敏度，可发现极有可能同时检测出HBsAg和HBsAb，血清中HBsAg含量与病人对HBsAg细胞免疫成反比关系，而肝功能改变则与此种细胞免疫成正比。定量HBsAg是反映这一关系的唯一手段。可发现低浓度的HBsAg携带者，特别是一些群体如医务工作者及病人家属等。第十七页，共三十页，编辑于2023年，星期四定量检测意义监测疾病发展评估药物疗效指导疫苗接种第十八页，共三十页，编辑于2023年，星期四国内疫苗评价标准无应答者:无抗体产生(5%)----加强计量复种低应答者:<10IU/L(10%)----加强计量复种中应答者:10-100IU/L(65%)----无须复种高应答者:>100IU/L(20%)----无须复种第十九页，共三十页，编辑于2023年，星期四PCR技术在乙肝方面的应用乙型肝炎病毒属嗜肝DNA病毒科（hepadnaviridae），基因组长度3.2kb

目前感染人类最小的DNA病毒部分双链环状DNA。第二十页，共三十页，编辑于2023年，星期四定量PCR的特点可定量结果，准确灵敏地反应了病原体的感染和治疗恢复情况光谱分析仪直读结果，自动分析，增强了灵敏性和客观性。第二十一页，共三十页，编辑于2023年，星期四第二十二页，共三十页，编辑于2023年，星期四HBV基因及编码蛋白第二十三页，共三十页，编辑于2023年，星期四HBV-DNA定量检测的临床应用慢性乙肝诊断治疗监测和疗效评价跟踪随访预后判断第二十四页，共三十页，编辑于2023年，星期四（二）HBV-DNA与“两对半”1.“两对半”：机体的免疫反应状态；FQ-PCR：检测的是HBV本身的遗传物质—DNA，是病毒存在和复制的最可靠、最直接的指标。2.“携带者”、“大三阳”、“小三阳”等免疫学指标不能反应体内病毒复制水平与感染程度。第二十五页，共三十页，编辑于2023年，星期四3.血清学指标(－)不能排除HBV感染。4.也可能出现HBsAg(＋)，HBV-DNA(－)。5.HBsAb(＋)、HBcAb(＋)、HBeAb(＋)三抗体阳性与HBVDNA2.5×103copy/ml结果解释。第二十六页，共三十页，编辑于2023年，星期四HBV-DNA检测的临床意义⒈诊断方面：⑴HBVDNA是HBV存在最直接的依据⑵HBVDNA是HBV复制的标志⑶HBVDNA是患者具有传染性的标志⑷对HBV-M起补充作用：①HBeAg(﹣)/抗HBe(﹢)乙型肝炎（前C区变异）②HBsAg(﹣)乙型肝炎（S区变异）③低水平感染单项抗HBc(﹢)乙型肝炎第二十七页，共三十页，编辑于2023年，星期四⒉疗效判断：

HBVDNA是目前判断乙肝抗病毒药物疗效最敏感的指标

⒊预后判断

HBVDNA水平与病情有一定的关系第二十八页，共三十页，编辑于2023年，星期四一、乙肝病毒DNA检查可检查乙肝病毒的复制状况。如乙肝病毒DNA测定值>1000copies/ml，就提示乙肝病毒有复制，而且病毒数量的高低与病毒复制的程度成正相关。若结果阴性，则表明病毒处于不活跃阶段，病情比较平稳。二、乙肝病毒DNA检查还是判断乙肝病毒传染性的重要指标。如果乙肝病毒DNA测定值>1000copies/ml，常提示具有传染性，且检测值越高就说明乙肝病毒复制越活跃，传染性越强。第二十九页，共三十页，编辑于2023年，星期四三、乙肝病毒DNA检查可以作为