疟原虫镜检技术28

泗阳县人民医院检验科王恒松疟原虫镜检技术现在是1页\一共有66页\编辑于星期日疟原虫的基本形态特征血片制作与染色疟原虫计数显微镜的维护与保养现在是2页\一共有66页\编辑于星期日

疟疾是由蚊子传播的寄生虫病，它的病原体是疟原虫。寄生于人体的疟原虫有4种现在是3页\一共有66页\编辑于星期日疟原虫基本结构疟原虫基本构造为核、细胞质（胞浆）和疟色素。原虫经姬氏Giemsa或瑞氏Wright染色：

核呈红色,胞质呈兰色，疟色素为本色胞浆疟色素核现在是4页\一共有66页\编辑于星期日1.核

呈鲜红色，呈圆形或椭圆形。核的结构致密，只有在个别发育阶段较为疏松，例如间日疟原虫雄配子体的核。疟原虫基本结构现在是5页\一共有66页\编辑于星期日2.细胞浆

蓝色或深蓝色，随着虫体发育长大，细胞浆逐渐增多。疟原虫基本结构胞浆现在是6页\一共有66页\编辑于星期日疟原虫基本结构不着色，颜色和颗粒的形状，因疟原虫种类而异，疟色素在虫体内散在分布或聚集成团块。间日疟原虫－－呈短棒状，黄褐色；恶性疟原虫－－呈细砂状，黑褐色；三日疟原虫－－呈砂粒状，深褐色；卵形疟原虫－－与间日疟原虫相似。3.疟色素疟色素现在是7页\一共有66页\编辑于星期日滋养体期：早期、晚期滋养体裂殖体期：未成熟、成熟裂殖体配子体期：雌、雄配子体疟原虫在RBC内各期形态各不相同疟原虫在红细胞内按照生长发育繁殖的阶段不同疟原虫基本结构现在是8页\一共有66页\编辑于星期日红细胞通常涨大薛氏点明显环状体较粗大滋养体胞浆有阿米巴样伪足血片中可见各期的原虫形态成熟裂殖体约含12-24个裂殖子，排列不规则

间日疟（P.vivax）

鉴定要点现在是9页\一共有66页\编辑于星期日虫体约占RBC直径的1/3，一个RBC含有一个原虫，偶尔2个核红色，1个，位于虫体一侧，颇似戒指的红宝石。胞质较少，淡蓝色，呈环状，中间为大空泡。1.早期滋养体--环状体间日疟原虫薄血膜现在是10页\一共有66页\编辑于星期日2间日疟原虫--晚期滋养体虫体由小渐大，活动显著，充满RBC胞质变形，有伪足伸出，形态不规则。有数个空泡。核红色，增大疟色素增多，呈黄褐色红细胞胀大，颜色变淡，出现淡红色的薛氏小点。

薄血膜现在是11页\一共有66页\编辑于星期日3间日疟原虫--未成熟裂殖体虫体变圆，空泡消失核开始分裂胞浆未分裂疟色素黄棕色，开始集中薄血膜现在是12页\一共有66页\编辑于星期日4.间日疟原虫-成熟裂殖体大小：体积大，不规则的圆形裂殖子：数目为12-24不等,平均16个左右，排列不规则核

分裂胞浆：分裂疟色素：位于中央或一边薄血膜现在是13页\一共有66页\编辑于星期日5.1间日疟原虫--雌配子体虫体较大，占满胀大的红细胞胞质致密，色深蓝核小致密，深红色，多位于虫体一侧疟色素分散5.2间日疟原虫--雄配子体虫体较小，胞质蓝色而略带红核大疏松，淡红色，多位于虫体的中央。疟色素均匀散在薄血膜现在是14页\一共有66页\编辑于星期日红细胞不涨大1个RBC内2个以上原虫常见，环状体内可有2个核

环状体可贴在红细胞边缘血片中除R、G外没有其他发育期配子体呈新月形或腊肠形成熟裂殖体约含16-32个裂殖子，排列不规则可出现茂氏点恶性疟（P.falciparum）鉴定要点现在是15页\一共有66页\编辑于星期日恶性疟原虫--环状体RBC不胀大可见数粒，大小不一，红色粗大的茂氏点核1个，但2个常见红细胞常含2个以上原虫虫体常位于红细胞的边缘，呈“鸟飞状”薄血膜现在是16页\一共有66页\编辑于星期日恶性疟原虫—大滋养体

一般不出现在外周血中体小结实，圆形，不活动疟色素集中一团，黑褐色原虫此时开始集中在内脏毛细血管薄血膜现在是17页\一共有66页\编辑于星期日恶性疟原虫—成熟裂殖体

