山西省临床检验中心 医疗机构新型冠状病毒核酸检测⼯作⼿册 解读 ⻢斌国

《医疗机构新型冠状病毒核酸检测⼯作⼿册》解读⼭⻄省临床检验中⼼

⻢斌国2021年8⽉10⽇10时55分1国内外疫情现状2021年8⽉10⽇10时55分2关于新冠病毒

变异株DELTA突变株的传染性远超过Delta、这两个冠状病毒，⼤流感、天花等病1918SARS

MERS特点：传播⼒更强：从有效的暴露、感染到出现临床症状、发病的速度，发病的时间变短了，相对于过去的流⾏毒株来命名：德尔塔变异毒株于超过毒。Delta、普通感冒、季节性流感和Ebola(Delta)年

⽉在印度2020

10突变株感染病死率在之间，

在

之间，与⽔痘0.1-1

R0

5-9.5被最早发现。（

为

）在相近传染性；加上麻疹（

为R0

12-18），构

成了

讲，平均潜伏期缩短了⼀两天。R0

8.5变体是由Delta2021传染性最强的三个病毒。病毒载量⾼：患者发病以后转为重型、危重型的⽐例⽐以往⾼，⽽且转年

⽉，世卫组织将5最早在印度发现的新冠病毒变异毒株突变株感染后病毒载量更⾼（⼴东Delta的研究显示⾼CDC

1260为重型、危重型的时间提前。患者的CT倍），由此突变株导致突变感染的循环阈值（

）也就更低DeltaCt值⾮常低，

值越低就表示体内病毒载CTB.1.617.2命名的。

（16.5vs.

19），并且传染时间更⻓（

天天），再次感染18

vs.

13量越⾼，患者核酸转阴所需要的时间延的⻛险也更⾼（）OR1.46

!⻓。可能存在免疫逃逸，但疫苗仍有保护作⽤：接种疫苗的病例从确诊到产⽣抗体阳性的时间短、

值⾼、住院时间CT由于突变株⾼很多的传染性、更低的疫苗保护效⼒，所以戴Delta⼝罩等⾮药物⼲预是必要⽽有效的⽅法。感染者戴⼝罩，有40%-的保护⼒；易感⼈群戴⼝罩，有60%值与⼝罩的选择有关）的保护⼒。（具体数20%-30%短。冯⼦建研究员---基础传染值（

），指感染者能够将致病原传播给⼏个其他⼈。R0对核酸检测的挑战：如之前认为新冠病毒的

为

（），即认为⼀个新冠病⼈突变株

调整到了R0

2.6

1.5-3.5原试剂盒对变异株的检出能⼒如何？变异株质控品的研发及应⽤？平均会传染给其他

个⼈；⽽⽬前将2.6

DeltaR05-，平

均

，即⼀个感染了

突变株的⼈，会进⼀步传染给9.5

7.5

Delta⽣物安全⻛险评估及检测⼈员的防护？其他

个⼈。7.5《医疗机构新型冠状病毒核酸检测⼯作⼿册》为落实国务院应对新型冠状病毒感染肺炎疫情联防联控机制《关于做好新冠肺炎疫情常态化防控⼯作的指导意⻅》（国发明电•第⼀版第⼆版〔

〕

号）要求，进⼀步规2020

14范新型冠状病毒（以下简称新冠病毒）核酸检测的技术⼈员、标本采集（单采、混采）、标本管理、实验室检测、结果报告等⼯作，保证检测质量，提⾼检测效率，满⾜新冠病毒核酸检测需求，特制定本⼿册。本⼿册适⽤于所有开展新冠病毒核酸检测的医疗机构•2021年8⽉10⽇10时55分4内

容技术⼈员基本要求标本采集基本要求标本管理基本要求实验室管理基本要求实验室质量控制与管理核酸检测结果反馈基本要求核酸检测安全管理核酸检测信息化管理标本混采（第⼆版）其他要求••••••••••2021年8⽉10⽇10时55分5ꢀ⼀、技术⼈员基本要求采样⼈员：⽣物安全培训合格熟悉标本种类和采集⽅法；•确保采样⼈员安全确保标本质量掌握标本采集操作流程及注意事项确保标本及相关信息可追溯做好标本信息的记录检测⼈员：•具备相关专业的⼤专以上学历1.资格要求（或具有中级及以上专业技术职务任职资格）⼆年以上的实验室⼯作经历2.3.4.5.基因检验相关培训合格证书配备⼈员应当与所开展检测项⽬相适宜配备⼈员应当与标本量相适宜数量要求以保证及时、熟练地进⾏实验和报告结果，保证结果的准确性注：医疗机构特别是⼆级医疗机构应配备⾄少两名专职技术⼈6员开展检测⼯作（开展检测时，样本制备区⾄少保证两⼈）ꢀ⼆、标本采集基本要求（⼀）基本原则•普通核酸检测实验室与⻔急诊就诊⼈次、住院⼈次等诊疗量相匹配与采集的标本量相适应各医疗机构的检测能⼒1.核酸检测基地、公共实验室（

