雪莲多糖的提取及分离纯化工艺研究本科学位论文

[30]。（3）热效应超声过程中产生空化效应，即在液体中产生气泡和气泡在超声作用下的特殊作用。这些气泡在经历稀疏相和压缩相，气泡生长、收缩、再生长、再收缩，经多次周期性震荡，最终以高速度崩裂，然后闭合，该过程会产生短暂的局部高温、高压。在这个过程中释放的热量可以有效促进原料细胞内部有效成分的扩散作用附录超声辅助提取鬼箭羽叶中的芦丁和槲皮素杨屹；张帆北京化工大学理学院，中国北京，100029，附录超声辅助提取鬼箭羽叶中的芦丁和槲皮素杨屹；张帆北京化工大学理学院，中国北京，100029，摘要：本文对超声辅助提取鬼箭羽叶中芦丁和槲皮素的方法进行了研究。考察了四个对芦丁和槲皮素的提取量的影响。优化的最佳提取条件为：提取溶剂70％乙醇溶液，液固比40:1（V/W），提取时间3×30分钟。对芦丁和槲皮素的回收率和提取方法的重复性进行了测定。实验表明，超声提取方法适用于从干燥的卫矛中提取芦丁和槲皮素。与传统的方法相比，超声波辅助提取是一种从卫矛中提取芦丁和槲皮素更有效的方法。同时，扫描电子显微镜（SEM）显示，同浸渍法相比较，超声处理能够迅速的对植物细胞进行破壁。1.简介中药卫矛植物的使用具有2000多年的历史。芦丁和槲皮素主要应用于心脏和肾等器官疾病的治疗[1]。具有抗菌和抗高血压等生理活性作用。芦丁和槲皮素都可由卫矛植物的茎获得，而且有相同的治疗效力。因此从卫矛植物中提取芦丁和槲皮素是其重要来源。在传统的方法，提取的芦丁和槲皮素是通过加热，煮沸或回流。这个程序的缺点是芦丁和槲皮素在提取过程中发生电离损失，水解和氧化[3-5]。此外，该方法消耗了大量的溶剂和提取时间[6-8]。超声提取是一种近年来新兴的提取方法的，具有提高提取效率产量和缩短提取时间等优点[9,10]。超声波能够使细胞破裂，颗粒变小，超声波辐射作用到固体表面可增加固液接触面积，从而使溶剂成分得到充分利用[11,12]。超声波能提高有机物提取量的现象称为空化作用。当超声波强度达到一定强度，扩张循环能在液体中形成洞或微型气泡。一旦形成，这些气泡会吸收声波的能量，由压缩引起的压力和温度的上升导致气泡的破裂，这会导致崩溃冲击波传递通过溶剂，增加体系内的大量转移[13-15]。目前，超声波以应用于从植物中提取黄酮类化合物等[16]活性的化合物，碳氢化合物[17]，脂肪酸酯[18-20]，抗氧化剂[21]，类固醇[22]及蒽醌[23,24]。到目前为止，利用超声从卫矛中提取芦丁和槲皮素，没有文献报道。因此，使用超声方法研究从干燥的卫矛中提取芦丁和槲皮素显得有必要。本文对芦丁和槲皮素的超声提取条件进行了研究和超声波辅助提取的最佳条件确定。2.材料与方法2.1植物材料中国辽宁省提供的干燥卫矛。对样品进行干燥（24小时，100度）和保存（60目）。样品用之前存放在干燥的地方。2.2浸渍提取浸渍法：1g粉末原料，加入100毫升乙醇作为提取溶剂。该混合物放在室温环境6小时，用搅拌机偶尔搅拌。然后，收集提取液上清，微孔过滤（0.45μm），高效液相色谱分析。2.3超声辅助提取对于超声辅助提取实验中使用的是KQ-100DB超声仪器（中国昆山超声波有限责任公司），尺寸为23.5×13.3×10.2厘米）。超声时额定功率为100瓦，范围是0–10。超声提取过程在装有2.0升水的超声食仪器中进行，水浴步骤如下：，在25ml的三角烧瓶中加入0.5g干燥的地上的茎和20ml的溶剂。然后将烧瓶部分浸入。保持水的循环，并保持恒定的温度，以避免由于超声引起的温度上升。2.4分析仪器与方法安捷伦HPLC系统（型号1100，美国）构造如下：系统控制器，G1311A泵，G1314A多波长检测器用于芦丁和槲皮素的测定。色谱柱为美国安捷伦公司产品EclipseXDB-C18（5μm，150×4.6mm）。高效液相色谱分析以甲醇-水-醋酸混合溶液（45:55:0.5，v/v）为流动相，流速为1毫升/分钟，柱温为室温，进样量20μl。检测波长为254nm。校准曲线法用于芦丁和槲皮素的HPLC分析。2.5扫描电镜为了阐明超声提取作用过程和了解超声提取的机理，样品在提取后进行扫描电子显微镜（SEM）分析。