裂殖子8～36个，通常18～24个，排列不规则疟色素集中成一团虫体占红细胞体积的2/3至3/4薄血膜现在是18页\一共有66页\编辑于星期日

恶性疟原虫新月形，两端较尖核致密，深红色，常位于中央疟色素黑褐色，分布于核周围胞浆呈蓝色雌配子体雄配子体腊肠形，两端钝圆胞质色蓝而略带红核疏松，淡红色，位于中央疟色素黄棕色，小杆状，在核周围较多薄血膜现在是19页\一共有66页\编辑于星期日红细胞不涨大或略小环状体中等大小，核较大，胞浆粗厚胞浆不活跃呈带状形成熟裂殖体呈菊花状,内含6-12个裂殖子

5.雌雄配子体小于正常红细胞，疟色素呈深褐色

6.常可查见各阶段的疟原虫三日疟（P.malariae）

诊断要点现在是20页\一共有66页\编辑于星期日与间日疟原虫的环状体颇相似三日疟原虫--环状体现在是21页\一共有66页\编辑于星期日三日疟原虫—大滋养体虫体常呈带状胞浆蓝色，现在是22页\一共有66页\编辑于星期日三日疟原虫—裂殖体虫体小于正常红细胞裂殖子6～12个，排列呈菊花状疟色素呈深褐色，常聚集在中央现在是23页\一共有66页\编辑于星期日虫体小于正常红细胞,呈圆形核红，偏于一侧胞浆呈蓝色疟色素深褐色三日疟原虫--大配子体现在是24页\一共有66页\编辑于星期日虫体小于正常红细胞三日疟原虫---小配子体现在是25页\一共有66页\编辑于星期日卵形疟（P.ovale）

诊断要点红细胞略涨大或正常，卵圆形或边缘呈锯齿状环状体中等大小，核较大，胞浆粗厚薛氏点出现较早粗大，量多成熟裂殖体约含6-12个裂殖子

5.常可查见各阶段的疟原虫

现在是26页\一共有66页\编辑于星期日环状体滋养体裂殖体配子体卵形疟现在是27页\一共有66页\编辑于星期日

被寄生的红细胞

间日疟原虫大小

斑点胀大滋养体期开始出现薛氏点(Schuffner‘sdots)，出现稍晚，鲜红色，细小数多

恶性疟原虫正常或略缩小

常见有茂氏点(Maurer‘sdots)

，紫褐色，粗大数少三日疟原虫正常或缩小

常见有齐氏点(Ziemann‘sdots)，淡红色，微细卵形疟原虫略大或正常感染红细胞边缘呈距齿状常见有薛氏点,出现较早，环状体阶段可见，红色，微粗疟原虫基本结构现在是28页\一共有66页\编辑于星期日

寄生的红细胞:经染色后，因细胞内血红蛋白溶解，轮廓消失，但有时尚留下残骸的“影子”或点彩。厚血膜由于用血量多，血膜小，细胞重迭，干燥缓慢，各期疟原虫的体积都略为缩小，其中大、小滋养体的形态有较大改变，裂殖体和配子体的形态则变化不大。厚血膜中疟原虫的形态：厚血膜现在是29页\一共有66页\编辑于星期日间日疟原虫

厚血膜环状体配子体滋养体裂殖体现在是30页\一共有66页\编辑于星期日恶性疟原虫厚血膜RingsGametocytes现在是31页\一共有66页\编辑于星期日PM三日疟原虫厚血膜配子体滋养体裂殖体现在是32页\一共有66页\编辑于星期日血片中可见恶性疟环状体滋养体裂殖体配子体间日疟三日疟卵形疟现在是33页\一共有66页\编辑于星期日

由于在血膜制备过程中红细胞溶解，因而其原形态消失，且染液和玻片上可能存在杂质等，要根据疟原虫的三个基本要素仔细加以鉴别。（1)疑似疟色素厚血膜在制作和染色过程中，血膜上的染料残渣及空气中或耳垂上的尘埃，有时可误认为疟色素。疟原虫与其他异物的鉴别现在是34页\一共有66页\编辑于星期日（2）疑似疟原虫核细菌尤其是球菌或白细胞碎裂后散出的颗粒，常染成红色小点，常与疟原虫的核相似。（3）疑似疟原虫胞浆

网织红细胞的残骸和白细胞的残骸，常被染成蓝色，颇似疟原虫的胞浆，有时因与上述红点巧合一起，而容易误认为疟原虫的大滋体，可依据疟色素的特点加以区别疟原虫与其他异物的鉴别现在是35页\一共有66页\编辑于星期日薄血膜中常见的血液成分血小板中性粒细胞单核细胞淋巴细胞嗜酸性粒细胞（4）血液成份与分析现在是36页\一共有66页\编辑于星期日（5）杂质---类似疟原虫的物质疟原虫与其他异物的鉴别现在是37页\一共有66页\编辑于星期日（6）形态失常疟原虫成份丢失。成份增加。如在多虫感染、多核以及多虫重叠时疟原虫形态构造会有异于正常。形态改变。恶性疟粗大的环状体。现在是38页\一共有66页\编辑于星期日药物影响。服氯喹后,大滋养体胞浆停滞发育，失去阿米巴样形态，并发生碎解和色泽加深.

