组织切片的染色-苏木精伊红染色的染料种类

病理检验技术

常规组织病理技术组织切片的染色苏木精-伊红染色的染料种类苏木精一伊红染色

苏木精(hematoxylin)和伊红(casin)简称HE。苏木精和伊红两种染料联合染色称HE染色。是病理学和组织学最常应用的一种染色方法，即苏木精把胞核染成蓝色，伊红把细胞质、胶原纤维和肌纤维、红细胞等染成深浅不同的红色。常规HE染色是病理学制片技术最基本的方法，HE制片是临床病理诊断的基本手段和重要依据。苏木精-伊红染色的染料种类一、苏木精染料1.苏木精的性质苏木精为一种无色或淡灰黄色粉末，分子式为C16H14O6，分子量为302.288，市售有无水和含3个结晶水两种。苏木精存放过久或与空气接触，可慢慢被氧化而颜色变深，用被氧化的苏木精配制染液会影响染色效果。苏木精易溶于乙醇、甘油，微溶于水，是细胞核的良好染料。苏木精本身无染色能力，经氧化成为苏木红后，才成为一种染料。苏木精被氧化成苏木红，这个过程又称为成熟。苏木精-伊红染色的染料种类一、苏木精染料2.苏木精的氧化用苏木精配制苏木精染色液时，需将苏木精氧化为苏木红。苏木精氧化有：自然氧化和人工氧化。自然氧化：把配制好的苏木精染色液暴露于日光和空气中。特点：氧化慢，但保存的时间较长。人工氧化：在配制苏木精染色液时加入一定量的氧化剂，如氧化汞、碘酸钠、高锰酸钾或铁盐等使苏木精立即被氧化成熟。特点：氧化快速、但要掌握好氧化剂的量，避免过度氧化或氧化不足。常用的氧化剂是氧化汞和碘酸钠。

氧化汞难溶于水，通过加热才能起强氧化作用，所以配制

Hamis苏木精染液时，要煮沸苏木精溶液后才加入氧化汞，之后又需要迅速冷却，避免过度氧化，这也是Harris苏木精染液不易配好的原因。

碘酸钠是目前首选的氧化剂在常温下加入即可起氧化作用。理论上，1g苏木精·3H2O被完全氧化成苏木红需185mg碘酸钠，而1g无水苏木精被完全氧化成苏木红需碘酸钠218.2mg。在实际配制苏木精染液时，常用半量碘酸钠，目的是先使部分苏木精氧化成苏木红，染液中未被氧化的苏木精在染液保存和使用过程中再慢慢被空气氧化成苏木红。这样染液既不会过染，又不断有新的苏木红形成和补充，从而可延长苏木精染液的使用寿命。但碘酸钠用量过少，形成苏木红少，染液染色力弱，染色时间需延长。

苏木精-伊红染色的染料种类一、苏木精染料2.苏木精的氧化

影响苏木精氧化的因素

1)苏木精染液pH：染液偏碱性氧化快，中性时稍慢，酸性时很慢。通常在苏木精染液加冰醋酸或柠檬酸延缓氧化。

2)氧化剂的量：加入人工氧化剂后苏木精可立即被氧化成熟可用。自然氧化和供氧量有关，如把染液靠近阳光、染液通风、经常摇动等可加速氧化。

3)温度：用碘酸钠等作为氧化剂时，在常温下加入即可，而用氧化汞作为氧化剂时，需把苏木精液煮沸时加入才能放氧。

苏木精-伊红染色的染料种类一、苏木精染料3.媒染剂和苏木精的染色机制

苏木精被氧化成苏木红，苏木红为弱酸性，呈红色，仍不具染色力。用单纯的苏木红液染组织,呈弥浸性染色，而且着色浅淡，但当苏木红液加入二价或三价的金属盐(如铝盐和铁盐)后，苏木红就能与这些金属盐结合形成色淀。这些色淀带有正电荷，能与细胞核牢固结合。这种二价或三价的金属盐称为媒染剂。苏木精-伊红染色的染料种类一、苏木精染料4.配制各种苏木精染液所需试剂种类和作用（1）苏木精染色液的种类：苏木精染色液有多种，如Ehrlich、