万管

⽇，加班

万管），其1

/3他⼤规模筛查实验室（市级

管

⽇，县域

管）应与5000

/

1000相应的检测能⼒相适应→检测能⼒评估？实验室空间；检测⼈员配置；检测平台配置；操作⼈员熟练程度；辅助设施设备配置；信息系统配置等。→避免采集数量明显超出检测能⼒导致的标本积压、标本失效、检测结果反馈迟缓等问题。医疗机构采集标本：发热患者与其他患者、

愿检尽检

⼈群分区采样，避免交叉感染。“”2.•2021年8⽉10⽇10时55分7（⼆）采样点设置遵循安全、科学、便⺠的原则应当为独⽴空间，具备通⻛条件内部划分相应的清洁区和污染区配备⼿卫⽣设施或装置•••••••设⽴清晰的指引标识，并明确采样流程和注意事项设⽴独⽴的等候区域尽可能保证⼈员单向流动落实

⽶线

间隔要求，严控⼈员密度。“1

”2021年8⽉10⽇10时55分8（三）⼈员配置及防护要求每个采样点应当配备

名采样⼈员1-2•••合理安排采样⼈员轮替，原则上每

⼩时轮岗休息

次2-41防护装备要求：

及以上防护⼝罩、护⽬镜、防护服、乳胶⼿N95套、防⽔靴套；如果接触患者⾎液、体液、分泌物或排泄物，戴双层乳胶⼿套；⼿套被污染时，及时更换外层乳胶⼿套。每采⼀个⼈应当进⾏严格⼿消毒或更换⼿套。•2021年8⽉10⽇10时55分9（四）采样流程建⽴新冠病毒核酸检测采样操作流程制度新冠病毒核酸检测采样信息表根据采样对象类别确定具体采样流程，ꢀ采样单位：ꢀꢀꢀꢀꢀ采样时间ꢀꢀ采样数量ꢀ包括预约、缴费、信息核对、采样、送检、报告发放等。利⽤条码扫描等信息化⼿段采集受检者信编号姓名

性别

年龄

身份证号码居住地址ꢀ联系电话

标本类型ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ咽拭⼦咽拭⼦咽拭⼦咽拭⼦咽拭⼦咽拭⼦咽拭⼦咽拭⼦咽拭⼦咽拭⼦咽拭⼦咽拭⼦咽拭⼦咽拭⼦咽拭⼦ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ息。标本采集前，采样⼈员应当对受检者身份信息进⾏核对，并在公共区域以信息公告形式告知核酸检测报告发放时限和发放⽅式。每个标本应当⾄少记录以下信息：

受检ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ1.者（患者）姓名、身份证号、居住地址、联系⽅式；

采样单位名称、标本编号，ꢀꢀꢀꢀꢀꢀ2.标本采集的⽇期、时间、采集部位、类型、ꢀꢀꢀꢀꢀꢀ数量等。2021年8⽉10⽇10时55分10采样管选择⼈群筛查••应选择具有病毒灭活功能如含胍盐（异硫氰酸胍或盐酸胍等）或表⾯活性剂的采样管。⾸选含胍盐的采样管。发热⻔诊或急诊的新冠核酸快速检测的采样管分含胍盐和不含胍盐两种类型。快速检测，则根据所⽤的核酸检测试剂的要求确定采样管。1、灭活型保存液，它属于病毒裂解型保存液，基础液是改良的核酸提取裂解液，成分有胍盐，Rnase抑制剂。常温保存即可。它的优点是：

）节省了病毒样品保存以及运输的成本。

）内含⾼浓12度的胍盐即可⾼效灭活病毒，能有效阻⽌新冠核酸快速检测操作员⼆次感染。3）能在常温下保存相对较⻓的时间，节省了病毒样品保存以及运输的成本。2、⾮灭活型保存液，它属于病毒维持液型保存液。基础液是运送培养基为基础改良液，成分是Hanks液基础,庆⼤霉素,真菌抗⽣素,BSA

(V)

,冷冻保护剂、⽣物缓冲剂及氨基酸等。它必须严格低温。优点是：1）保持病毒在体外的活性以及抗原和核酸的完整性。2）除了⽤于新冠核酸快速检测外，还能⽤于病毒的培养、分离以快检多为⼀步法2021年8⽉10⽇10时55分11及抗原的检测。（五）采集样本上呼吸道标本（⿐咽拭⼦、⼝咽拭⼦等）•下呼吸道标本（呼吸道吸取物、⽀⽓管灌洗液、肺泡灌洗液、深咳痰液等）•对集中隔离⼈员对其他⼈员要通过⿐咽拭⼦采集上呼吸道标本；:要⾸选⿐咽拭⼦。⽆法采集⿐咽拭⼦时可选⽤⼝咽拭⼦。:2021年8⽉10⽇10时55分12⿐咽拭⼦1.采样⼈员⼀⼿轻扶被采集⼈员的头部，⼀⼿执拭⼦贴⿐孔进⼊，沿下⿐道的底部向后缓缓深⼊，由于⿐道呈弧形，不可⽤⼒过猛，以免发⽣外伤出⾎。待拭⼦顶端到达⿐咽腔后壁时，轻轻旋转⼀周（如遇反射性咳嗽，应停留⽚刻），然后缓缓取出拭⼦，将拭⼦头浸⼊含

