维生素测定专题知识讲座

维生素是维持人体正常生命活动所必需一类天然有机化合物。其种类很多，当前已确认有30余种，其中被认为对维持人体健康和促进发育至关主要有20余种。我们在评价食品营养价值，开发利用高含量维生素食品资源，指导人们合理调整膳食结构，指导制订加工工艺或贮存条件，最大限量地保留各种维生素，还要控制强化食品中加入量，防中毒，都离不开分析检测工作。第一节概述维生素测定专题知识讲座第1页第一节概述维生素测定专题知识讲座第2页样品前处理水溶性Vit:VB1,VB2可能与蛋白质,淀粉等结合在一起,普通可经过酸水解或酶水解使其游离出来,然后进行提取,纯化和测定.脂溶性Vit:样品→皂化→脂溶性Vit和皂化物→过滤→有机溶剂抽提→浓缩→溶于适当溶剂→测定.第一节概述维生素测定专题知识讲座第3页第二节各种维生素测定（一）维生素A测定维生素A存在于动物性脂肪中，主要起源于肝脏、鱼干油、蛋类、乳类等动物性食品中。植物性食品中不合VA，但在深色果蔬中含有胡萝卜素，它在人体内可转变为VA，故称为VA原。维生素测定专题知识讲座第4页1.三氯化锑比色法（1）原理在氯仿溶液中，VA与三氯化锑可生成蓝色可溶性络合物，在620nm波优点有最大吸收峰，其吸光度与VA含量在一定范围内成正比，故可比色测定。维生素测定专题知识讲座第5页（2）适用范围及特点本法适合用于维生素A含量较高各种样品(高于5—10μg／g)，对低含量样品，因受其它脂溶性物质干扰．不易比色测定：该法主要缺点是生成蓝色络合物稳定性差。比色测定必须在，不然蓝色会快速消退，将造成极大误差。6秒钟内完成维生素测定专题知识讲座第6页（3）前处理:样品→皂化→乙醚萃取→上层洗涤→浓缩脱水(用无水硫酸钠)→氯仿定容。皂化：加入KOH和乙醇并加热回流至溶液澄清透明。乙醚提取：用乙醚提出皂化液，放入分液漏斗静置后，放掉水层，保留乙醚层。重复几次。洗涤：用水对乙醚混合液进行洗涤，弃去水层，屡次重复洗涤。浓缩：用无水硫酸钠脱水，并回流回收乙醚后加入一定量三氯甲烷，进行定容。维生素测定专题知识讲座第7页标准曲线绘制：用标准维生素A溶液进行绘制样品测定：加入处理好样品溶液加入三氯甲烷进行吸光度测定（4）计算X＝（CV/m）×（100/1000）维生素测定专题知识讲座第8页（5）注意事项:A.SbCl3遇水沉淀,所以CHCl3不应含水,加乙酸酐少许可脱水.B.VA见光分解,应在暗处操作.C.若样品含胡萝卜素,应消除干扰.D.乙醚含水量E.三氯化锑腐蚀性强，不能沾在手上，所以用过仪器要先用稀盐酸浸泡后再清洗。维生素测定专题知识讲座第9页2.紫外分光光度法原理:VA异丙醇溶液在325nm有最大吸收,其吸光度正比与其浓度.特点:灵敏度高于SbCl3比色法,但在325nm附近有许多化合物对测定有干扰,普通用于纯样品测定.维生素测定专题知识讲座第10页(二)维生素D测定

分析方法中很好是比色法和高效液相色谱法。

是AOAC选定正式方法。1.三氯化锑比色法2.液相色谱法它灵敏度较比色法高30倍以上，且操作简便，精度高，分析速度快。是当前分析维生素D最好方法。维生素测定专题知识讲座第11页1.三氯化锑比色法原理：Vd与三氯化锑再三氯甲烷中产生橙黄色，并再500nm波优点有最大吸收，其强度与Vd含量呈正比。——有VA存在时要先分离VA。操作过程：与VA三氯化锑比色法操作一样，只是Vd多了一步纯化。纯化——用过滤柱将VA与VD分离开维生素测定专题知识讲座第12页水溶性维生素测定易溶于水，而不溶于苯、乙醚、氯仿等大多数有机溶剂。在酸性介质中很稳定，既使加热也不破坏；但在碱性介质中不稳定，易于分解，持别在碱性条件下加热，可大部或全部破坏。它们易受空气、光、热、酶、金属离子等影响；维生素B2对光，尤其是紫外线敏感，易被光破坏；维生素C对氧、铜离子敏感，易被氧化。维生素测定专题知识讲座第13页依据上述性质，测定水溶性维生素时，普通都在酸性溶液中进行前处理。维生素Bl、B2——盐酸水解——酶解——提取——纯化维生素C通常采取草酸、草酸—醋酸、偏磷酸—醋酸溶液直接提取。在一定浓度酸性介质中，能够消除一些还原性杂质对维生素C破坏作用。草酸价廉，使用方便，对维生素C有很好保护作用维生素测定专题知识讲座第14页（三）维生素Bl测定维生素Bl测定方法有很各种，不过最普遍用时荧光法。原理;维生素Bl在碱性铁氰化钾溶液中，能被氧化成一个蓝色荧光物质——硫色素，没有其它荧光物质存在时候，其荧光强度与硫色素浓度成正比。经过荧光分光光度计能够测得。仪器：荧光分光光度计维生素测定专题知识讲座第15页（四）维生素B2测定维生素B2测定普通也是利用荧光分析法。原理：核黄素在440nm－500nm波长下产生黄绿色荧光。在稀溶液里荧光强度与核黄素浓度呈正比，在525nm测定其荧光强度。若有其它杂质，能够加入低亚硫酸钠将核黄素还原为无荧光物质，然后再测荧光度，差值就是核黄素浓度。同时能够加入高锰酸钾去除色素物质。维生素测定专题知识讲座第16页（五）维生素C测定

维生素C含有较强还原性，对光敏感，氧化后产物称为脱氢抗坏血酸，依然含有生理活性。深入水解则生成2，3-二酮古乐糖酸，失去生理作用。测定维生素C方法有2，6—二氯靛酚滴定法

，2，4－二硝基苯肼比色法，荧光法，高效液相色谱法等维生素测定专题知识讲座第17页2，6—二氯靛酚滴定法

1．原理还原型抗坏血酸能够还原染料2，6-二氯靛酚。该染料在酸性溶液中呈粉红色(在中性或碱性溶液中呈蓝色)，被还原后颜色消失。还原型抗坏血酸还原染料后，本身被氧化成脱氢抗坏血酸。在没有杂质干扰时，一定量样品提取液还原标准染料液量，与样品中抗杯血酸含量成正比。维