Harris、

Mayer、Carazzi、改良

Lillie-Mayer和Gill等。（2）配制苏木精染液所需试剂的作用

1)氧化汞、碘酸钠：氧化剂，使无染色力的苏木精经氧化后转变成有染色力的苏木红。

2)硫酸铝钾、硫酸铝铵或硫酸铝：媒染剂，其三价铝离子与苏木红结合形成蓝色色淀与细胞核内核酸的磷酸根牢固结合。

3)无水乙醇：能快速溶解苏木精，并可抑制真菌的生长。苏木精-伊红染色的染料种类和配置方法（2）配制苏木精染液所需试剂的作用

4）乙二醇：一种醇类，能较快溶解苏木精。因其沸点高，使苏木精染液不易蒸发。5）甘油：稳定剂，防止苏木精过度氧化，减少苏木精染液蒸发，延长苏木精染液的使用时间。

6）冰醋酸：可抵消氧化剂的氧化，使苏木精与苏木红保持均衡，同时又可增加细胞核的选择性染色，使细胞核染色质显示清晰细致。7）柠檬酸：作用和冰醋酸相同，加入柠檬酸1g，相当于冰醋酸20ml。8）水合氯醛：起保护剂作用。苏木精-伊红染色的染料种类和配置方法一、苏木精染料5.常用苏木精染液的种类

苏木精染液配制的好坏，决定染色的质量。苏木精液配制法有近20种，加上各种改良的方法则更多。常用的苏木精染液主要有：改良lillie-mayer、

Harris、mayer、Gill、

Ehrlich和

Carazzi六种。

国内外已有多种配好的苏木精染液出售。如美国SIGMA公司的Gill苏木精液有3种规格，Gill

No.1是常规浓度，属进行性染色，染色后不需用盐酸-乙醇分化，适用于细胞学染色；Gill

No.2其浓度是

Gill

No.1的1倍，也是进行性染液，用于细胞学涂片和石蜡切片染色；Gill

No.3其浓度是

Gill

No.1的2倍，属退行性染色，染色后需要用盐酸一乙醇分化，主要用于石蜡切片染色。也有

Mayer和改良

Harris苏木精染液制成品出售，改良

Hamis苏木精染液是用碘酸钠代替氧化汞作为氧化剂。

临床病理HE常规制片染色中，以改良

lillie-mayer苏木精染液为佳，Mayer苏木精染液常用于免疫组化染色和特殊染色后复染细胞核，其他的几种苏木精染液可根据各自实验室的情况选用。

苏木精液染色属于进行性染色还是退行性染色，由苏木精染液内苏木精的浓度和被氧化程度而定。如Harris苏木精染液中，苏木精被氧化程度高，染色力强，虽染色时间短,但也可使细胞核、细胞质和纤维过染，染色后需用盐酸-乙醇分化，属退行性染色；Mayer苏木精染液中苏木精的浓度较低，被氧化程度也低，染色力较弱，细胞核染色不会过染，细胞质和纤维不着染，染色后不需用盐酸-乙醇分化，属进行性染色；而改良Lillie-Mayer苏木精染液和原

lillie-Mayer苏木精染液在配制后可立即使用，染色后不需用盐酸一乙醇分化，但在使用一段时间后，苏木精被进一步氧化，染色力增强，可使细胞核深染，细胞质和纤维也稍着色，这时需用盐酸-乙醇分化，使过染的细胞核适当脱色及着染的细胞质和纤维脱色，才有利于与伊红的对比染色。

苏木精-伊红染色的染料种类和配置方法一、苏木精染料

6.苏木精染液的鉴定苏木精染液配制是否理想，可从以下几方面来鉴定：

(1)将几滴苏木精染液滴入一盆自来水内，在滴下的一瞬间由红色转为紫色再转为紫蓝色慢慢扩散，说明苏木精染液配制质量好；若在扩散中仍保持红色，说明未足够成熟或陈旧的苏木精染液。(2)取一块滤纸滴入苏木精染液两滴，苏木精液在滤纸上扩散后不久将呈一紫酱色的圆斑，而在圆斑的周边最后呈黑紫色，说明苏木精染液好。若周边不呈深紫色，说明该染液配制的不好。(3)Ehrlich苏木精染液，配制得好时稍具有酒香味，染液为深紫红色，轻摇瓶子时瓶壁上的染液慢慢向下流。(4)最理想的方法是实际操作中染一张阑尾切片，阑尾组织中淋巴滤泡内的淋巴细胞核深蓝，细密的核染色质与周围组织对比非常清晰。苏木精-伊红染色的染料种类和配置方法一、苏木精染料

