第八章皂苷和强心苷演示

（优选）第八章皂苷和强心苷目前一页\总数七十页\编于九点教学目的与要求1.熟悉皂苷、强心苷的主要结构类型及理化性质2.掌握皂苷、强心苷的颜色反应及其应用3.掌握强心苷的酸水解法和酶水解法及其应用4.熟悉皂苷、强心苷的一般提取分离方法5.了解皂苷、强心苷的波谱特征目前二页\总数七十页\编于九点经典含义——存在于植物体内一类比较复杂的苷类化合物，其水溶液振摇后可产生持久的肥皂样泡沫，因此而得名。现代含义——螺甾烷以及与其生源途径相似的甾族化合物的低聚糖苷或三萜类化合物的低聚糖苷。第一节皂苷目前三页\总数七十页\编于九点一、皂苷的分类及结构特点

皂苷甾体皂苷三萜皂苷螺甾烷醇型:25S(L)（C25-甲基直立a键、为β型）异螺甾烷醇型:25R(D)(C25-甲基平伏e键、为

型)变形螺甾烷醇型：F环变形为呋喃甾烷（五元含氧环）呋甾烷型：F环裂环,C26-OH多与葡萄糖相连成苷四环三萜皂苷

五环三萜皂苷

达玛甾烷型羊毛脂甾烷型β-香树脂烷型(齐墩果烷型)-香树脂烷型（乌苏烷型）羽扇豆烷型目前四页\总数七十页\编于九点(一)甾体皂苷1、甾体皂苷的结构特征：甾体皂苷由甾体皂苷元与糖（-羟基糖）缩合而成。甾体皂苷元由27个碳原子、六个环组成，其基本碳架是螺甾烷的衍生物。ABCDEF123456789101112131415161718192021222324252627目前五页\总数七十页\编于九点（3）C25的绝对构型依其上甲基的取向不同有两种：C-25甲基是β-构型称为螺甾烷[绝对构型为L(S)型]，C-25甲基是-构型称为异螺甾烷[绝对构型为D(R)型]。（1）甾体皂苷元中有六个环，A、B、C、D四个环具有甾体母核结构,C-22是螺原子,E、F环以螺缩酮形式连接。（2）A、B环有顺、反两种稠合方式。B、C环和C、D环均为反式稠合。C25-甲基

直立a键、为β型L型(25S25L25β)平伏e键、为型D型（25R25D25)螺甾烷型

异螺甾烷型

目前六页\总数七十页\编于九点

(4)取代基团：OH多在C3-位或其他位置,且多为β-型羰基多在C12-位双键多在△5,△9（11）,少数在△25（27）位甾体皂苷不含羧基，呈中性，故称为中性皂苷。(5)常见的糖有:

D-葡萄糖、D-半乳糖、D-木糖、L-鼠李糖、L-阿拉伯糖及D-葡萄糖醛酸、D-半乳糖醛酸等较为常见,此外也可见到夫糖和加拿大麻糖及6-去氧葡萄糖和6-去氧半乳糖。(6)成苷的位置:与苷元C-3上的羟基连接成苷,也有在C-1或C-26位置上成苷的。目前七页\总数七十页\编于九点2.甾体皂苷苷元的结构类型异螺甾烷醇型