服伯喹后,配子体的核和胞浆破碎，疟色素粗大并相对集中等。现在是39页\一共有66页\编辑于星期日血片的制作与染色

现在是40页\一共有66页\编辑于星期日血液涂片镜检疟原虫目前仍是确诊疟疾和鉴别虫种的主要方法，玻片清洁与否，血片制作的质量和染色的好坏，直接影响镜检的速度和准确性。现在是41页\一共有66页\编辑于星期日血片制作所需材料:

载玻片采血针

75％酒精棉球玻片盒现在是42页\一共有66页\编辑于星期日载玻片的清洗：新玻片的清洗方法用加有洗洁精或洗衣粉的热水洗涤，浸于95%的乙醇中1小时以上已用过的玻片：用加有洗衣粉的热水洗涤，浸于95%的乙醇中1小时以上

载玻片现在是43页\一共有66页\编辑于星期日现在是44页\一共有66页\编辑于星期日取血部位:指尖耳垂血片制作现在是45页\一共有66页\编辑于星期日标准的推片姿势现在是46页\一共有66页\编辑于星期日薄血膜的涂制：取血液1-1.5μl血滴置于载玻片的中央，将推片的一端置于血滴之前，当血液在载玻片与推片之间向两侧扩展至约2cm宽时，两玻片保持20-30°角，推成舌状薄血膜，长约2-2.5CM。血片制作现在是47页\一共有66页\编辑于星期日

血片制作

厚血膜的涂制：取血液4-5μl

血滴置于载片的中央偏右1/3，由里向外划圈涂成直径为0.8-1厘米厚薄均匀、圆形厚血膜.血片制作现在是48页\一共有66页\编辑于星期日

每张载玻片上分别做1个薄血膜，1个厚血膜。标准血膜的位置如下图所示。血片制作现在是49页\一共有66页\编辑于星期日厚、薄血膜优缺点

厚血膜

薄血膜

优点血量多，面积小，原虫检出率高红细胞完整，原虫形态改变不大，原虫易于辨认

缺点原虫在干燥过程中皱缩，红细胞消失，原虫变形较大，原虫鉴定困难血量比厚血膜少许多，面积比厚血膜的大。检查费时，原虫检出率较低

用途用于疟疾病人检查原虫虫种、虫期鉴定及初学者教学标本现在是50页\一共有66页\编辑于星期日血片染色两种染色方法:吉氏染色法瑞氏染色法常用吉氏染色法现在是51页\一共有66页\编辑于星期日血片的染色待血片完全干燥后才可染色1．血膜的固定--甲醇现在是52页\一共有66页\编辑于星期日

吉氏染液：染色方法薄血膜经甲醇固定干燥后，将血片平放，用PH7.0-7.2的磷酸缓冲液或蒸馏水将吉氏原液稀释，原液与缓冲液为1:20。混匀染色20-30分钟，晾干镜检。现在是53页\一共有66页\编辑于星期日厚血膜溶血染色

放置多时未染色的血片（2天以上，薄片已用甲醇固定），在染色之前，须在厚血膜上用清水进行溶血，待血膜全部溶解后倒掉，用吉氏染液染色,清水漂洗干净,晾干。现在是54页\一共有66页\编辑于星期日染色用水和冲洗用水pH7.0～pH7.2缓冲蒸馏水效果最佳。先制备好两种贮备液贮备液I1/15M磷酸氢二钠（Na2HPO4）溶液

Na2HPO49.5g

蒸馏水1000ml贮备液Ⅱ1/15M磷酸二氢钾（KH2PO4）溶液

KH2PO49.07g

蒸馏水1000ml现在是55页\一共有66页\编辑于星期日缓冲蒸馏水配制PHM/15Na2HPO4M/15KH2PO4DW

(ml)(ml)(ml)7.063379007.168329007.27327900缓冲蒸馏水宜用时新鲜配制为好。现在是56页\一共有66页\编辑于星期日着色较好的血片，肉眼看上去呈淡紫红色，不应该出现蓝—绿色或红色；镜检红细胞呈淡红色，嗜酸性细胞的颗粒呈鲜红色，淋巴细胞及疟原虫的胞浆呈蓝色或淡蓝色，白细胞的核呈紫蓝色，疟原虫的核呈红色，疟色素清晰可见，在显微镜下仅有小量染液沉淀。

现在是57页\一共有66页\编辑于星期日血片制作注意事项（1）在制作血片前，首先要核对患者的姓名、年龄和住址（2）载玻片必须清洁无油污，理想的薄血膜是一层血细胞均匀分布不重叠、无裂缝、无皱折和空泡，血膜末端呈舌状。现在是58页\一共有66页\编辑于星期日（3）厚血膜厚度以一个油镜视野内可见5-10个白细胞为宜。（4）制成的血片在未干前不能倾斜放置，待其自然干燥，不要加热，加热会使原虫变形，影响镜检结果．血片制作注意事项现在是59页\一共有66页\编辑于星期日（1）染料溶剂的质量（2）染液的新旧（3）染液稀释后使用时间原液必须临用时稀释，随配随用。（4）染液的稀释浓度（5）