特殊染色技术

病理检验技术

特殊染色技术结缔组织和肌纤维染色法病原微生物染色法病理性沉着物染色法色素染色法内分泌腺及其包质颗粒染色法神经组织染色法脂质染色法核酸染色法糖类染色法酶类染色法结缔组织在广义上包括多种组织成分,狭义上是指其含有的三种纤维,即胶原纤维、网状纤维和弹性纤维。这三种纤维广泛分布于身体各处,常见于器官与器官之间,组织与组织之间以及细胞与细胞之间。这些纤维具有支持连接、营养、防御保护和创伤修复等功能。这三种纤维在苏木精-伊红(HE)染色中有时难以区别,特别是在某些病理改变时。因此在病理诊断上常常要借助于特殊染色进行鉴别。一、结缔组织和肌纤维染色法胶原纤维染色在病理诊断上主要用于和肌纤维的鉴别。常用于显示胶原纤维的方法有改良

VanGieson苦味酸丽春红S法(简称改良V.G.法)、

Masson三色法和Mallory三色法等。所谓三色染色通常是指染胞核和能选择性地显示胶原纤维和肌纤维。其实V.G.法也是一种三色法,不过习惯上不称三色法。丽春红酸性品红-苯胺蓝法(

Masson三色法)

(改良

Masson)(-)试剂1.天青石蓝液2.Mayer苏木精液3.丽春红酸性品红液4.1%的磷钼酸5.2%的苯胺蓝液6.1%的冰醋酸

(二)染色步骤1.组织固定于10%的甲醛液中,常规脱水包埋。2.切片厚4um,常规脱蜡至水。3.切片置入Bouin液。于室温作用一晚或置入37℃的温箱内2小时进行媒染,然后流水冲洗至切片上的黄色消失。4.天青石蓝液滴染2-3分钟。5.稍水洗。6.Mayer苏木精液滴染2~3分钟。7.稍水洗。8.1%的盐酸乙醇分化。9.流水冲洗10分钟。10.丽春红酸性品红液滴染10分钟。11.蒸馏水稍冲洗。12.1%的磷钼酸处理约10分钟。13.倾去上液,切片不用水洗,直接滴入2%的苯胺蓝液染5分钟。14.1%的冰醋酸水溶液处理2分钟。15.95%的乙醇快速脱水。16.无水乙醇(Ⅰ)、(Ⅱ)、(Ⅲ),各5~10秒。17.二甲苯(Ⅰ)、(Ⅱ)、(Ⅲ),各1~2分钟。18.中性树胶封固。(三)结果胶原纤维呈蓝色,肌纤维、胞质、纤维素、角蛋白和红细胞呈红色,胞核呈蓝褐色。常用的弹性纤维染色有醛品红法、间苯二酚碱性品红法、地衣红法、铁碘苏木精法、维多利亚蓝法(Tanaka)、苔黑酚新品红法(Fullmer-Lillie)、稀释间苯二酚碱性品红法(Hart)等维多利亚蓝法(根据

Tanake)(一)试剂1.酸化高锰酸钾液2.2%的草酸3.30%的三氯化铁4.维多利亚蓝染液5.核固红染液(二)染色步骤

1.组织固定于10%的甲醛液中,常规脱水包埋。2.切片厚4um,常规脱蜡至水。3.酸化高锰酸钾液氧化5分钟。4稍水洗。5.2%的草酸水溶液漂白2分钟,至高锰酸钾着色全部脱去。6.流水冲洗5分钟。

7.70%的乙醇浸洗。8.置入维多利亚蓝液浸染(加盖)24小时。9.70%的乙醇浸洗2次,每次约10秒,其间把切片提起放下,至切片无染液脱出为止。10.流水稍冲洗。11.核固红染胞核5~10分钟。12.稍水洗。13.常规脱水透明,中性树胶封固。(三)结果

弹性纤维呈蓝色,胞核呈红色。二、病原微生物染色法病原微生物包括细菌、真菌、病毒等。细菌染色常用革兰(Gram)法，可把细菌区分为两类。标本先用结晶紫染色,再加碘媒染,使之生成结晶紫-碘复合物,此时不同细菌均被染成蓝紫色。继后通过用苯胺、丙酮等分化处理,仍保持不脱色的为Gram阳性菌,完全脱色的或经碱性品红、碳酸锂胭脂红染成红色的为Gram阴性菌。真菌用HE染色一般着色不良,因此,用特殊染色方法显示,高碘酸无色品红法可显示大多数真菌,这是广泛采用的常规检验方法。无色品红-醛品红法和六胺银法适用于曲菌、白色念珠菌等,特别是六胺银法对马尔尼菲青霉菌和毛霉菌的染色效果甚佳,新型隐球菌主要应用黏液朋脂红法或爱尔新蓝法(pH2.5),也可用六胺银法显示。抗酸菌幽门螺杆菌螺旋体乙型肝炎病毒

