紫外可见分光光度计的性能检验

紫外可见分光光度计的性能检验第1页，共62页，2023年，2月20日，星期六一、实验目的

1、掌握紫外－可见分光光度计性能的检验方法

2、学会UV1100型紫外－可见分光光度计的使用方法

二、实验原理对分光光度计进行性能检查，以保证测定结果的准确。第2页，共62页，2023年，2月20日，星期六三、仪器与试剂

UV－1100型紫外－可见分光光度仪石英比色皿（一对）擦镜纸蒸馏水

6mg/100mlK2Cr2O7溶液

0.002mol/molKMnO4溶液

第3页，共62页，2023年，2月20日，星期六四、实验内容及操作步骤

1、比色皿的配对性注入蒸馏水两个比色皿分别λ＝440nm以一个比色皿为空白（T1＝100％）测定另一个比色皿的T2ΔT=T1-T2ΔT<0.5%ΔT>0.5%两个比色皿配对两个比色不配对，应进行校正第4页，共62页，2023年，2月20日，星期六

2、波长精度的检查以蒸馏水为空白

测定KMnO4溶液的吸收曲线若测得的最大吸收波长在525±1nm以内说明仪器波长精度符合使用要求5008000.40.2λ(nm)A0第5页，共62页，2023年，2月20日，星期六

3、重复性的检查以0.02mol/L的H2SO4为空白在257nm处同一K2Cr2O7溶液的T，连续测定7次测定求出极差若极差<0.5%仪器的重复性符合使用要求第6页，共62页，2023年，2月20日，星期六

4.吸收值准确度的检查λ＝235nm、257nm分别测定K2Cr2O7溶液吸光度并计算吸收系数以0.02mol/L的H2SO4为空白(T＝100%）313nm、350nm与下表规定的吸收系数比较若相对偏差在1%以内说明仪器符合使用要求第7页，共62页，2023年，2月20日，星期六波长/nm

吸收系数235123.0～126.0257142.8～146.231347.0～50.3350105.5～108.5第8页，共62页，2023年，2月20日，星期六五、思考题1、同种比色皿透光度的差异对测定有何影响？2、检查分光光度计的重复性对测定有什么实际意义？第9页，共62页，2023年，2月20日，星期六实验二

吸收曲线的测绘及

吸收系数的测定

第10页，共62页，2023年，2月20日，星期六一、实验目的

1、掌握测绘吸收曲线的方法

2、学会测定吸收系数二、实验原理

1、若溶剂固定不变，化合物吸收曲线所出现的λmax、λmin或λ(S)为一定值，且数目也一定，为鉴别化合物提供了有力的证据。

2、百分吸收系数是指当溶液浓度为1%，液层厚度为1cm时的吸光度。即第11页，共62页，2023年，2月20日，星期六三、仪器与试剂

UV－1100型紫外－可见分光光度计石英比色皿（一对）

95%乙醇（A.R）

0.005%丹皮酚对照品溶液第12页，共62页，2023年，2月20日，星期六四、实验内容及操作步骤丹皮酚对照品10mg95％乙醇溶解定容至10ml摇匀精密吸取5ml置100ml量瓶95％乙醇定容作为母液备用母液中丹皮酚的含量为0.005%第13页，共62页，2023年，2月20日，星期六1、吸收曲线的测绘精密吸取母液1ml置10ml量瓶95％乙醇定容以95％乙醇为空白，进行光谱扫描，得到吸收曲线图。2、吸收曲线的测绘利用上述溶液，在274nm波长处测定其吸光度并计算百分吸收系数。第14页，共62页，2023年，2月20日，星期六实验三

分光光度法测定槐花中总黄酮的含量第15页，共62页，2023年，2月20日，星期六一、实验目的

1、掌握用标准曲线法测定槐花中总黄酮含量的方法

2、巩固紫外－可见分光光度计的操作方法二、实验原理黄酮类化合物分子中的羰基、羟基等结构可与金属盐类试剂如铝盐、铅盐等生成有色配合物，可用于定量分析。第16页，共62页，2023年，2月20日，星期六三、仪器与试剂UV－1100型紫外－可见分光光度仪石英比色皿（一对）5%NaNO2溶液10%Al(NO3)3溶液NaOH试液

