牛多杀性巴氏杆菌研究进展

内容提要分类菌形和培养特性毒力因子多杀性巴氏杆菌导致的牛病微生物学诊断防治现在是1页\一共有28页\编辑于星期日1、分类巴氏杆菌属多杀性巴氏杆菌：多杀亚种、杀禽亚种、败血亚种、杀虎亚种多杀性巴氏杆菌是本属中最重要的病原菌，具有广泛的的疾病谱，可引起牛、家禽、猪、兔、绵羊、山羊、野生动物和人感染发病，主要表现为禽霍乱、猪萎缩性鼻炎、牛出血性败血症，牛羊地方性流行性肺炎等。现在是2页\一共有28页\编辑于星期日分型：根据荚膜抗原和脂多糖的不同，可将其分为5个血清群（A、B、D、E、F）和16个血清型（1-16），不同的血清群和血清型往往与特定疾病相关联。禽：以A群为主，D群，F群（火鸡）猪：A、B、D群牛：A（呼吸道疾病）、B、E（出血性败血症）、F（纤维素性胸膜炎）现在是3页\一共有28页\编辑于星期日国内禽：A型为主；猪：A、B型为主，D型其次；牛：以往以B型为主，近年有A型的报道；羊：B型为主；兔：A型为主。现在是4页\一共有28页\编辑于星期日2、菌形和培养特性普通鲜血琼脂培养基、马丁肉汤、脑心浸液培养基上均可生长；菌落呈粘液型，无溶血现象；麦康凯培养基上不生长。菌体呈短杆状，单个散在或短链排列，革兰氏染色阴性，瑞氏染色呈典型两极着色。现在是5页\一共有28页\编辑于星期日3、毒力因子3.1粘附素细菌感染的第一步是粘附在宿主细胞或细胞外基质蛋白上，粘附素介导的粘附作用是潜在的致病因素。

不同多杀性巴氏杆菌的粘附素能结合到不同的细胞类型、组织或器官上，反应了血清群的特异性宿主嗜性和致病性。

现在是6页\一共有28页\编辑于星期日Ⅳ型菌毛：见于血清A、B、D型菌株，不同分离株之间存在基因变异。血清A型Ⅳ型菌毛对宿主细胞的黏附作用还未见报道。39kDa外膜蛋白：分离于血清A型—巴氏杆菌脂蛋白E（PlpE）作为一种黏附因子，能在小鼠和家禽上刺激交叉免疫保护。现在是7页\一共有28页\编辑于星期日3.2FhaB—FhaB1(PM0057),FhaB2(PM0059)丝状血凝素（pfhaB1andpfhaB2）对宿主细胞的粘附起着关键的作用。信号标签突变证明在小鼠败血症模型中牛多杀性巴氏杆菌菌株的4个黏附相关基因毒力致弱，这些基因包括两个pfhaB1和pfhaB2基因，一个pfhaC，一个tadD基因。Tad基因编码的蛋白能组装形成Flp（菌毛低分子蛋白），Flp对生物膜的形成和定殖有重要作用。现在是8页\一共有28页\编辑于星期日3.3LPS纯化的LPS可能引起广泛的血管变化和死亡，但是产生低的免疫活性。LPS只有与蛋白复合时才具有免疫原性或保护性。LPS-蛋白复合物既能诱导体液免疫，也能诱导细胞免疫。现在是9页\一共有28页\编辑于星期日3.4荚膜荚膜作为一种重要毒力因子在多杀性巴氏杆菌的发病机理上的重要性已被大家所重视。然而，起初关注的焦点分别在引起禽霍乱和出血性败血症感染的荚膜血清A型和B型，关于牛巴氏杆菌荚膜在呼吸道疾病感染中的作用尚未见研究报道。荚膜的存在和厚度，与巴氏杆菌抗吞噬能力有关。用荚膜免疫小鼠不能刺激保护反应。现在是10页\一共有28页\编辑于星期日3.5外膜蛋白OmpA：36kDa，由两个结构域组成。OmpA可以作为粘附素，介导巴氏杆菌与宿主细胞和细胞外基质分子的粘附。具有免疫原性，但OmpA特异性单克隆抗体不能保护小鼠抵抗多杀性巴氏杆菌的致死性攻击。现在是11页\一共有28页\编辑于星期日OmpH：孔蛋白H，巴氏杆菌重要的外膜蛋白，表面暴露并高度保守，有作为候选疫苗的潜力。OmpH的表达受Fur（三价铁吸收调节器）蛋白调节，同时也受糖和铁浓度的影响。在生长环境中有葡萄糖存在时，OmpH基因在野生型的表达与突变体相比下降5倍。现在是12页\一共有28页\编辑于星期日3.6铁调节外膜蛋白（IROMPs）Choi-Kim等（1991）报道了3个铁相关外膜蛋白，其分子量分别为76kDa、84kDa、96kDa，这些蛋白只在细菌生长受限（限铁培养基）或在宿主体内时才会表达。