抗酸染色是指对抗酸杆菌而言。抗酸杆菌属分枝杆菌,由于菌体胞体壁上含有不等量的类脂质,主要是磷脂、脂肪酸和蜡质三种成分,故一般不易着染。但一旦着染后可抵抗酸的脱色作用,故称为抗酸菌。常见的抗酸菌为结核杆菌和麻风杆菌。显示抗酸杆菌传统是采用

Ziehl-Neelsen法,该法是用碱性品红和苯酚进行染色,在染色时进行加热处理,以促进染液对菌体穿透。其后Wade-Fite在

Ziehl-Neelsen法的基础上进一步改良。下面的方法是根据此法稍改进,效果良好。

苯酚碱性品红法(抗酸染色)

(改良Wade-fite）(-)试剂1.汽油松节油混合液

2.碱性品红乙醇液3.5%的苯酚4.苯酚碱性品红液5.20%的硫酸

(二)染色步骤

组织固定于10%的甲醛液中,常规脱水包埋。

2.切片厚4um。

3.切片在汽油松节油混合液脱蜡2次,每次约5~10分钟。

4.用吸水纸将切片周围余液抹干,但切片应保持稍湿润。

5.流水漂洗1分钟。

6.滴入苯酚碱性品红液于室温染20~30分钟。7.流水洗去多余染液。

8.20%的硫酸分化。

9.流水冲洗5分钟。

10.

Mayer苏木精浅染胞核。

11.流水冲洗10分钟。

12.于50~60℃烘箱烘干,经二甲苯透明,中性树胶封固。(三)结果

抗酸菌(包括麻风杆菌和结核杆菌)呈红色,胞核呈蓝色。

三、病理性沉着物纤维素：显示纤维素和纤维素样变的方法有Mallory磷钨酸苏木精法和改良的Gram-Weigert法,此两法把纤维素染成蓝紫色至蓝黑色。

Lendrum等介绍的马休黄猩红蓝法(MSB)把纤维素染成红色,颜色较鲜艳。淀粉样蛋白在切片上显示淀粉样蛋白的方法有甲紫及其相关染料的异染法、刚果红染色法、硫酸钠爱尔新蓝染色法、氧化地衣红法、用荧光镜观察的硫代黄素T法等。尿酸盐六胺银法钙盐用以证明钙盐的方法有两种,一种是

Von

kossa的硝酸银法,另一种是茜素红S法。铜显示铜的方法有红氨酸法,若丹明法和二苯硫卡巴腙法等,红氨酸法较敏感,也是传统的染色法。四、色素黑色素：硫酸亚铁法、银氨液浸染法、脱黑色素法含铁血黄素：亚铁氰化钾法、改良滕波尔法脂褐素：三氯化铁氰化钾法、醛品红法胆色素：三氯醋酸三氯化铁法甲醛色素：除甲醛色素方法五、内分泌腺及其胞质颗粒脑垂体细胞：高碘酸-无色品红-橙黄G法胰岛细胞：缓冲硝酸银法、醛品红-橙黄G法、醛品红-荧光桃红法肾上腺嗜铬细胞：甲苯胺蓝法、吉姆萨法类癌肥大细胞六、神经组织尼氏体：缓冲亚甲蓝法、混合染色法神经轴突：硝酸银浸镀法、甘氨酸银浸镀法神经髓鞘：砂罗铬花青R法、碳酸锂苏木精法、四氧化锇法神经胶质细胞：氯化金升汞法七、脂质中性脂肪：苏丹Ⅳ法、油红O法、苏丹黑B法胆固醇和胆固醇酯：硫酸铁铵法、高氯酸萘醌法中性脂和酸性脂：硫酸耐尔蓝法磷脂：酸性苏木红法、吡啶提取法八、核酸酸水解-无色品红法、甲基绿派洛宁法九、糖类糖原：高碘酸-无色品红法、胭脂红法中性粘液物质和酸性粘液物质：酸性粘液物质：黏蛋白：高碘酸-无色品红法、六胺银法十、酶类碱性磷酸酶：