苯并a芘的测定专家讲座

食品中苯并[a]芘测定一、苯并[a]芘结构与性质简称为BaP

苯并a芘的测定第1页针状结晶，沸点310~320℃溶解特征：水中溶解度为0.004~0.012mg/L易溶于石油醚、环已烷、已烷、苯、甲苯、二甲苯、丙酮稍溶于乙醇、甲醇化学性质：稳定，常温下不与硫酸作用，能与硝酸、高氯酸反应碱性条件下稳定荧光特征：紫外线（360nm）下产生经典紫色荧光苯并a芘的测定第2页二、食品中苯并[a]芘起源BaP是含碳燃料及有机化合物热解过程中产物，是煤、石油、天然气、木材等不完全燃烧产物。空气中BaP含量为0.01~100μg/m3;地表水中BaP含量为0.03~0.1μg/L;土壤中BaP含量为0~400μg/kg苯并a芘的测定第3页在熏烤、烘烤过程中形成燃烧产物与食品直接接触、烟尘与食品直接接触粮食烘干高温下脂肪、胆固醇等成份热解或热聚（10~70倍）高温下食品焦化或炭化淀粉390℃时产生0.7μg/kg650℃时产生17μg/kg650℃下葡萄糖产生7mg/kg、脂肪酸产生88mg/kg苯并a芘的测定第4页加工步骤污染设备管道酱油、醋、酒、饮料包装材料糖果、面包、冷饮包装用蜡纸润滑油等工业废水、废气污染三废排放沥青利用（沥青中苯并芘含量为2.5~3.5%）细菌、原生生物、淡水藻类及一些高等植物组织内合成藻类、水生植物BaP含量为0.005μg/kg植物BaP含量0.01~0.02μg/kg苯并a芘的测定第5页部分食品中Bap含量（μg/kg）种类含量种类含量熏奶酪0.01~5.6腊肉0.86~27.6熏鱼1.3~15.2烤牛肉0.41~1.58熏香肠0.8~2.5烤羊肉串1~2.84熏火腿3.2烤鸭皮0.75~2.39熏排骨0.34~5.0烤鸭0.06炸油条1.4~11香肠0.3~0.5烘大饼3.0~7.0蛋清肠0.18~0.3苯并a芘的测定第6页三、BaP危害BaP为致癌、致突改变学物质，可致各种癌症，并含有致畸性和遗传毒性。四、限量标准1、国家标准允许限量标准品种指标品种指标肉制品烧烤猪肉、禽肉≦5植物油豆油、花生油植物油≦10叉烧肉、羊肉串≦5茶油≦10火腿、板鸭≦5其它油≦10烟熏鱼≦5粮食稻谷≦5熏鸡、熏马肉≦5小麦≦5熏红肠、香肠≦5大麦≦5苯并a芘的测定第7页2、其它一些国家、地域标准欧共体调料0.03ug/kg德国肉及肉制品1.0ug/kg意大利食品及饮料0.03ug/kg荷兰肉制品1.0ug/kg北欧国家肉制品1.0ug/kg3、一些国家每日允许摄入量(ug)美国0.16~1.6英国0.48德国0.02~0.14荷兰0.12~0.42意大利0.1~0.3奥地利0.36苯并a芘的测定第8页五、防治办法加强环境治理改变生产方式改进烹调和加工方法改变饮食习惯去毒处理苯并a芘的测定第9页六、测定方法（一）分配柱层析净化荧光测定法1.原理样品先用有机溶剂提取，或经皂化后提取，再将提取液经液－液分配或色谱柱净化，然后在乙酰化滤纸上分离苯并(a)芘，因苯并(a)芘在紫外光照射下呈蓝紫色荧光斑点，将分离后有苯并(a)芘滤纸部分剪下，用溶剂浸出后，用荧光分光光度计测荧光强度与标准比较定量。样品皂化提取溶剂提取柱层析液液分配荧光分析纸层析苯并a芘的测定第10页2、试剂试剂需重蒸，并检验其荧光特征吸附剂：硅镁型吸附剂水洗并活化，加5%水减活中性氧化铝活化（120℃4h）乙酰化滤纸制备：滤纸（30cm×4cm）→乙酰化（180mL苯：130mL乙酸酐：0.1mL硫酸）6h,并浸泡过夜→取出风干苯并[a]芘标准液苯并[a]芘标准贮备液：100ug/mL苯并[a]芘标准使用液：1ug/mL,0.1ug/mL苯并a芘的测定第11页3、仪器脂肪抽提器层析柱（10cm×350cm）层析缸K-D浓缩器紫外灯荧光分光光度计苯并a芘的测定第12页4、操作方法（1）样品提取粮食及低水分含量食品回流抽提，碱皂化6~8h（90下）皂化液趁热转移至分液滤斗洗涤接收瓶（50mL95%乙醇）加水（100mL）振摇提取静置分层下层二次提取（70mL环已烷）合并环已烷洗涤环已烷层（水，100mL×3）洗涤水环已烷提取（30mL×2）浓缩至40mL（60℃水浴中）苯并a芘的测定第13页植物油称样20g分液滤斗环已烷100mL提取DMF40mL×3环已烷层DMF层DMF层提取环已烷40mL环已烷层DMF层弃去分液滤斗2%硫酸钠240mL混匀提取环已烷100mL×2苯并a芘的测定第14页鱼、肉及其制品称样，加无水硫酸钠（1：1或1：2）搅拌环已烷抽提取蔬菜称样、晾干、加丙酮（150mL）捣碎，过滤至分液滤斗加水、环已烷提取环已烷重复提取环已烷层洗涤（水，125mL×2）浓缩至25mL

苯并a芘的测定第15页（2）净化装柱加样吸附洗脱（苯30mL）减压浓缩至0.1~0.5mL苯并a芘的测定第16页（3）分离点样展开（95%乙醇：二氯甲烷=2：1）观察（紫外灯照射）剪下斑点，加苯浸泡溶解。苯并a芘的测定第17页（4）测定测定标准斑点及样品斑点荧光激发光谱和发射光谱读取F401nm、F406nm、F411nm（５）计算相对荧光强度苯并a芘的测定第18页（二）HPLC法１、原理用KOH-甲醇水（1:1）溶液皂化样品中脂肪，环已烷提取多环芳烃（PAH），再经60%硫酸净化，SephadexLH-20色谱柱富集样品中PAH，用高效液相色谱仪检测。２、操作方法（１）皂化称取100g样品直接皂化（２）提取、净化环已烷萃取，甲醇水洗涤、水洗涤浓缩60%硫酸洗涤、水洗涤过滤（过硅胶、无水硫酸钠）、滤液浓缩苯并a芘的测定第19页（３）富集加样于SephadexLH-20柱上，异丙醇洗脱浓缩至干甲醇溶解、定容（１mL）（４）测定色谱条件：流动相甲醇：水（75:25）流速1.5mL/min色谱柱ODS4.6mm×250mm柱温30℃紫外检测器（287nm）进样测定峰面积，比较定量。