～

病毒保存液的2

3ml管中。关键点：

要深、要转、要取细胞“”2021年8⽉10⽇10时55分13⽀⽓管灌洗液4.将收集器头部从⿐孔或⽓管插⼝处插⼊⽓管（约

深处），注⼊

⽣理30cm

5ml深咳痰液3.•盐⽔，接通负压，旋转收集器头部并缓慢退出。收集抽取的粘液，并⽤采样液要求患者深咳后，将咳出的痰液收集于含

采样液的

螺3ml

50ml冲洗收集器

次（亦可⽤⼩⼉导尿管接1⼝塑料管中。如果痰液未收集于采样液中，可在检测前，加⼊2

3ml体积的痰消化液。可以采⽤痰液等体积的含

蛋⽩酶

的磷1g/L

K在

注射器上来替代收集）。50ml肺泡灌洗液～

采样液，或加⼊痰液等

5.局部麻醉后将纤维⽀⽓管镜通过⼝或⿐经过咽部插⼊右肺中叶或左肺⾆段的⽀管，将其顶端契⼊⽀⽓管分⽀开⼝，经⽓管活检孔酸盐缓冲液将痰液化。缓缓加⼊灭菌⽣理盐⽔，每次

～

，总30

50ml量

～

，不应超过

。100

250ml

300ml2021年8⽉10⽇10时55分14三、标本管理基本要求（⼀）标本包装•（⼆）标本送检（三）标本接收标本采集后室温放标本接收⼈员的个⼈防护按采样⼈员防护装备执⾏。标本运送⼈员和接收⼈员对标本进⾏双签收。避免反复冻融。所有标本应当放在⼤⼩适合的带螺旋盖内有垫圈、耐冷冻的标本采集管置不超过

⼩时，4应在

内送到实2-4h拧紧。容器外注

验室。⾥，明标本编号、种类、姓名及采样⽇期。将密闭后的标本放⼊⼤⼩合适的塑料袋内密封，每袋装⼀份标本。如果需要⻓途运输标本，应采⽤⼲冰等制冷⽅式进⾏保存，严格按照相关规定包装运输。承担⼤规模核酸筛查实验室，建议在PCR实验室附近设置独⽴的标本接收区（⽣物安全⼆级），配备⽣物安全柜、医⽤冰箱、混匀器、消毒设备、电脑等，⽤于样本接收、分拣、混匀洗脱、信息录⼊15（四）标本保存⽤于病毒分离和核酸检测的标本应当尽快进⾏检测含胍盐保存液采样管采集的标本可根据采样管说•明书要求的保存条件及时间要求进⾏运送和保存。⼩时内⽆法检测的标本则应置于

或以下保24

-70••℃存（如⽆

保存条件，则于

冰箱暂存）。-70

-20℃℃境外⾼⻛险区域⼈群以及新冠肺炎患者的密接者和密接者的密接者等集中隔离⼈员的核酸检测标保存

天-20

7℃本，检测后，应当在。其他⼀般⼈群筛查标本，则可在•保存

⼩时。4

24℃2021年8⽉10⽇10时55分应当设⽴专库或专柜单独保存16

标本。四、实验室管理基本要求（⼀）实验室资质要求具备经过卫⽣健康⾏政部⻔审核备案的⽣物安全⼆级及以上实验室条件

⼆级⽣物安(全备案），以及临床基因扩增检验实验室条件（通过技术审核）防污染独⽴设置的医学检验实验室还应当符合《医学检验实验室基本标准（试⾏）》《医学检验实验室管理规范（试⾏）》等要求控制空⽓流向管理（⼆）实验室分区要求原则上应当设置试剂储存和准备区、标本制备区、扩增和产物分析区。这

个区域在3物理空间上应当是完全相互独⽴的（防污染

），不能有空⽓的直接相通。2021年8⽉10⽇10时55分17各区的功能试剂储存和准备区：1.贮存试剂的制备、试剂的分装和扩增反应混合液的制备（储存准备试剂）贮存和准备离⼼管、吸头等消耗品。（储存准备耗材）标本制备区：2.转运桶的开启、标本的灭活（样本处理）核酸提取及其加⼊⾄扩增反应管等。（核酸提取、扩增体系制备）扩增和产物分析区：3.核酸扩增和产物分析。ꢀ

根据使⽤仪器的功能，区域可适当合并。如采⽤标本处理、核酸提取及扩增检测为⼀体的⾃动化分析仪，标本制备区、扩增和产物分析区可合并。（核酸扩增及产物分析）2021年8⽉10⽇10时55分18（三）主要仪器设备•设备配置：实验室应当配备与开展检验项⽬（承担的⼯作量）相适宜的仪器设备，包括核酸提取仪、医⽤

扩增仪、⽣物PCR安全柜、病毒灭活设备（如⽔浴锅等）、保存试剂和标本的冰箱和冰柜、离⼼机、混匀器、不间断电源（

）或备⽤电源等。UPS注：设备维护：应按照平战结合的原则，制定设施设备定期维护保养计划（核酸基地、公共实验室、⼤规模检测实验室），做好设施及设备的定期维护、保养，保证战时设施设备处于良好的状态。2021年8⽉10⽇10时55分19（四）实验室检测•重新采2.集样本复检实验室接到标本后，应当在⽣物安全柜内对标本进⾏清点核对。更换试1.更换实3.验室复检按照标准操作程序进⾏剂复检试剂准备、标本前处理、核酸提取、核酸扩增、结果（制定