芦丁对照品

槐花药材

其余试剂均为分析纯；

第17页，共62页，2023年，2月20日，星期六四、实验内容及操作步骤1、对照品溶液的制备加甲醇，水浴使溶解芦丁对照品50mg置25ml量瓶中放冷，加甲醇至刻度，摇匀精密吸取10ml置100ml量瓶中加水至刻度，摇匀即得（每1ml中含无水芦丁0.2mg）第18页，共62页，2023年，2月20日，星期六2、标准曲线的制备精密量取对照品溶液0、1、2、3、4、5ml分别置25ml量瓶中各加H2O加5%NaNO21ml摇匀放置6min10%Al(NO3)31ml摇匀放置6min加加NaOH试液

10ml加水至刻度摇匀，放置15min至5ml第19页，共62页，2023年，2月20日，星期六λ=500nm以相应试剂为空白测定吸光度（A）以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线吸光度浓度（mg/ml）第20页，共62页，2023年，2月20日，星期六3、供试品溶液的制备槐花粗粉1g精密称定置索氏提取器中加乙醚加热回流至提取液无色放冷弃乙醚液加甲醇90ml加热回流至提取液无色移至100ml量瓶中甲醇少量多次洗涤容器洗液并入量瓶中加甲醇至刻度摇匀精密吸取10ml置100ml量瓶中加水至刻度，摇匀即得第21页，共62页，2023年，2月20日，星期六4、样品的测定精密吸取供试品溶液3ml置25ml量瓶中照标准曲线制备项下的方法自“加水至5ml”起从标准曲线上求出供试品溶液中芦丁的重量，即得依法测定吸光度槐花中含总黄酮以无水芦丁（C27H30O16）计，不得少于8.0%。第22页，共62页，2023年，2月20日，星期六五、注意事项

1、对照品和样品应同时显色

2、显色剂加入的顺序、加入量和显色时间要正确六、思考题

1.分光光度法有哪些影响因素？

2.试述标准曲线法的优点。第23页，共62页，2023年，2月20日，星期六实验四、薄层板的制备第24页，共62页，2023年，2月20日，星期六一、实验目的掌握薄层板的制板方法。第25页，共62页，2023年，2月20日，星期六二、仪器与试剂天平（0.1g）研钵玻璃板10cm×20cmCMC-Na水溶液（3‰）蒸馏水薄层层析用硅胶GF254（青岛海洋化工厂）第26页，共62页，2023年，2月20日，星期六三、实验内容及操作步骤

1.洗板选取板面平整的玻璃板，洗净后放置在干净、平整的台面上，阴干备用。2．匀浆将吸附剂1份（3.0g）和水3份在研钵中向同一方向研磨混合均匀。第27页，共62页，2023年，2月20日，星期六

3．铺制将已调制好的吸附剂匀浆倒至玻璃板的一端，用研棒将匀浆引到玻板的各个边缘，轻轻震动，使吸附剂均匀铺开成一薄层。置水平台上阴干。4．活化将阴干的薄层板至于110℃烘箱中活化30分钟，置于有干燥器中备用。第28页，共62页，2023年，2月20日，星期六四、思考题

1．薄层板的铺制过程中应注意哪些问题？

第29页，共62页，2023年，2月20日，星期六实验五薄层色谱定性分析

（五味子的定性鉴别）

第30页，共62页，2023年，2月20日，星期六一、实验目的

1.掌握薄层色谱的定性分析方法。

2.熟悉薄层板的点样方法。第31页，共62页，2023年，2月20日，星期六二、实验原理

中药五味子中，五味子甲素为其主要有效成分之一，为了更好的进行定性鉴别，选用五味子甲素对照品和五味子对照药材进行对照，根据相同的组分在相同的条件下，应该有相同的颜色和比移值来作为定性鉴别的依据。五味子植株五味子药材第32页，共62页，2023年，2月20日，星期六三、仪器与试剂定量毛细管已制备好的薄层板（硅胶GF254

）展开缸所用试剂均为分析纯五味子粉末定量毛细管双槽展开缸对照品第33页，共62页，2023年，2月20日，星期六四、实验内容及操作步骤1.供试品液的制备：取五味子粉末1g，加三氯甲烷20ml，加热回流30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加三氯甲烷1ml使溶解，作为供试品液。2.对照药材溶液的制备：取五味子对照药材1g，同法制成对照药材溶液。3.对照品溶液的制备：取五味子甲素对照品，加三氯甲烷制成每ml含1mg的对照品溶液。