螺甾烷醇型

目前八页\总数七十页\编于九点变形螺甾烷醇型呋甾烷醇型

目前九页\总数七十页\编于九点（1）三萜皂苷苷元为30个碳原子组成的三萜类衍生物,大多数在24或28位有羧基,故又称酸性皂苷。（2）常见的糖有D-葡萄糖、D-半乳糖、D-木糖、L-阿拉伯糖、L-鼠李糖、D-葡萄糖醛酸、D-半乳糖醛酸，另外还有D-呋糖、D-鸡纳糖、D-芹糖、乙酰基和乙酰氨基糖等。（3）成苷的位置多为3位醇皂苷或28位酯皂苷；另外也有16、21、23、29位等醇羟基成苷。（4）常见的三萜皂苷有单糖链三萜皂苷、双糖链三萜皂苷和三糖链皂苷(二)三萜皂苷1、三萜皂苷的结构特点目前十页\总数七十页\编于九点2、三萜皂苷元的结构类型：常见的有四环三萜皂苷和五环三萜皂苷。（1）四环三萜皂苷元:其基本骨架也是甾体结构母核，A/B、B/C、C/D环均为反式稠合。羊毛脂甾烷型达玛甾烷型目前十一页\总数七十页\编于九点β-香树脂烷型又称齐墩果烷型A/B、B/C、C/D环为反式稠合D/E环为顺式稠合-香树脂烷型又称乌苏烷型A/B、B/C环为反式稠合C/D

、D/E环为顺式稠合（2）五环三萜皂苷元类型目前十二页\总数七十页\编于九点羽扇豆烷型A/B、B/C、C/D、D/E环均为反式稠合木栓烷型A/B、B/C、C/D、D/E环均为反式稠合目前十三页\总数七十页\编于九点二、皂苷的理化性质

1、性状

皂苷大多为无色或乳白色无定形粉末（低聚糖苷，极性大，分子量大）；皂苷元（极性小）大多有完好结晶；皂苷多数具有苦而辛辣味，对粘膜有强烈刺激性，尤其鼻粘膜，易引起喷嚏。皂苷大多具吸湿性。目前十四页\总数七十页\编于九点2、溶解性

皂苷（低聚糖苷，极性大）易溶于水、稀醇、含水丁醇，难溶于丙酮、乙醚等；次生皂苷（极性降低）易溶于醇、丙酮、乙酸乙酯等；皂苷的助溶作用（表面活性剂作用），可以增大其他成分在水中的溶解度。目前十五页\总数七十页\编于九点3、表面活性

皂苷水溶液经强烈振摇能产生大量持久性泡沫，且不因加热而消失。原因：皂苷分子中

糖——亲水性苷元——亲脂性降低水溶液表面张力作用所致，但也有些皂苷起泡性不明显。三萜皂苷酸水液的泡沫和碱水液的泡沫持续时间相同甾体皂苷碱水液泡沫比酸水液的泡沫持续时间长几倍目前十六页\总数七十页\编于九点4、溶血作用

（1）溶血性

：皂苷的水溶液能破坏红血球而有溶血作用。但F环开环的皂苷没有溶血性。（2）溶血指数：皂苷对同一来源的红细胞稀悬浮液，在一定条件下（相同pH、等渗、恒温等）造成完全溶血的最低浓度。例如薯蓣皂苷的溶血指数为1：400000，甘草皂苷的溶血指数为1：4000。（3）溶血原因

多数皂苷+红细胞壁上的胆甾醇→不溶性复合物↓

破坏血红细胞的正常渗透性使细胞内渗透压增加而崩裂目前十七页\总数七十页\编于九点5、与金属盐的沉淀反应酸性皂苷+中性盐（硫酸铵、醋酸铅）→沉淀酸性皂苷+碱性醋酸铅→沉淀中性皂苷+碱性醋酸铅、氢氧化钡→沉淀应用：分离两种皂苷6、与胆甾醇的沉淀反应：皂苷与胆甾醇可形成分子复合物的沉淀。生成的分子复合物沉淀用乙醚回流提取时，胆甾醇可溶于乙醚，皂苷不溶。沉淀规律如下:目前十八页\总数七十页\编于九点①凡有3β-OH，A/B环反式稠合(5-H)或Δ5的平展结构的甾醇，与皂苷形成的分子复合物的溶度积最小。②凡有3-OH或3β-OH经酯化或成苷的甾醇，不能与皂苷形成难溶性分子复合物。③三萜皂苷与甾醇形成的分子复合物的稳定性低于甾体皂苷与甾醇形成的分子复合物。目前十九页\总数七十页\编于九点