⽂件）分析及报告。

SOP可疑样本阳性样本可疑标本和实验室应当建⽴阳性标本复检的流程。标本前处理试剂准备核酸提取核酸扩增结果分析结果报告2021年8⽉10⽇10时55分20试剂准备1.•核酸提取试剂

核酸检测试剂应当选择国家药品监督管理部⻔批准的试剂选择标本采样管和核酸提取试剂时，使⽤试剂盒说明书上建议的标本采样管和提取试剂。核酸提取⽅法与标本保存液和灭活有些核酸提取试剂（如⽅式相关，磁珠法或者⼀步法），容易受到胍盐或保存液中特殊成分的影响，特别是⼀步法提取多需要使⽤试剂⼚家配套的标本采样管。能检出变异病毒的试剂盒？2021年8⽉10⽇10时55分21标本前处理2.•已经使⽤含胍盐的灭活型标本保存液的实验室，这⼀环节⽆需进⾏灭活处理，直接进⾏核酸提取化学灭活⽽使⽤⾮灭活型标本保存液的实验室，则有3056℃孵育

分钟热灭活、化学灭活的处理⽅式。232021年8⽉10⽇10时55分核酸提取3.核酸扩增4.将灭活后的标本取出，在⽣物

将扩增体系放⼊扩增仪，核对安全柜内打开标本采集管加样。

扩增程序是否与试剂说明书相符，启动扩增程序。核酸提取完成后，⽴即将提取物进⾏封盖处理。扩增后反应管不要开盖，直接放于垃圾袋中，封好袋⼝，按⼀般医疗废物转移出实验室处理。在⽣物安全柜内将提取核酸加⾄

扩增反应体系中。PCR2021年8⽉10⽇10时55分24五、实验室质量控制与管理应选⽤扩增检测各医疗机构应当加强核酸检测质量控制。•试剂盒指定的核酸提取试剂和扩增仪。2021年8⽉10⽇10时55分25⽬前PCR实验室使⽤平台现状2021年8⽉10⽇10时55分26⽬前PCR实验室使⽤试剂现状扩增试剂多种多样核酸提取试剂多种多样2021年8⽉10⽇10时55分27性能验证1.在⽤于临床标本检测前，实验室应对由提取试剂、提取仪、扩增试剂、扩增仪等组成检测系统进⾏必要的性能验证。性能指标包括但不限于精密度（⾄少要有重复性）和最低检测限。建议选⽤⾼灵敏的试剂（检测限

拷⻉

）。≤500

/ml2021年8⽉10⽇10时55分28检测下限、重复性试剂声明检测下限(copies/ml)选择质控样本浓度(copies/ml)选择质控样本来源5005000⼴州邦德盛梯度1梯度2梯度3稀释倍数502510检测结果50倍稀释25倍稀释10倍稀释序号100copies/ml200copies/ml500copies/mlORF1ab

(CT)N(CT)ORF1ab

(CT)

N(CT)ORF2ab

(CT)N(CT)12345678929.0926.7627.2727.4927.827.3129.3726.8227.4928.1827.7580.883.18528.627.6526.9127.8728.7528.728.8227.8828.6727.128.0950.712.54525.5224.7725.4224.8624.9925.9325.6425.4924.4324.625.1650.501.99525.1124.9925.5824.5424.9925.3124.8924.624.4925.0424.9540.341.38524.4224.424.6124.6924.8324.924.6824.4423.882424.4850.331.365通过4024.8324.6824.5224.3924.4824.224.6924.3624.1423.9524.4240.271.12510均数标准差CV%重复性验证试剂声明CV%验证结果试剂阳性判定值检出靶核酸次数检出率（%）通过4010通过4010通过4010通过4010通过4010检测下限验证101001001001001001002021年8⽉10⽇10时55分29验证结果通过通过通过通过通过通过室内质控2.每批检测⾄少有

份弱阳性质控品（第三⽅质控品，通常为检出限的倍）、

份阴性质控品（⽣理1.5-3

311789

10

11

12AB盐⽔）。CD样本

质控+品应排列在版图中间，以防⽌周边效应质控品随机放在临床标本中，参与从提取到扩增的全过程。在⼤规模⼈群筛查时，因⼈群流⾏EFGH率极低（

），⼀旦出现阳性<0.1%结果，对阳性标本采⽤另外⼀到两种更为灵敏且扩增不同区域的核酸检测试剂对原始标本进⾏复核检测，注意操作过程中防⽌阳性质控污染样本复核阳性⽅可报出。2021年8⽉10⽇10时55分30批次/⽇期1ORF1ab

(CT)29.0926.7627.2727.4927.827.3129.3726.8227.4928.1828N(CT)28.627.6526.9127.8728.7528.728.8227.8828.6727.129.0926.7627.2727.4927.827.3129.3726.8227.4928.182827.528.328.327.6室内质控图23456789阳性判定值302928272625242310111213141516171819202122232425262728293031均数标准差28.627.627.52829.629.328.627.326.828.927.828.629室内质控记录1