将提取后的原料颗粒用铝胶带固定在样品座，然后用EmitechK500X进行镀膜。所有的样本都在高真空条件和20千伏电压下用CambridegS250MK3扫描电镜检测。3．结果和讨论3.1色谱结果图1是标准品和超声提取样品的色谱图，图1A显示标准品芦丁和槲皮素的出峰时间分别出现在4.5min和13.5min，图1B是提取样品的色谱图。3.2溶剂和样品液固比的影响一般来说，大量的溶剂可有效的溶解成分，从而提高提取量。图2显示了溶剂量对超声提取卫矛中芦丁和槲皮素的影响。结果表明，当溶剂与样品的液固比在20-40之间时，芦丁和槲皮素的提取量和液固比成正比。因此，选择液固比为40是最佳的。3.3乙醇浓度的影响超声30分钟乙醇浓度对萃取芦丁和槲皮素的影响如图3。芦丁和槲皮素的提取量随乙醇浓度增大而增加，直至乙醇浓度达到70％。这可能是由于极性比较接近，溶液中的水有助于增加溶质溶剂接触表面积[25]。因此，70％的乙醇水溶液提取被选为在下列研究溶剂。3.4提取时间的影响提取时间对芦丁和槲皮素提取率的影响如图4。结果表明，这两种提取物的提取量很大程度上取决于提取时间。在超声时，前30min芦丁和槲皮素的提取率迅速提高，后90min萃取率增加缓慢。图5显示了样品超声90分钟的情况，当样品超声3次每次30分钟，每次超声前加入新的溶剂，此时的芦丁和槲皮素提取率最高。当样本提取两次，每次45分钟，产量也比只提取了一次90分钟的高。结论：在一个固定的90分钟，超声3次后的芦丁和槲皮素提取量最佳。考虑到上述结果，以下实验条件进行了优化：乙醇水（70％）；液固比40/1（V/W），提取时间为3×30分钟。3.5回收率和重现性实验在上述优化的条件下，对3个卫矛粉末进行芦丁和槲皮素的加标回收率实验(见表1)。芦丁和槲皮素的回收率分别为99.5％和100.3％。为了研究超声辅助提取法对芦丁和槲皮素的重现性，有五个样品在优化条件下进行处理。结果表明芦丁和槲皮素的提取量的重现性很好。3.6浸渍和超声波之间的辅助提取的比较浸渍和超声波辅助提取率的比较结果列于表2。超声波辅助提取法有更高的应用价值，而浸渍法应用价值较低。在提取时间上，超声波辅助提取的速度比浸渍快。从提取率来看，超声波辅助提取更适合对活性成分的研究。3.7原料超声提取后的结构变化各种提取方法能够引起卫矛粉末结构的物理变化。图6a是未经处理的样品扫描电镜显微结构，同图6b（浸渍）、6c和6d（超声波辅助提取）处理样品的结构进行比较。在浸渍（图6b），表面只有微小的破坏。图6c和6d显示了经过超声辅助提取后，样品表面上有大量的缝隙结构。干燥原材料提取过程涉及两个阶段：（i）将植物材料浸泡在溶剂中以促进膨胀和水化过程；（ii）可溶性成分物质通过扩散和渗透的过程转移到溶剂中[26]。这表明，超声波作用将改变细胞膜表面张力，在表面形成很多凹陷（图6）。该细胞膜质的变化可能导致样品更容易破裂或崩溃。更重要的是，凹陷的破裂能够促进溶质扩散和渗透的过程。4结论对两种芦丁和槲皮素的提取工艺进行了研究和比较。超声辅助提取产量高，溶剂消耗少。最值得注意的是，使用超声波，提取时间可大大缩短。用超声波提取技术提取芦丁和槲皮素效率很高。从扫描电镜形貌观察，这两种方法似乎在植物表面引起不同的变化。超声波照射样品显示植物表面又凹陷的出现，证实超声波可容易的引起的样品破裂或崩溃。1.6立题目的及意义目前国内外对雪莲开发、利用主要在以雪莲黄酮为主要成分，已研制开发一系列重要中成药和保健品。其基础研究主要集中对雪莲黄酮在调节血脂、抗氧化等方面都有明显疗效，对雪莲多糖仅有少量报道,并且雪莲多糖现有的研究也只停留在对资源的挖掘和粗提物的生理活性研究方面。雪莲是传统的药用植物，具有很高的利用价值，但是由于生长环境的特殊性，以及人类掠夺性的采挖，以造成了这一宝贵物种资源枯竭，本文针对野生雪莲及组培雪莲所含的多糖成分进行超声法提取及优化的研究，为雪莲有用成分的提取提供了理论依据，为合理利用雪莲资源奠定了基础。