皂苷在无水条件下可与强酸、中等强酸、Lewis酸等作用下发生颜色反应：醋酐-浓硫酸反应（Liebermann-Burchard反应）黄红紫蓝褪色黄红紫蓝绿色褪色五氯化锑反应（Kahlenberg反应）三氯醋酸反应（Rosen-Heimer反应）氯仿-浓硫酸反应（Salkowski反应）冰醋酸-乙酰氯反应（Tschugaeff反应）7、皂苷的颜色反应目前二十页\总数七十页\编于九点三、皂苷的提取分离甾体皂苷——主要作为合成激素等的原料，故以提取苷元较为实用。三萜皂苷——为许多中药的有效活性成分，故以提取原生苷为主。（一）皂苷苷元的提取与分离方法1原才料加水，36℃保温24~48小时浸泡预发酵3%硫酸加热水解3~6小时，过滤，水洗，干燥1、皂苷苷元的提取料渣目前二十一页\总数七十页\编于九点料渣石油醚、或甲苯连续回流4~6小时提取提取液适当回收溶剂，放置析晶，抽滤皂苷元粗品乙醇或丙酮处理，活性炭脱色重结晶皂苷元目前二十二页\总数七十页\编于九点方法2.原材料稀醇水溶液提取皂苷两相酸水解法、酶水解、smith降解法水解液皂苷元苯、氯仿等有机溶剂萃取萃取液回收溶剂目前二十三页\总数七十页\编于九点色谱分离法吸附原理：硅胶、氧化铝苯-氯仿、苯-甲醇、氯仿-甲醇不同比例洗脱2、皂苷苷元的分离目前二十四页\总数七十页\编于九点（二）皂苷的提取与分离n-BOH(皂苷)水(水溶性杂质）1、皂苷的提取：原材料稀醇提取乙醇液

料渣浓缩后，石油醚-水萃取石油醚水n-BOH萃取目前二十五页\总数七十页\编于九点

水洗30%乙醇50%乙醇70%乙醇TLC检查皂苷，合并洗脱液，浓缩，醇溶+丙酮（乙醚）→皂苷沉淀(醇/丙酮法)n-BOH(皂苷)浓缩浓缩液大孔吸附树脂目前二十六页\总数七十页\编于九点2、皂苷的分离（分配色谱）：正相柱层析支持剂：硅胶固定相：水流动相：氯仿：甲醇：水CH2Cl2:甲醇：水反相柱层析固定相：RP-18、RP-8、RP-2流动相：甲醇：水，乙腈：水目前二十七页\总数七十页\编于九点试剂类型鉴别特点鉴别意义用于两类皂苷的区别

四、皂苷的检识及结构测定（一）皂苷的化学检识——颜色反应醋酐-浓硫酸反应甾体皂苷最后呈蓝绿色三萜皂苷最后显红或紫红色三氯醋酸反应三萜皂苷加热至100℃才显色用于两类皂苷的区别甾体皂苷加热至60℃即可显色目前二十八页\总数七十页\编于九点盐酸-对二甲氨基苯甲醛（Ehrlich试剂，简称E试剂）螺甾烷醇类皂苷不显色呋甾烷醇类皂苷显红色茴香醛-硫酸(Anisaldehyde,简称A试剂）螺甾醇类皂苷显黄色呋甾醇类皂苷显黄色可用于两类不同苷元皂苷的区别可用于两类不同苷元皂苷的区别目前二十九页\总数七十页\编于九点官能团（λmax）孤立双键205~225nm（ε900）羰基285nm（ε500）a、β-不饱和酮基240nm（ε11000）饱和的甾体皂苷元与共轭双键235nm浓硫酸40℃，1hr220~275nm（二）波谱特征检识1、紫外特征（UV）饱和的甾体皂苷元紫外区无吸收依吸收峰的位置（λmax）及吸光系数（ε）与标准图谱相对照，即可用于不同皂苷元的鉴别目前三十页\总数七十页\编于九点甾体皂苷的螺缩酮结构在红外光谱的指纹区表现特征性四个吸收峰：2．红外光谱（IR）可用于C-25构型的鉴别（两种皂苷元的鉴别）25D(R)系：980cm-1(A)、920cm-1(B)、900cm-1(C)、860cm-1(D);其中A带最强，C带较B带强3~4倍