2

3

4

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6

7

8

9

10

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26

27

28

29

30

31ORF1ab

(CT)

29.26.27.27.27.27.29.26.27.28.2828.27.27.2829.29.28.27.26.28.27.28.2928.2929.29.25.27.26.N(CT)28.27.26.27.28.28.28.27.28.27.29.26.27.27.27.27.29.26.27.28.2827.28.28.27.26.28.2928.28.2828.42926.928.62928.328.62829.629.325.627.326.828.041.0027.990.732.602021年8⽉10⽇10时55分CV(%)313.58快检设备室内质控先检测弱阳性质控每次开机质控在控后24h再次检测弱阳性质控品品（浓度为1.5-3.0检测样本检测限）和阴性质控品（⽣理盐⽔）单通量每次开机先检测弱阳性质控品（浓度每次开机质控在控个标本后50再次检测弱阳性质控品检测样本为检测限）1.5-3.0和阴性质控品（⽣理盐⽔）通量8-162021年8⽉10⽇10时55分32室间质评3.实验室应常态化参加国家级或省级临床检验中⼼组织的室间质评。对检测量⼤以及承担重点⼈群筛查等任务的实验室，要适当增加室间质评频率。•••结果判定：所有批次应全部合格，得分应为100%不按要求参加室间质评的，或室间质评结果不合格的，或检测结果质量问题突出的，不得开展核酸检测。2021年8⽉10⽇10时55分33承担集中隔离点实验室室间质评变DELTA异株核酸检测室间质评2021年8⽉10⽇10时55分34六、核酸检测结果反馈基本要求（⼀）报告时限（

）TAT

发热⻔诊、急诊患者，在6⼩时内报告核酸检测结果；普通⻔诊、住院患者及陪护⼈员等⼈群，原则上在

⼩12时内报告结果；愿检尽检

⼈群，⼀般在

⼩时内报告结果。“”24医疗机构应当为受检者出具检测报告，并告知其查询⽅式，不得以任何理由不出具检测报告。（⼆）检测报告各医疗机构应当按照《新型冠状病毒核酸检测报告单》的参考样式出具检测报告（⻅附件）在卫⽣健康⾏政部⻔的规定下，互认检测结果。医疗机构可采⽤纸质、快递、⽹络或信息化系统等多种形式，发放核酸检测报告，并注意保护个⼈隐私。发20现21

核8

酸10检1

0测5阳5

性结果时应按相关要求在

⼩时内报告1235年

⽉

⽇

时

分七、核酸检测安全管理（⼀）标本安全管理标本转运箱封闭前

须使⽤

酒精或

含氯消毒剂喷洒消,

75%

0.2%毒。标本包装应符合国际⺠航组织⽂件

《危险品航空安全Doc9284运输技术细则》的

分类包装要求。PI602根据当前版本的国际航空运输协会（

）《危险品规则》，IATA感染疑似和确诊患者标本属于类⽣物物UN3373BSARS-CoV-2质。涉及外部标本运输的，应按照

类感染性物质进⾏三层包装。B2021年8⽉10⽇10时55分36疑似或确诊患者标本应标示有特殊标识，并进⾏单独转运。检测完成后的剩余标本检测完成后的剩余标本，可在结果报告发出到达其保存时限要求后，如为检测前⾮灭活标本，则装⼊专⽤密封废物转运袋中进⾏压⼒蒸汽灭菌处理，随后随其他医疗废物⼀起转运出实验室进⾏销毁处理；如为检测前已灭活标本，则⽆需⾼压灭活，直接按医疗废物⼀起转运出实验室进⾏销毁处理。•检测前⾮灭活标本检测前已灭活标本2021年8⽉10⽇10时55分37（⼆）实验室检测安全管理•ꢀꢀ

基本要求1.核酸检测应当在⽣物安全⼆级实验室进⾏，并应在⽣物安全⻛险评估的基础上，采取适当的个体防护措施，包括⼿套、⼝罩和隔离⾐等。开展新冠病毒核酸检测的实职业暴露处理程序标本洒溢处理程序验室应当制定实验室⽣物安全相关程序⽂件及实验室⽣物安全操作失误或意外的处理操作程序，并有记录。急救箱实验室应准备⼀个完备的⼩药箱，专供急救时使⽤。药箱内备有：医⽤酒精、红药⽔、紫药⽔、⽌⾎粉、创⼝贴、烫伤油膏(或万花油)、⻥肝油、1％硼酸溶液或2％醋酸溶液、1％碳酸氢钠溶液、20％硫代硫酸钠溶液、医⽤镊⼦和剪⼑、纱布、药棉、棉签、绷带等。2021年8⽉10⽇10时55分38实验前安全要求2.应使⽤