现在是13页\一共有28页\编辑于星期日3.7胞外酶一些胞外酶如蛋白酶和脂肪酶可能是多杀性巴氏杆菌的毒力因子。蛋白酶可能帮组病原体抵抗宿主IgG的防御功能并减少调理作用。现在是14页\一共有28页\编辑于星期日研究证实通过临床分离的来自不同种属的多杀性巴氏杆菌都有脂肪酶的产生，该酶在多杀性巴氏杆菌感染的发病机制中的作用尚不清楚。大多数分离菌都表现出唾液酸酶（神经氨酸酶）活性，促进病原体的繁殖，增强粘附能力。现在是15页\一共有28页\编辑于星期日4、多杀性巴氏杆菌导致的牛病4.1牛出血性败血症主要由多杀性巴氏杆菌B型引起散发或地方性流行出血性败血症现在是16页\一共有28页\编辑于星期日4.2牛呼吸系统疾病（BRDs）病因：病毒、支原体、细菌、环境应激等多杀性巴氏杆菌A型是导致牛呼吸系统疾病（BRDs，包括牛地方性流行性肺炎和断奶、应激引起的船运热）的主要病因之一现在是17页\一共有28页\编辑于星期日多杀性巴氏杆菌的存在与呼吸系统疾病的临床症状和血清急性期蛋白（如纤维蛋白素原、结合珠蛋白、血清淀粉A、LPS结合蛋白以及α1-酸糖蛋白）浓度存在显著关联，提示多杀性巴氏杆菌在牛呼吸系统疾病中起着非常重要的致病作用；其他病原包括支原体并没有得出与呼吸系统疾病的明显相关性，尽管支原体的分离率超过了90%，而多杀性巴氏杆菌的分离率为14%。现在是18页\一共有28页\编辑于星期日荚膜血清A型（A:3）多杀性巴氏杆菌是分离自牛呼吸系统疾病例中最常见的血清型。75%的多杀性巴氏杆菌分离株为吲哚阴性表型，有必要研究吲哚阴性型多杀性巴氏杆菌在小牛呼吸系统疾病中的致病作用。现在是19页\一共有28页\编辑于星期日多杀性巴氏杆菌与支原体可能有协同关系；也有报道共感染其它病原体，包括昏睡嗜血杆菌、曼氏溶血杆菌、冠状病毒、腺病毒、副流感病毒-3和牛呼吸道合胞病毒。现在是20页\一共有28页\编辑于星期日抗生素耐药性评估常在菌与致病菌的差异：采用限制性内切酶分析(REA)、核糖分型、rRNA测序、随机扩增多态性DNA(PCR指纹图谱)、脉冲场凝胶电泳(PFGE)和多位点序列分析现在是21页\一共有28页\编辑于星期日临床病症潜伏期7-10天，而后到达症状典型期，20天。发病率在初始爆发之后出现16天的高峰期。其时间范围可因持续引进新的动物到患病牛群中而延长。虽然疾病发生可持续整年，但在进入冬天时达到高峰期。精神沉郁，食欲不振，咳嗽，鼻液以及发烧。现在是22页\一共有28页\编辑于星期日病理变化急性的纤维性化脓，亚急性的慢性纤维性化脓，纤维性到纤维性化脓，化脓以及纤维性坏死。现在是23页\一共有28页\编辑于星期日在感染4天后，出现严重的支气管炎。同时，含有中央坏死和矿化碎片的中性粒细胞和巨噬细胞形成局灶性病变，而肺小叶间隔出现严重的水肿现象。在感染7天时，肺实质形成早期脓肿和肺小叶间隔形成血栓。在感染10天时，肺实质的脓肿成熟而且周围的中性粒细胞层、巨噬细胞和纤维组织中有坏死现象。现在是24页\一共有28页\编辑于星期日5、微生物学诊断病原分离鉴定常规细菌学鉴定：培养特性和形态特征、生化特性、致病性试验、细菌16SrRNA基因序列分析分子生物学鉴定：多杀性巴氏杆菌种特异性基因Kmt-1和荚膜血清型特异性基因hyaD-hyaC、bcbD、dcbF、ecbJ、fcbD现在是25页\一共有28页\编辑于星期日6、防治疫苗：灭活疫苗、弱毒疫苗，不同血清型之间交叉保护力较低基因工程疫苗（已发现有3种外膜蛋白可提供免疫保护：PlpE—给小鼠和鸡提供异源保护；OmpH肽段—给小鼠提供同源保护，给鸡提供异源