25L(S)系：980cm-1(A)、920cm-1(B)、9900cm-1(C)、860cm-1(D);其中A带最强，B带较C带强2倍当F环开裂，无螺缩酮结构，无此特征。目前三十一页\总数七十页\编于九点当甾环11或12位有羰基时,则在1751~1705cm-1处只有一个吸收峰；且11位羰基的吸收频率比12位羰基的高。若12位羰基形成，β-共轭体系，则在1605~1600cm-1（双键）及1697~1673cm-1（羰基）处各有一个吸收峰目前三十二页\总数七十页\编于九点甾体皂苷的螺缩酮结构139（基峰）、115（中）、126（弱）若C25-OH或C27-OH+16155（基峰）、131（中）、142（弱）OH乙酰化OAc+58197（基峰）OH甲基化OMe+30169（基峰）若△25（27）-2137（基峰）、113（中）、124（弱）若C17

–OH139减弱、126（基峰）、155、153二个峰推断F-环的取代情况3.质谱（MS）目前三十三页\总数七十页\编于九点m/z139（基峰）m/z115（中）m/z126辅助离子m/z137m/z113m/z124

五环三萜皂苷在12位和13位间有一双键，具有环己烯的结构，很容易发生RDA（逆Diels-Alder）裂解，将分子分为两大碎片。根据生成的碎片离子峰可以确定A、B环及D、E环上取代的性质、数目几位置。目前三十四页\总数七十页\编于九点1HNMR特征：在高场区出现18、19、21、27-CH3的信息特征；4、核磁共振δ1.10(25S、L-型)δ0.7(25R、D-型)依δ27-HD、L-构型判断21-CH33Hd27-CH33Hd18-CH33Hs19-CH33Hs18-CH3处于较高场27-CH3处于较高场目前三十五页\总数七十页\编于九点（2）在低场区出现C16–HC26-2H的信息特征，而且，依C26-2H化学位移的差值（△δ）可用于D、L-构型的判断C26-2HD-型：（25R)3.3、3.95；L-型（25S)3.36（3）结构中的许多亚甲基、次甲基质子堆积成复杂峰图△δ相近：L-型（25S)△δ相差比较大：D-型：（25R)3.3目前三十六页\总数七十页\编于九点13CNMR:碳谱宽度比氢谱宽30倍，分子微小差异即可引起碳谱化学位移的区别，并可利用全氢去偶、偏共振去偶、高分辨碳谱等得到的信息参数几乎可以将皂苷元分子27个碳原子（包括季碳、羰基碳原子）的特征峰全部辨认出来。甾体皂苷元碳谱特征及位移规律：21、18、19、27-甲基碳原子δ在20ppm以下16-碳原子δ在80ppm左右26-碳原子δ在109ppm左右双键碳原子115~150ppm羰基碳原子200ppm左右碳原子被含氧基团取代，δ+40~45ppm目前三十七页\总数七十页\编于九点含义:是指存在于植物体内的一类对心脏具有显著生物活性的甾体苷类化合物。第二节强心苷类目前三十八页\总数七十页\编于九点一、强心苷的结构与分类（一）苷元部分：为甾体衍生物。其结构特征为：1.甾体母核的四个环为顺-反-顺的稠合方式2.苷元的3-位、14-位常连有羟基，且多为β-型3.甾体母核的C17-位上连接不饱和内酯环依据内酯环大小的不同，强心苷元可分为强心甾烯甲型强心苷元

海葱甾烯（蟾蜍甾二烯）乙型强心苷元目前三十九页\总数七十页\编于九点强心甾烯

海葱甾烯（蟾蜍甾二烯）3β-OH14β-OH3β-OH14β-OH甲型强心苷元乙型强心苷元甲型强心苷乙型强心苷3-位连接糖基3-位连接糖基目前四十页\总数七十页\编于九点1.糖的类型:构成强心苷的糖有20多种,根据C2上有无羟基可分为-羟基糖(2-羟基糖)和-去氧糖(2-去氧糖)。-去氧糖(2-去氧糖)常见于强心苷,是区别于其它苷类成分的一个重要特征。