含氯消毒剂或

酒精进⾏桌⾯、台⾯及地⾯消0.2%

75%•毒。消毒液需每天新鲜配制，不超过

⼩时。24转运⾄实验室的标本转运桶应在⽣物安全柜内开启。••转运桶开启后，使⽤

含氯消毒剂或

酒精对转运桶内0.2%75%壁和标本采集密封袋进⾏喷洒消毒。取出标本采集管后应⾸先检查标本管外壁是否有破损、管⼝是否泄露或有管壁残留物。确认⽆渗漏后，推荐⽤

含氯0.2%•••消毒剂喷洒、擦拭消毒样品管外表⾯（此处不建议使⽤酒精，以免破坏样品标识）。75%如发现渗漏应⽴即⽤吸⽔纸覆盖，并喷洒有效氯含量为的含氯消毒剂进⾏消毒处理，不得对标本继续检测操0.55%作，做好标本不合格记录后需⽴即进⾏密封打包，压⼒蒸汽灭菌处理后销毁。采样管为⾮灭活管，在标本热灭活时，温浴前需旋紧标本采集管管盖，必要时可⽤封⼝膜密闭管盖；温浴过程中可每隔分钟将标本轻柔摇匀

次，以保证标本均匀灭活；温浴后标101本需静置⾄室温或⾄少使⽓溶胶沉降，随后再开盖进⾏10min后续核酸提取。2021年8⽉10⽇10时55分39核酸提取和检测安全要求3.标本进⾏核酸提取和检测时应尽可能在⽣物安全柜内进⾏操作。如为打开标本管盖或其他有可能产⽣⽓溶胶的操作，则必须在⽣物安全柜内进⾏。实验结束后安全要求4.（

）实验室空⽓清洁：实验室每次检测完毕1后，可采⽤房间固定和

或可移动紫外灯进⾏/紫外照射2⼩时以上。必要时可采⽤核酸清除剂等试剂清除实验室残留核酸。（

）⼯作台⾯清洁：每天实验后，使⽤20.2%含氯消毒剂或

酒精进⾏台⾯、地⾯消毒。75%2021年8⽉10⽇10时55分40（

）⽣物安全柜消毒：3•耗材废弃物放⼊医疗废物垃圾袋中，包扎后使⽤

含0.2%有效氯消毒液或

酒精喷洒消毒其外表⾯。⼿消毒后将垃75%圾袋带出⽣物安全柜放⼊实验室废弃物转运袋中。试管架、实验台⾯、移液器等使⽤

酒精进⾏擦拭。75%随后关闭⽣物安全柜，紫外灯消毒

分钟。30（

）转运容器消毒：转运及存放标本的容器使⽤前后需使4⽤

含氯消毒剂或

酒精进⾏擦拭或喷洒消毒。0.2%

75%（

）塑料或有机玻璃材质物品消毒：使⽤

含氯消毒剂50.2%或过氧⼄酸或过氧化氢擦拭或喷洒消毒。2021年8⽉10⽇10时55分41（三）实验室医疗废物管理。医疗废物包括：标本、核酸提取板、利器盒（⽣物安全柜内物品）、HEPA、防护服、隔离⾐、⼿套等、扩增产物ꢀꢀ

基本要求1.应制定医疗废物处置程序及污物、污⽔处理操作程序。所有的危险性医疗废物必须按照统⼀规格化的容器和标示⽅式，完整且合规地标示废物内容。医疗废物处理记录表收集⽇期废物种类数量或重量收集⼈处理⽇期处理⽅法焚烧深埋处

理

⼈⽉

⽇⽉

⽇⽉

⽇⽉

⽇⽉

⽇⽉

⽇⽉

⽇⽉

⽇⽉

⽇⽉

⽇⽉

⽇⽉

⽇⽉

⽇⽉

⽇⽉

⽇⽉

⽇⽉

⽇⽉

⽇⽉⽇⽉⽇应当由经过适当培训的⼈员使⽤适当的个⼈防护装备和设备处理危险性医疗废物。实验室应建⽴医疗废物处理记录⽉⽇⽉⽇⽉⽇⽉⽇⽉⽇⽉⽇⽉⽇定期对实验室排⻛更换过滤器进⾏捡漏和HEPA⽉⽇⽉⽇⽉⽇⽉⽇定期对处理后的污⽔进⾏监测，采⽤⽣物指⽉⽇⽉⽉⽉⽉⽇示剂监测压⼒灭菌效果。⽇⽇⽇2021年8⽉10⽇10时55分42医疗废物的处理措施2.（

）废液的处理1实验室产⽣的废液可分为普通污⽔和感染性废液。普通污⽔：产⽣于洗⼿池等设备，对此类污⽔应当排⼊实验室⽔处理系统，经统⼀处理达标后进⾏排放。感染性废液：在实验操作过程中产⽣的废液，需采⽤化学消毒（含氯消毒剂处理）或物理消毒0.55%（紫外照射

分钟以上）⽅式处理，确认彻底消毒灭活后⽅可排⼊实验室⽔处理系统，经统⼀处理达标30后进⾏排放。污⽔消毒处理效果按《医疗机构⽔污染物排放标准》相关规定进⾏评价。GB18466（