第二章雪莲多糖的提取方法确定2.1实验仪器与材料2.1.1实验仪器超声波细胞粉碎机宁波新芝科器研究所电子分析天平上海天平仪器厂电热恒温水浴锅上虞市仪器厂台式离心机分光光度计2.1.2实验材料及试剂组培2-3年雪莲，标准葡萄糖，6%苯酚，浓硫酸，考马斯亮蓝G-250，牛血清蛋白，0.15mol\lNaCl溶液。2.2提取方法2.2.1恒温水浴加热法称取粉碎好的组培2-3年雪莲样品2g，加入200ml蒸馏水。在85℃的水浴锅中恒温水浴加热3h,水浴完毕后离心[5000r10min]取上清液，加水定容至200ml，待测。2.2.2超声波法称取粉碎好的组培2-3年雪莲样品20g，加入400ml蒸馏水，搅拌均匀后放于提取容器中，超声15min[600w1.5:0.5(s)]，过滤分离出上清液1和残渣；将残渣再次加入300ml蒸馏水，超声15min[600w1.5:0.5(s)]，过滤分离出上清液2；将两次上清液混合，待测。超声提取实验装置见图3.1。图3.1超声波强化提取实验装置图1.Temperaturecontroller2.Temperatureprobe3.Ultrasonicgenerator4.Ultrasonicconverter5.Extract6.Waterbath2.2多糖含量的测定测定方法主要采用苯酚-硫酸法。2.2.1标准曲线的绘制1、溶液的配制（1）6%苯酚溶液的配制：称取苯酚6g，置于100ml棕色容量瓶中，加蒸馏水溶解并稀释至刻度，摇匀，放入冰箱中备用。（2）葡萄糖标准溶液的配制：精密称取葡萄糖25mg，加蒸馏水溶解，定容至250ml，得到浓度为1.0mg\ml的葡萄糖标准溶液。2、操作方法（1）称取标准葡萄糖20mg于500ml容量瓶中，加水至刻度；（2）分别取0.4,0.6,1.0,1.2,1.4,1.6,1.8ml，各以补水至2.0ml；（3）加入6%苯酚1.0ml。浓硫酸5.0ml，静置10min；（4）摇匀，室温放置20min后于490nm测光密度；（5）以2.0ml水按上述操作做空白对照；（6）横坐标为多糖微克数，纵坐标为光密度，得标准曲线。3、数据与曲线项目数据标准葡萄糖溶液（ml）1.01.8吸光度值0.1110.2320.3310.4380.5380.6740.7630.8702.2.2样品多糖浓度的测定吸取样品液1.0ml，按上述操作，测光密度，以标准曲线计算多糖含量。2.3考马斯亮蓝G-250法绘制蛋白制标准曲线测定方法主要采用考马斯亮蓝G-250法。2.3.1标准曲线的绘制1、溶液的配制（1）考马斯亮蓝G-250溶液：称取考马斯亮蓝G-250100mg溶于50ml95%乙醇，加入100ml85%H3PO4，蒸馏水稀释至1000ml，抽滤，避光保存。（2）标准蛋白质溶液:50mg纯牛血清蛋白用0.15mol\lNaCl定容至500ml，配置成100ug\ml蛋白溶液。2、操作步骤（1）分别取牛血清蛋白溶液0.2，0.4，0.6，0.8,1.0ml置于试管中，补0.15mol\lNaCl至1.0ml；（2）加考马斯亮蓝G-250溶液5.0ml，立摇匀，2~5min后于595nm处测吸光度；（3）以1.0ml0.15mol\lNaCl作空白对照；（4）以标准牛血清蛋白溶液作横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。3、数据与曲线项目数据标准蛋白质溶液（ml）20406080100吸光度值0.1420.2360.3200.3940.4612.3.2样品蛋白质浓度的测定吸取样品液1.0ml，按上述操作，测光密度，以标准曲线计算蛋白质含量。2.4实验及结果分析2.4.1多糖含量的测定数据项目恒温水浴加热法提取的上清液稀释10倍超声法提取的上清液稀释10倍样品体积（ml）1.01.0吸光度值\490nm0.4870.171多糖浓度（mg\ml）0.8650.400多糖百分含量（%）3.0284.0002.4.2蛋白质含量的测定项目恒温水浴加热法提取的上清液超声法提取的上清液样品体积（ml）1.01.0吸光度值\595nm0.5190.179蛋白质浓度（ug\ml）87.326.8蛋白质百分含量（%）0.2730.2682.4.3小结实验过程及结果表明：超声波法对雪莲多糖的提取率虽然比恒温水浴加热法稍微偏低，但操作简单且能大批量提取；恒温水浴加热法操作时间太长，并且只能适用于小批量提取。