(1)

-OH糖：除D-葡萄糖、L-鼠李糖外还有6-去氧糖如L-夫糖、D-鸡纳糖、D-弩箭子糖、D-6去氧阿洛糖；6-去氧糖甲醚如L-黄花夹竹桃糖、D-洋地黄糖等(2)-去氧糖：2、6-二去氧糖，如D-洋地黄毒糖；2、6-二去氧糖甲醚，如L-夹竹桃糖、D-加拿大麻糖、D-迪吉糖和D-沙门糖等（二）糖基部分目前四十一页\总数七十页\编于九点2、常见糖的结构：L-鼠李糖L-夫糖D-鸡纳糖D-葡萄糖目前四十二页\总数七十页\编于九点L-黄花夹竹桃糖D-弩箭子糖D-6-去氧阿洛糖L-夹竹桃糖2,6-二去氧糖目前四十三页\总数七十页\编于九点D-加拿大麻糖D-迪吉糖D-洋地黄毒糖D-沙门糖D-洋地黄糖目前四十四页\总数七十页\编于九点（三）苷元和糖的连接方式I型强心苷苷元-(2、6-二去氧糖)Χ-(D-葡萄糖)У

II型强心苷苷元-(6-去氧糖)Χ–(D-葡萄糖)УIII型强心苷苷元-(D-葡萄糖)

У

强心苷大多是低聚糖苷，少数是单糖苷或双糖苷。通常按糖的种类和苷元的连接方式，可分为以下三种类型：自然界存在的强心苷以Ⅰ、Ⅱ型较多,Ⅲ型较少。x=1~3，y=1~2目前四十五页\总数七十页\编于九点

1．性状：大多为无色结晶或无定形粉末。具有旋光性。味苦，对粘膜有刺激性。

2．溶解性

水甲醇、乙醇、丙酮乙酸乙酯、含水氯仿、氯仿-甲醇（3：1）乙醚、苯、石油醚原生苷次生苷+小++微溶可溶难溶难溶二、强心苷的理化性质目前四十六页\总数七十页\编于九点水解特点:苷元与-去氧糖及-去氧糖与-去氧糖之间的苷键开裂,不会引起苷元脱水。3、水解反应(1)酸水解①温和酸水解水解条件:0.02~0.05mol/LHCl或H2SO4在含水醇溶液中短时加热用途:Ⅰ型强心苷水解为苷元和糖。目前四十七页\总数七十页\编于九点

水解条件:3~5%HCI,延长加热时间或加压

水解特点:所有苷键断裂

用途:I、II、III型强心苷的水解

此法易产生脱水苷元③氯化氢-丙酮法水解条件:1%HCl丙酮溶液20℃放置两周

水解特点:糖分子中的C2和C3羟基与丙酮反应生成丙酮化物,进而水解可得到原生苷元和糖衍生物

用途:II型强心苷的水解②强烈酸水解目前四十八页\总数七十页\编于九点+铃兰毒苷丙酮缩铃兰毒苷毒毛旋花子苷元氯代丙酮缩L-鼠李糖目前四十九页\总数七十页\编于九点水解条件：水、36℃左右、24hr水解特点：专属性强，不同性质的酶，作用于不同性质的苷键。乙型强心苷比甲型强心苷易水解植物体内只有水解葡萄糖的酶，无水解-去氧糖的酶。酶能水解除去葡萄糖，保留-去氧糖而生产次生苷。苷元类型不同，被酶水解的难易程度也不同，一般来说乙型强心苷比甲型强心苷易水解。用途：研究强心苷的结构。（2）酶水解目前五十页\总数七十页\编于九点（3）碱水解强心苷的苷键不被碱水解，但分子中的酰基、内酯环会受碱的影响，发生水解或裂解、双键位移、苷元异构化等反应。①酰基的碱水解水解条件：NaHCO3、KHCO3、Ca(OH)2、Ba(OH)2