）固体废物的处理2实验室固体废物应当分类收集。固体废物的收集容器应当具有不易破裂、防渗漏、耐湿耐热、可密封等特性。实验室内的潜在感染性废物不允许堆积存放，应当及时进⾏压⼒蒸汽灭菌处理。废物处置之前，应当存放在实验室内指定的安全位置。⼩型固体废物如检测耗材、个⼈防护装备等均需使⽤双层防渗漏专⽤包装袋打包密封后经过压⼒蒸汽灭菌处理，再沿医疗废物通道转运出实验室。体积较⼤的固体废物如

过滤器

应当由专业⼈⼠进⾏原位消毒后

装⼊安全容器内进⾏消毒灭菌。HEPA,,不能进⾏压⼒蒸汽灭菌的物品如电⼦设备可采⽤环氧⼄烷熏蒸消毒处理。经消毒灭菌处理后移出实验室的固体废物需集中交由医疗废物处理单位进⾏处置。2021年8⽉10⽇10时55分432021年8⽉10⽇10时55分44ꢀ（四）实验室污染的处理标本污染⽣物安全柜的操作台造成局限污染时：⽴即⽤吸1.•⽔纸覆盖，并使⽤

含氯消毒剂进⾏喷洒消毒。消毒液需要现⽤现配，0.55%⼩时内使⽤。24标本倾覆造成实验室污染时：保持实验室空间密闭，避免污染2.•物扩散。⽴即使⽤润湿有

含氯消毒剂的⽑⼱覆盖污染区。必要时（如0.55%⼤量溢撒时）可⽤过氧⼄酸加热熏蒸实验室，剂量为

，熏蒸过夜；或2g/m³过氧⼄酸消毒液⽤⽓溶胶喷雾器喷雾，⽤量20g/L，作⽤

⼩时；必8ml/m³

1-2要时或⽤⾼锰酸钾

甲醛熏蒸：⾼锰酸钾

，放⼊耐热耐腐蚀容器（陶罐8g/m³-或玻璃容器），后加⼊甲醛（

），熏蒸

⼩时以上。熏蒸时室内40%

10ml/m³4湿度。60%-80%清理污染物时严格遵循活病毒⽣物安全操作要求，采⽤压⼒蒸汽灭菌处理，3.•并进⾏实验室换⽓等，防⽌次⽣危害。2021年8⽉10⽇10时55分45⼋、核酸检测信息化管理医疗机构应当在卫⽣健康⾏政部⻔统筹下，做好标本采集、核酸检测、检测报告的信息对接⼯作。建⽴统⼀的信息采集扫码程序，信息应⾄少包括姓名、性别、年龄、身份证号、联系电话，做到标本采集的个⼈信息与医疗机构信息系统顺利对接，各医疗机构间应做到信息互通、互采、互认。2021年8⽉10⽇10时55分46九、标本混采在⼈群筛查时可以考虑采⽤混采的⽅案进⾏，以提升核酸检测效率。混合标本数可以为

个或者1010:15:1低⻛险地区个以下（如

合

）。5

110以

合

或

合

混采为例，10

1

5

1混采与单检流程不同的主要为采集、送检和检测结果的处理。其余⼯作要求均与单检相同。中⻛险地区⾼⻛险地区实施⽅案1:12021年8⽉10⽇10时55分47（⼀）采集和送检流程标识及信息登记。1.（

）登记流程。⼯作⼈员在采集前分配

个或

个受检者为⼀组，采集前收集并登记受检者相关信10

51•息（包括姓名、性别、身份证号、联系电话、采集地点、采集⽇期和时间），按照组别进⾏采集管编号。（

）登记要求。推荐使⽤身份证读卡器、⼆维码条码等信息化⼿段关联受检者信息，提⾼信息读取效率和准确性。如不具备信息化条件，应当提前登记《新冠病毒核酸

合

或

合

混采检测登记10

1

5

12•表》（举例⻅附件

的

合

混采，以下简称混采登记表）。纸质登记表随标本送检前应当备份存档2

10

1于采集点所在社区，便于及时追溯受检者。合

混采10

1按照组别进⾏采集管编号。最好使⽤身份证读卡器、⼆维码条码等个受检者或

个受检者编为⼀组105保证标本信息的可追溯性合

混采5

12021年8⽉10⽇10时55分482.标采集和混合拭⼦将完成采集的

⽀或

⽀拭⼦放⼊同⼀10

5合

采样管保存液应10

1采集管（为

，

合

采样管保存液与6mL

5

1单检采样管相同，为3mL）中，动作轻柔，避免⽓溶胶产⽣。连续采旋紧管盖，集

⽀或

⽀拭⼦以后，10

5防⽌溢洒。如采集管内拭⼦不⾜⽀或

⽀，应做好特殊标记并记10

5录。3.标本送检核对采集管标签与混采登记表信息，确保准确完整，编号⼀致。2021年8⽉10⽇10时55分10合1混采对结果有影响吗？拭⼦材质：宜选⽤聚酯、尼⻰等⾮棉质、⾮藻酸钙材质的拭⼦，且柄部为⾮⽊质材料。折断点位于距拭⼦头顶端左右，易于3cm折断。10ml6ml样本采集管中保存液由

