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文档简介

雷晓颖卫生微生物检验系-9410室Email:leixy@PhoneQ/微信：181807790链球菌检验实验目的熟悉链球菌的形态、染色及培养特征。掌握链球菌各鉴别试验原理、方法及用途。实验内容实验课前一天来接种：

用接种环将A群、B群、甲型、肺炎链球菌分别接种一管肉汤培养基，37oC培养24h，备用。观察四种菌分别在两种平板上菌落形态，挑取典型菌落做革兰氏染色，镜下观察各菌形态特征。1杆菌肽敏感试验2CAMP试验3链激酶试验4菊糖发酵试验5Optochin敏感试验6胆盐溶菌试验1、杆菌肽敏感试验原理：

A群链球菌对杆菌肽非常敏感，而其他链球菌对杆菌肽通常耐药，故此试验可鉴别链球菌。步骤：

用棉拭子将待检菌的肉汤培养物均匀密集涂布于血琼脂平板上，稍干后贴一张含0.04U的杆菌肽纸片贴于血琼脂平板表面，37℃培养18-24h观察结果。结果：抑菌圈直径＞10mm为杆菌肽敏感试验阳性，抑菌环＜=10mm说明对杆菌肽耐受。2、CAMP试验原理：B群溶血性链球菌能产生CAMP因子，此种物质可促进金黄色葡萄球菌β溶血素的活性，故在血琼脂平板上两种细菌交界处溶血力增强，形成箭头形透明溶血区。其它链球菌一般不产生CAMP因子。步骤：在血琼脂平板上，先以β溶血的金黄色葡萄球菌划一横线接种。再将待检菌与前一划线作垂直接种，两线不能相交，相距3mm～5mm左右。35℃孵育18h～24h观察结果。同时设阳性（B群链球菌）对照和阴性（A群链球菌）对照。结果：在两种细菌的交界处出现箭头形透明溶血区为阳性，否则为阴性。金葡菌B群A群3、链激酶试验原理：致病性链球菌可产生多种侵袭性酶，链激酶可激活血浆中的血浆素原使其转变为血浆素，血浆素可溶解纤维蛋白。血浆溶解的时间越短说明链激酶越多。内容：取人血浆0.2ml加入含无菌生理盐水0.8ml的试管中，随后各加入待检菌（A群和B群）24h肉汤培养物0.5ml。混匀后加0.25%CaCl20.25ml，置37℃水浴锅中，20min观察结果。结果：15min内完全溶解凝固的血浆为强阳性，

至24h仍不溶解为阴性。4、菊糖发酵试验原理：

肺炎链球菌能发酵菊糖产酸，使培养基pH降低，是培养基变黄色，而甲型溶血性链球菌因不分解菊糖，不产酸，培养管不变色。步骤：

将待检菌接种于菊糖发酵管中，37℃孵育18h～24h观察结果。结果：培养基由紫色变为黄色为阳性，不变色为阴性。

5Optochin试验原理：肺炎链球菌对敏感，而甲型链球菌对其不敏感，故可用于鉴别。步骤（可贴于杆菌肽试验的平板上）

用棉拭子将待检菌的肉汤培养物均匀涂布于血琼脂平板上，贴上一张Optochin纸片，37℃孵育18h～24h，观察抑菌环的大小。结果：抑菌圈直径＞14mm为敏感，抑菌环＜=14mm为不敏感6、胆盐溶菌试验原理：

肺炎链球菌产生的自溶酶，胆汁或胆盐能降低细菌细胞膜上的表面张力、活化肺炎链球菌的自溶酶，促进细菌细胞膜破损或菌体裂解自溶。步骤：

在血琼脂平板上选择出待检的呈草绿色溶血的可疑菌落，

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