水解特点：NaHCO3和KHCO3主要使2-去氧糖上的酰基水解，而2-羟基糖或苷元上的酰基不水解；而Ca(OH)2和Ba(OH)2可使2-去氧糖、2-羟基糖及苷元上的酰基水解，但内酯环不水解。

应用：鉴别2-去氧糖和2-羟基糖或苷元目前五十一页\总数七十页\编于九点②内酯环的碱水解

在水溶液中KOH和NaOH可使内酯环开裂，加酸后可再环合；在醇溶液中KOH和NaOH可使内酯环开裂后生成异构化苷，酸化也不能再环合为原来的内酯环，是不可逆反应。目前五十二页\总数七十页\编于九点甲型强心苷在KOH醇溶液中通过内酯环的电子转移、双键移位，双键由20（22）转移到20（21），生成C22活性亚甲基，以及C14位羟基质子对C20位的双键亲电加成反应而生成内酯型异构化苷，再经皂化开环形成开链型异构化苷。应用：与活性亚甲基试剂反应，用于鉴别甲型和乙型强心苷。目前五十三页\总数七十页\编于九点乙型强心苷在KOH醇溶液中不发生双键位移，但内酯环开裂生成甲酯异构化苷。目前五十四页\总数七十页\编于九点4、脱水反应(D-洋地黄毒糖)3强心苷用混合强酸（如3~5%HCl或H2SO4）进行酸水解时，苷元往往发生脱水反应。C3-、C14-上的β-OH最容易发生脱水。HCl3D-洋地黄毒糖+Δ羟基洋地黄毒糖苷脱水羟基洋地黄毒苷元——水解反应的副反应，应注意避免目前五十五页\总数七十页\编于九点5、显色反应：由甾体母核、不饱和内酯环和

-去氧糖三部分产生。（1）作用于甾核的颜色反应

①醋酐-浓硫酸（L-B）反应②Salkowski（氯仿-浓硫酸）反应③三氯醋酸-氯胺T(Rosenheim)反应④三氯化锑（五氯化锑）反应（2）作用于五元不饱和内酯环的颜色反应

甲型强心苷C17侧链上的五元不饱和内酯环在碱性溶液中双键转移形成活性亚甲基,该活性亚甲基能与某些试剂反应而显色。反应在可见光区有最大吸收，也可用于定量分析；乙型强心苷在碱性溶液中无此类反应。目前五十六页\总数七十页\编于九点Legal反应Kedde反应Raymand反应Baljet反应反应名称试剂颜色λmaxNa2Fe(NO)CN5·2H2O亚硝酰铁氰化钠深红或蓝470nm3,5-二硝基苯甲酸深红或红590nm间-二硝基苯紫红或蓝苦味酸橙或橙红620nm490nm此类反应可在试管内进行，也可以作为TLC或PC的显色剂。用于甲型与乙型强心苷的鉴别目前五十七页\总数七十页\编于九点（3）作用于-去氧糖的颜色反应①Keller-Kiliani（K-K）反应：将强心苷溶于含少量Fe3+的冰醋酸，沿试管壁滴加浓硫酸，醋酸层渐呈蓝色或蓝绿色，界面处随苷元不同显不同颜色。

②对二甲氨基苯甲醛反应：将强心苷的醇溶液滴在滤纸上，干后喷1%对二甲氨基苯甲醛乙醇溶液-浓盐酸(4:1),并于90℃加热30秒，显灰红色斑点。③过碘酸-对硝基苯胺反应:过碘酸能将2-去氧糖氧化生成丙二醛,再与对硝基苯胺缩合而显黄色。目前五十八页\总数七十页\编于九点三、强心苷的提取分离强心苷提取分离比较困难，原因：1.含强心苷成分比较复杂，且含量较低；2.强心苷为多糖苷,常与多糖、皂苷、色素、鞣质等性质相近成分共存；3.共存酶的存在及酸、碱等，易造成强心苷的水解，使成分复杂化；（一）强心苷的提取：