增加到3ml6ml（

稀释），其循环阈值（病毒保存液：胍盐或其他有效病毒灭活剂保存液。有易于观察、辨识的颜⾊

如粉红1:2

cycle，

）增加threshold

Ct3.32⨉Log2=0.99932≈1.0左右(⾊

。)5ml3ml2021年8⽉10⽇10时55分50（⼆）标本检测要求震

洗脱核酸提取核酸检测检测前必须进⾏充分震荡，保证所有拭⼦采集到的上⽪细胞充分洗脱•应使⽤检测试剂⼚家推荐的提取试剂推荐使⽤包含ORF1ab、N基因区的试剂••••建议选择检测限低、灵敏度⾼的试剂盒（≤500copies/ml）提取试剂应与提取仪配套磁珠法柱提法注意检测试剂敏感度⾼不等于实验室检测系统敏感度⾼及时观察样本检测整体情况，如果出现阳性结果偏多，尤其出现较多单靶阳性或弱阳性结果，则很可能有污染的存在不当的核酸提取对检测性能影响较⼤（不同的提取试剂磁珠的吸附效率、核酸提取样本量、洗脱体积不同）这是检测前保证标本质量，防⽌假阴性结果的重要环节。51（三）检测结果的处理⿐咽拭⼦

咽拭⼦合

混采结果10

1/结果判断1.混采检测结果为阳性、灰区或单个靶标阳性，通知相关部⻔灰区结果未检出

阴性阳性或单靶标阳性/对该混采管的

个或

个受试者10

5暂时单独隔离，并重新采集单

直接回报通知有关部⻔对该混采管的

个10受试者暂时隔离管拭⼦进⾏复核。疾控复核2.复核单管核酸检测如均为阴性，重新采集单管拭⼦复核则按照阴性结果报告。暂时隔离⼈员即解除隔离；如检测结果阳性，按程序上报。单管核酸检测均为阴性，按阴性结果回报检测结果阳性按程序上报暂时隔离⼈员即解除隔离2021年8⽉10⽇10时55分52⼗、其他要求因疫情防控需要等因素，医疗机构采集的标本量明显超出⾃身检测能⼒范围的，可以建⽴医疗机构间新冠病毒核酸检测协作机制，分散检测压⼒，保证时效性和有效性。•与开展新冠病毒核酸检测的医疗机构或第三⽅检验机构合作注意签订合作协议符合要求的样本转运结果报告⽅式，隐私保护2021年8⽉10⽇10时55分53附：

实验室污染与对策PCR⼀、污染原因标本污染试剂的污染

扩增产物污染2.

3.1.收集标本的容器被污染；标本放置时，由于密封不严溢于容器外；主要是在

试剂PCR配制过程中，由于加样器、容器、⽔及其它溶液被PCR核酸模板污染。这是

实验室中最主要、最常PCR⻅的污染。

产物数量⼤，远PCR远⾼于

检测的最低极限，所PCR容器外粘有标本造成相以极微量的

产物污染，就可PCR.形成假阳性互间交叉污染;⼋连管质量⽋佳或加

试剂操PCR标本核酸模板在提取过程中，由于加样器污染作不当加⼊⽓泡，导致扩增时膜盖滚起，扩增产物泄露。扩增产物应及时密闭处理，不可随意打开盖⼦、随意丢弃。导致标本间污染;有些微⽣物标本尤其是病毒可随⽓溶胶或形成⽓溶胶⽽扩散，导致彼此间的污染.2021年8⽉10⽇10时55分54⼆、污染监测实验室要时刻注PCR意污染的监测，判断有⽆污染、什么原因造成的污染，以便采取措施，防⽌和消除污染。连续监测

综合分析污染监测阴性对照是最重要的设置。阴性对照应随机放置。1.阴性对照的设置阴性对照单次阴性并不能完全确定整个过程

⽆污染发⽣，每⽇连续监测综合分析很重要。阴性对照阳性提示整个试验过程存在污染，

必须引起重视。每次试验过程都要设置数量不等的阴性对照，以监测污染是否发⽣。标本核酸提取过程中带⼊的⼀个空管阴性原样本仅含扩增反应液的对照管1.基本功能与阴性原⾎清样本相同；1.监测实验室以前扩增产物的污染；2.由实验操作所致标本间的交叉污染；1.2.监测扩增试剂是否发⽣污染，具有较强的污染鉴别能⼒。打开静置于标本制备区

～

分钟，

然后加⼊反应液，以⽔替代核酸样本进⾏扩增，如为阳性，⽽上述仅含扩增反应液的对照管为阴性，则说明实

验室以前扩增产物的存在。30

602.其样本为⽔，不含可能存在的扩增抑制物，因⽽对污染的反映更为灵敏；但不能取代原⾎清阴性样本。3.扩增反应试剂的污染。2021年8⽉10⽇10时55分55阳性对照的设置2.试验应设阳性对照，它是试验是否成功的⼀个重

要的参考标志；PCR阳性对照要选择扩增度中等、重复性好的标本；强阳

性对照可产⽣⼤量不必要的扩增序列，反⽽可能成为潜在的污染源。2021年8⽉10⽇10时55分56三、⻛险点监测核酸污染⻛险序号

分类检测点表⾯表⾯表⾯表⾯仪器仪器仪器移液器⻔把⼿传递