核苷酸和核酸

关于核苷酸和核酸第1页，课件共33页，创作于2023年2月一、核酸的化学反应

1.脱氨基作用（脱氨，deamination）

次黄嘌呤5-甲基胞嘧啶黄嘌呤第2页，课件共33页，创作于2023年2月2.脱氧核苷酸的水解——脱嘌呤第3页，课件共33页，创作于2023年2月3.紫外线和一些化学因子、烷化剂对DNA的损伤第4页，课件共33页，创作于2023年2月亚硝酸第5页，课件共33页，创作于2023年2月烷化剂：乙基甲烷磺酸（EMS）第6页，课件共33页，创作于2023年2月紫外线诱导胸腺嘧啶二聚体第7页，课件共33页，创作于2023年2月4.与嵌合剂的反应第8页，课件共33页，创作于2023年2月第9页，课件共33页，创作于2023年2月溴乙啶丫啶橙

放线菌素D

第10页，课件共33页，创作于2023年2月二、DNA的酶法甲基化（methylation）甲基供体：S—腺苷甲硫氨酸甲基受体：被修饰碱基（A、C多于G、T）碱基的甲基化修饰不是随机的，而是限于一定的顺序或DNA的某一区域，在甲基化酶的作用下进行，甲基化是可逆的。甲基化的意义：帮助细胞识别和区分自身DNA和外来DNA；调节基因表达；帮助DNA修复等。第11页，课件共33页，创作于2023年2月第八节

核酸酶和DNA限制性内切酶第12页，课件共33页，创作于2023年2月一、核酸酶（nuclease）能水解核酸的酶为核酸酶核酸酶都是磷酸二酯酶（phosphodiesterases）第13页，课件共33页，创作于2023年2月核酸酶的分类按底物专一性分类：核糖核酸酶(RNase)和脱氧核糖核酸酶(DNase)按作用方式分类：内切核酸酶和外切核酸酶内切核酸酶：从核酸的内部切割核酸链，产生核酸链片段。外切核酸酶：从核酸链的一端逐个切断磷酸二酯键，释放单核苷酸。按磷酸二酯键断裂方式：3’-核酸酶和5’-核酸酶第14页，课件共33页，创作于2023年2月第15页，课件共33页，创作于2023年2月核酸酶对其底物的作用具有特异性第16页，课件共33页，创作于2023年2月第17页，课件共33页，创作于2023年2月二、限制性内切酶（restrictionendonuclease）

限制性内切酶是从细菌中分离的一类专门识别和水解特定核苷酸序列的内切酶类。这类酶在原核生物体内，用于“防御”外来DNA的入侵，将外来DNA以独特的方式切成无感染能力的片段，而自身不受损害（甲基化作用）。第18页，课件共33页，创作于2023年2月1.限制性内切酶的分类Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ

基因工程技术中常用Ⅱ型第19页，课件共33页，创作于2023年2月不需要ATP参加；不对DNA进行甲基化或其它方式修饰。专门识别和切割特定的核苷酸序列，这个序列一般含4—6个核苷酸残基，并具回文结构“落鹤岛上岛落鹤，垂柳岸边岸柳垂”。

2.II型限制性内切酶

第20页，课件共33页，创作于2023年2月Ⅱ类酶识别序列特点

回文结构palindrome第21页，课件共33页，创作于2023年2月切口（kerf）：粘端，平端第22页，课件共33页，创作于2023年2月第23页，课件共33页，创作于2023年2月第24页，课件共33页，创作于2023年2月3.限制性内切酶的种类（约1000多种）

第25页，课件共33页，创作于2023年2月Hin

dⅢ

属

系

株序Haemophilusinfluenzaed株流感嗜血杆菌d株的第三种酶命名naming第一个字母取自产生该酶的细菌属（genus）名，用大写；第二、第三个字母是该细菌的种（species）名，用小写；第四个字母代表株（strain）；用罗马数字表示发现的先后次序（sequence）。第26页，课件共33页，创作于2023年2月4.限制性内切酶在基因重组中的应用

第27页，课件共33页，创作于2023年2月第28页，课件共33页，创作于2023年2月第29页，课件共33页，创作于2023年2月三、限制片段的长度和限制图1.限制片段的长度识别4个核苷酸序列的限制酶产生DNA片段的平均长度：256（44）识别6个核苷酸序列的限制酶产生DNA片段的平均长度：4096（46）第30页，课件共33页，创作于2023年2月2.制性内切酶图谱

限制性图谱是各种限制性内切酶切点在某一DNA分子或DNA片段上的排列，由于各酶切点之间的距离是以碱基对（kbp→mbp）表示的，所以可计算出二切