所以本实验采用超声波法提取雪莲多糖。第三章雪莲超声提取工艺优化3.1实验仪器与材料3.1.1实验仪器JY99-2D超声波细胞粉碎机宁波新芝科器研究所电子分析天平FA2004上海天平仪器厂Tyler标准筛上虞市仪器厂分光光度计旋蒸仪红外光谱仪高效液相色谱仪3.1.2实验材料及溶剂组培2-3年雪莲，野生雪莲，3%三氯乙酸，氯仿，正丁醇，D72树脂，D113树脂，双氧水，活性炭，X-5树脂，NKA树脂，ADS-7树脂，ADS-8树脂，乙醇(分析纯)，3.2样品溶液的制备称取雪莲样品100g加入3.0L蒸馏水，超声20min[600w1.5:0.5(s)]，过滤分离出上清液1和残渣；将残渣再次加入3.03.3雪莲多糖脱蛋白方法方法的比较取等量雪莲提取液，在相同条件下用三氯乙酸法、Seveage法、树脂法进行脱蛋白，测溶液的蛋白损失率和多糖损失率，确定最适脱蛋白方法。3.3.1三氯乙酸法除蛋白在在多糖溶液中滴加3%三氯乙酸，直至溶液不再继续混浊为止；5~10℃放置过夜，离心[5000r15min]除去胶状沉淀即得无蛋白质的多糖溶液。项目样品体积（ml）20202020202020三氯乙酸量（ml）0123456吸光度值\595nm0.5190.3240.2380.1860.1620.1540.142蛋白质浓度（ug\ml）111.8063.0541.5528.5522.5520.5517.55蛋白质损失率（%）43.6062.8474.4679.8381.6284.30吸光度值\490nm（稀释5倍）0.457×20.6430.5980.5650.5370.5260.516多糖质量（mg）0.8210.6210.5900.5640.5430.5350.528多糖损失率（%）24.3627.8631.3033.8634.8435.693.3.2Seveage法除蛋白按多糖水溶液1\5~1\4体积加入氯仿，再加入氯仿体积1\5的正丁醇，剧烈振摇20min；当多糖的水溶液用率方针要成乳化液时，蛋白质变性成胶性蛋白质；效率不高，一般要重复5次以上，才能除尽蛋白质；为加速蛋白质的变性，最好用PH4~5的缓冲液代替。项目重复次数0123456789吸光度值\595nm0.5850.5190.4900.4640.4400.4240.4020.3870.3800.370蛋白质浓度（ug\ml）128.3111.8104.698.6092.0588.4584.6578.8077.0574.55蛋白质损失率（%）12.8618.4718.4728.2531.0634.0438.5839.9541.89吸光度值\490nm（稀释10倍）0.5790.5560.4890.4670.4310.4130.4000.3900.3720.356多糖质量（mg）1.0000.9660.8680.8320.7840.7560.7370.7220.6960.672多糖损失率（%）3.413.216.821.624.426.327.830.4树脂法除蛋白取等量D72和D113树脂，先水洗，再用1%的NaOH溶液碱洗，水洗，再用1%HCl溶液酸洗，再水洗至中性，再分别加入等量的雪莲提取液，放置摇床摇至过夜。项目原液D72树脂D113树脂吸光度值\595nm0.5650.2150.295蛋白质浓度（ug\ml）123.335.8055.80蛋白质损失率（%）70.9754.74吸光度值\490nm（稀释10倍）0.5760.2220.218多糖质量（mg）0.9960.4750.469多糖损失率（%）52.3152.913.3.4小结关于三种脱蛋白方法的比较：三氯乙酸法:脱蛋白效果不明显，需进行多次重复处理，对试剂消耗较大；虽然每次处理对多糖损失不是很大，但由于重复次数较多，累积后对多糖的损失量也较大；由于重复次数一般在10次以上，故总体处理时间较长。