7.苏木精染色后分化和蓝化

(1)分化(differentiation)：苏木精为细胞核染料。但组织切片经苏木精染色后，除胞核染色会过染外，细胞质、胶原纤维和肌纤维等也会附有少量苏木精染料而着色，这就需用某些特定的溶液把过染的胞核和不应着色的组织成分脱色，从而使着染的目的物与周围组织对比清晰。这种选择性脱除非目的物的染料的过程称为分化，所用的特定溶液称分化液。常用分化液为0.5%～1%的盐酸一乙醇，分化时间为2～5秒。组织着染苏木精后经盐酸-乙醇分化，在酸性环境产生很多H+，使组织表面的电荷发生改变，先前染色所形成的色淀解离，与组织结合的染料便慢慢脱下来。但分化时间要掌握好。苏木精-伊红染色的染料种类和配置方法一、苏木精染料

7.苏木精染色后分化和蓝化

(2)蓝化(blueing)：组织经苏木精液染色后呈蓝色，经过盐酸-乙醇分化，在酸性环境中呈红色，当转移至流水中将酸冲洗干净后又变成蓝色。组织经酸分化从红色又恢复为蓝色的过程，称为蓝化。这种蓝→红→蓝变色的现象，是苏木红和铝离子所形成的蓝色色淀的结合、解离和再结合的过程。一般来说，蓝色色淀在酸性环境中处于离子状态，呈红色，这种现象称色淀解离；相反，红色离子状态的色淀，在中性或碱性环境中处于结合状态呈蓝色，这时称色淀形成。即苏木精染色需要在酸性环境中脱色，在中性或碱性环境中显色。苏木精-伊红染色的染料种类和配置方法一、苏木精染料

7.苏木精染色后分化和蓝化通常组织切片在盐酸-乙醇分化至适度后，用流动自来水冲洗10～20分钟，切片蓝化。在冬季水温低时(10℃以下)蓝化缓慢，改用温水则可加速蓝化。此外，要缩短蓝化时间可用碱性试剂代替流水冲洗加速蓝化，这类碱性试剂称为促蓝液。常用促蓝液有Scott促蓝液、0.1%～1%的氢氧化铵水溶液和1%的碳酸锂水溶液。组织切片在盐酸-乙醇分化后用水稍洗即置入促蓝液内2～3秒以完成蓝化，蓝化后流水冲洗3～5分钟即可以进行伊红染色。苏木精-伊红染色的染料种类和配置方法一、苏木精染料

7.苏木精染色后分化和蓝化

（3）促蓝液的配制1）Scott促蓝液碳酸氢钠(sodium

bicarbonate)0.2g无水硫酸镁(magnesium

sulphate，anhydrous)1g蒸馏水100ml麝香草酚(thymol)少量苏木精-伊红染色的染料种类和配置方法一、苏木精染料

7.苏木精染色后分化和蓝化

（3）促蓝液的配制2）氢氧化铵水溶液氢氧化铵(ammonium

hydroxide)0.3ml蒸馏水100ml3）碳酸锂水溶液碳酸锂(lithium

carbonate)1g蒸馏水100ml苏木精-伊红染色的染料种类和配置方法二、伊红染料

1.伊红的性质伊红(cosin)又称曙红，属人工合成染料中的呫吨类染料，为桃红色或粉红色的粉末。分子式为

C20H6O5Br4Na2，分子量为691.906。伊红最适宜与苏木精配合染色以显示正常或病理组织的形态结构。伊红是由荧光素衍生而来，有多种。临床病理诊断技术中，常规HE染色常用是水溶性伊红Y和醇溶性伊红Y。