原生苷和次生苷，在溶解性上有亲水性、弱亲脂性、亲脂性之分，但均能溶于甲醇、乙醇中。一般常用甲醇或70~80%乙醇作溶剂，提取效率高，且能使酶失去活性。目前五十九页\总数七十页\编于九点1、提取——溶剂法（相似者相溶原理）：原生苷：甲醇、乙醇次生苷：乙醚、氯仿、氯仿-甲醇混合溶剂2、除杂

溶剂法:油脂类杂质，先用压榨法或石油醚脱脂静置析胶法：将醇提液浓缩至适当醇浓度后静置，使叶绿素等脂溶性杂质成胶状沉淀析出后，过滤除去；吸附法:活性炭可除去叶绿素等脂溶性杂质；氧化铝可除去糖类、水溶性色素、皂苷等杂质，注意调整醇浓度，避免强心苷被吸附而损失。目前六十页\总数七十页\编于九点3、分离纯化

两相溶剂萃取法：依分配系数差异（K）逆流分溶法：依分配系数差异（K）液滴逆流分溶法（DCCC）:依分配系数差异（K）色谱分离法：亲脂性苷（单糖苷、次生苷、苷元）采用吸附色谱，一般用硅胶为吸附剂，正己烷-乙酸乙酯、苯-丙酮、氯仿-甲醇、乙酸乙酯-甲醇为溶剂进行梯度洗脱；弱亲脂性苷（原生苷）：选用分配色谱，用硅胶、硅藻土、纤维素为支持剂，甲酰胺、二甲基甲酰胺为固定相，以乙酸乙酯-甲醇-水或氯仿-甲醇-水进行梯度洗脱。当组分复杂时，往往需几种方法配合应用反复分离，才能达到满意的分离效果。目前六十一页\总数七十页\编于九点四、强心苷的检识（一）理化检识：主要是利用其分子结构中甾体母核、不饱和内酯环、-去氧糖的颜色反应。常用的有Liebermann-Burchard反应、Keller-Killiani反应、Legal反应和Kedde反应等。若样品的显色反应表明有甾体母核和-去氧糖，则基本可判定样品含强心苷；若Legal反应或Kedde反应也呈阳性，则表明样品所含成分属于甲型强心苷类；反之则可能是乙型强心苷类。目前六十二页\总数七十页\编于九点（二）色谱检识：1、纸色谱检识：①亲脂性强的强心苷：以甲酰胺或丙二醇为固定相，以苯或甲苯（用固定相饱和）为流动相②亲水性强的强心苷：以水浸透滤纸为固定相，以水饱和的正丁醇或乙醇-甲苯-水（4:6:1）、氯仿-甲醇-水(10:2:5、10:4:5、10:8:5）为流动相2、薄层色谱检识:①吸附TLC：硅胶为吸附剂，氯仿-甲醇-冰醋酸（85:13:2）、二氯甲烷-甲醇-甲酰胺(80:19:1)、乙酸乙酯-甲醇-水(8:5:5)等溶剂系统为展开剂②分配TLC(反相硅胶):以硅藻土、纤维素为支持剂，以甲酰胺、二甲基甲酰胺或丙二醇为固定相，氯仿-丙酮（4:1）、氯仿-正丁醇(19:1)等容积系统展开。目前六十三页\总数七十页\编于九点常用显色剂：①2%的3,5-二硝基苯甲酸乙醇溶液与2mol/LKOH溶液等体积混合。②1%的苦味酸水溶液与10%NaOH水溶液（95:5）混合喷后于90~100℃烘4~5分钟。③2%三氯化锑的氯仿溶液,喷后与100℃烘5分钟,各种强心苷及苷元显示不同颜色。目前六十四页\总数七十页\编于九点五、强心苷的波谱特征（一）紫外光谱用于甲型与乙型强心苷及苷元的鉴别λmax295~300nm(lgε3.93)λmax217~220nm(lgε4.20~4.24)若甲型强心苷分子中有Δ16(17)与内酯环共轭则λmax红移至270nm