三氯乙酸法：脱蛋白效果比较明显，但对多糖的损失也较大；由于实验过程中加入三氯乙酸试剂，最后所得的溶液中含有该试剂，需要进行除杂处理，此过程比较复杂。树脂吸附法：脱蛋白效果明显，对多糖损失有一定影响，但整个过程不会引人新的杂质；另外树脂经过处理后能重复使用。经实验结果表明：D72树脂的脱蛋白效果比D113树脂好。总结：经实验结果表明，D72树脂吸附脱蛋白法为最佳的脱蛋白方法。3.4雪莲多糖脱色方法方法的比较取等量雪莲提取液，在相同条件下用双氧水脱色法、活性炭吸附脱色法、树脂法进行脱色，比较颜色的差异，在480nm处测吸光度，确定脱色效果。同时测溶液的蛋白损失率和多糖损失率，确定最适脱色方法。3.4.1四种树脂脱色方法处理后样品溶液脱色效果及蛋白和多糖的损失率1、脱色效果比较取等量X-5树脂，NKA树脂，ADS-7树脂，ADS-8树脂，用95%以、乙醇洗至澄清，再水洗2-3遍，再分别取等量的样品加入其中，振摇2-3h。比较个样品的颜色变化，并在480nm处测其吸光度。图3.2（从左起）原液，NKA树脂，X-5树脂，ADS-7树脂，ADS-8树脂2、480nm处测其吸光度及蛋白质和多糖损失率项目原液NKA树脂X-5树脂ADS-7树脂ADS-8树脂吸光度值\480nm0.7940.4200.4890.3880.468吸光度值\595nm0.5650.3820.3650.3720.389蛋白质浓度（ug\ml）123.3077.5573.3075.0579.30蛋白质损失率（%）37.1040.5539.1335.69吸光度值\490nm（稀释10倍）0.5670.4210.4090.4350.419多糖质量（mg）0.9960.7680.7500.7880.765多糖损失率（%）22.8924.7020.88双氧水脱色方法处理后样品溶液1、脱色效果比较取等量样品溶液调PH至9.0，分别加入30%双氧水适量，使其溶度分别为0.5%，1.0%，1.5%，然后40℃保温超声15min。图3.3（从左起）原液，0.5%双氧水，1.0%双氧水，1.5%双氧水2、480nm处测其吸光度及蛋白质和多糖损失率项目原液0.5%双氧水1.0%双氧水1.5%双氧水吸光度值\480nm0.7940.6690.6380.606吸光度值\595nm0.5650.5250.5430.511蛋白质浓度（ug\ml）123.30113.30117.80109.80蛋白质损失率（%）8.114.4610.95吸光度值\490nm（稀释10倍）0.5670.5420.5180.551多糖质量（mg）0.9960.9460.9100.959多糖损失率（%）5.028.633.713.4.3活性炭脱色方法处理后样品溶液1、脱色效果比较取等量样品溶液，分别加入活性炭适量，使其溶度分别为0.5%，1.0%，1.5%，然后40℃保温超声15min。图3.4（从左起）原液，0.5%活性炭，1.0%活性炭，1.5%活性炭2、480nm处测其吸光度及蛋白质和多糖损失率项目原液0.5%活性炭1.0%活性炭1.5%活性炭吸光度值\480nm0.7940.7820.8600.972吸光度值\595nm0.5650.5340.5210.541蛋白质浓度（ug\ml）123.30115.55113.30117.30蛋白质损失率（%）6.298.924.87吸光度值\490nm（稀释10倍）0.5670.5310.5450.519多糖质量（mg）0.9960.9290.9500.912多糖损失率（%）6.734.628.433.4.3小结关于三种脱蛋白方法的比较：1、树脂吸附法：脱色效果明显，在脱色的同时还能脱去一部分蛋白，利于多糖的纯化的进行，同时对多糖损失有一定影响；但整个过程不会引人新的杂质；另外树脂经过处理后能重复使用。经实验结果表明：四种树脂对溶液蛋白和多糖的影响差不多；其中，ADS-7树脂的脱色效果比其它三种树脂好，最为明显。2、双氧水脱色法：脱色效果不明显；由于30%双氧水具有强氧化性，操作过程中要注意安全；同时，由于加入双氧水试剂，最后所得的溶液中含有该试剂，需要进行除杂处理，此过程比较复杂。3、活性炭吸附脱色法：脱色效果不明显；在后面的分离操作中，有少量的活性炭颗粒仍残留在溶液中，无法完全分离。总结：经实验结果表明，树脂吸附法脱色效果最佳，其中，ADS-7树脂的脱色效果比其它三种效果更佳。所以，选择ADS-7树脂吸附脱色法进行脱色。3.5雪莲多糖提取工艺优化3.5.1D72树脂量的确定取等量雪莲提取液，在相同条件下用不同量的D72树脂进行脱蛋白，测溶液的蛋白损失率和多糖损失率，确定D72树脂的量。项目原液第一次脱蛋白第二次脱蛋白样品溶液（ml）4040404040404040404040D72树脂量（ml）05101520255＋510＋1015＋1520＋2025＋25吸光度值\595nm0.5190.1800.1520.1360.1200.1130.1510.1260.1110.1040.100蛋白质浓度（ug\ml）111.8027.0520.0516.0512.0510.3019.8013.559.808.057.05蛋白质损失率（%）75.8182.0785.6489.2290.7926.8032.4238.9433.2031.55吸光度值/490nm（稀释5倍）0.475×20.8910.8020.7120.6450.5510.7370.6890.6140.5380.467多糖质量（mg）0.8210.7290.6640.5980.5490.4790.6160.5810.5260.4700.418多糖损失率（%）11.2119.1227.1633.1341.6615.5012.5012.0414.3912.733.6利用无水乙醇提取多糖第四章雪莲不同部位成分分析植物不同部位次生代谢产物组成及含量不尽相同，本实验采用高效液相色谱，分别测定雪莲不同部位中绿原酸、紫丁香干、芦丁的含量，以便为更好的利用雪莲资源提供科学依据。4.1实验仪器与材料4.1.1实验仪器120D超声波发生器北京弘祥隆生物技术开发有限公司高速万能粉碎机北京中兴伟业仪器有限公司电子分析天平FA2004上海天平仪器厂Tyler标准筛上虞市仪器厂其余仪器同.2实验材料及溶剂新疆雪莲，乙醇(分析纯)，乙酸(分析纯)，甲醇、乙腈(色谱纯)。4.2实验方法4.2.1原料准备将雪莲原料按照花、茎、叶、全株分类，粉碎并过80目标准筛，收集备用。4.2.2样品制备方法5g雪莲粉，加入70%乙醇200mL，超声40min，离心：上清=1\*GB3①、沉淀；沉淀加入70%乙醇200mL，超声40min，离心：上清=2\*GB3②、沉淀；上清=1\*GB3①上清=2\*GB3②合并，取样8~10mL，待测。4.2.3反相高效液相色谱条件色谱为XTerraMSC18柱（250mm×4.6mm，5μm），流动相为乙腈（A）和0.1%乙酸水溶液（B），梯度洗脱条件：0~25min~50min；VA:VB为5:95~20:80，分析时间为50min，流速为1.0mL/min，进样量为15μL，检测波长为270nm，柱温为38℃。4.3实验结果及分析4.3.1雪莲各部位HPLC色谱图（1）雪莲花图4.1雪莲花HPLC色谱图（2）雪莲茎图4.2雪莲茎HPLC色谱图（3）雪莲叶图4.3雪莲叶HPLC色谱图（4）雪莲全株图4.4雪莲全株HPLC色谱图4.3.2实验结果由HPLC色谱图，计算出雪莲各部位成分提取率，结果汇总如下表4.5。表4.5雪莲各部位成分提取率绿原酸紫丁香苷芦丁花1.33%0.012%0.13%茎0.31%0.027%0.10%叶0.24%0.017%0.35%全株1.76%0.051%0.56%4.3.3结果分析分析全株野生雪莲，绿原酸的提取率最高，为1.76%，紫丁香苷的提取率最低，为0.051%，芦丁的提取率居中，为0.56%。分析单个药用成分，绿原酸在花中提取率最高，为1.33%，紫丁香苷在茎中提取率最高，0.027%，芦丁在叶中提取率最高，为0.35%。4.4小结本章主要检测了绿原酸、紫丁香苷、芦丁在雪莲各部位的含量，为野生新疆雪莲有效成分的利用提供了