第34页，共62页，2023年，2月20日，星期六

4.吸取上述三种溶液各2μl，点于同一硅胶GF254薄层板上，以石油醚（30～60℃）－甲酸乙酯－甲酸（15∶5∶1）的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（254nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。第35页，共62页，2023年，2月20日，星期六五、思考题

1．如何克服薄层展开过程中的边缘效应？引起边缘效应的因素有哪些？

第36页，共62页，2023年，2月20日，星期六实验六、高效液相色谱仪的使用一、实验目的掌握高效液相色谱仪的使用方法了解高效液相色谱仪的结构第37页，共62页，2023年，2月20日，星期六高效液相流程图1溶剂贮器,2泵,3流量与速度检测装置,4进样阀,5预柱(保护柱),6分离柱(色谱柱),7检测器,8数据记录及处理系统,9废液瓶第38页，共62页，2023年，2月20日，星期六二、仪器与试剂

L-2000液相色谱仪（L-2400紫外检测器）C18反相键合色谱柱（250mm×4.6mm）微量进样器（25μl）过滤器（0.45μm）及脱气装置苯、甲苯、萘甲醇（色谱纯）重蒸馏水第39页，共62页，2023年，2月20日，星期六三、实验内容与步骤

（一）流动相的预处理

1．过滤流动相，根据需要选择不同的滤膜。

2．对抽滤后的流动相进行超声脱气10-20分钟。（二）安装色谱柱按色谱柱标示意流液方向安装好色谱柱。（三）液相色谱仪的使用方法

1.启动液相色谱仪第40页，共62页，2023年，2月20日，星期六

2.排除管道内空气

3.泵流速的设定

4.检测器波长的设定

5.打开T2000P色谱工作站

6.色谱柱预平衡

7．进样第41页，共62页，2023年，2月20日，星期六8.数据采集完毕后，点击停止进样9.点击“再处理”和“报告”图标对图谱进行再处理，出报告图10.实验完毕后冲洗色谱柱11.关闭工作站，关闭输液泵电源，关闭检测器电源、关闭仪器电源第42页，共62页，2023年，2月20日，星期六练习液相色谱仪使用的色谱条件、样品溶液和进样量

色谱条件流动相为甲醇∶水（80∶20）；固定相:C18反相键合色谱柱；检测波长为254nm；流速：1ml/min。样品溶液含苯、甲苯、萘浓度分别为1μg/ml的甲醇溶液。进样量：10μl。第43页，共62页，2023年，2月20日，星期六四、思考题流动相在洗脱前为何要进行脱气？第44页，共62页，2023年，2月20日，星期六一、实验目的

1.掌握利用高效液相色谱法进行定性及定量分析。

2.巩固高效液相色谱仪的使用方法。实验七、高效液相色谱定性及定量分析—中药赤芍中芍药苷的定性鉴别和含量测定

第45页，共62页，2023年，2月20日，星期六二、实验原理

1.采用与已知化合物对照,对组分进行定

性分析。

2.采用外标一点法进行含量测定。第46页，共62页，2023年，2月20日，星期六三、仪器与试剂

L-2000液相色谱仪（L-2400紫外检测器）

C18反相键合色谱柱（250mm×4.6mm）微量进样器（25μl）芍药苷对照品；赤芍药材其余试剂均为分析纯第47页，共62页，2023年，2月20日，星期六

四、实验内容及操作步骤

色谱条件

C18反相键合色谱柱；流动相：甲醇-0.05mol/L磷酸二氢钾缓冲溶液（40∶65）；检测波长为230nm。

对照品溶液的制备

精密称取五氧化二磷干燥36小时的芍药苷对照品适量，加甲醇配制成每1ml含0.5mg的溶液，即得。

第48页，共62页，2023年，2月20日，星期六供试品溶液的制备取本品粗粉约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，称定重量，浸泡4小时，超声处理20分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

测定分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。本品含芍药苷（C23H28O11）不得少于1.8%。第49页，共62页，2023年，2月20日，星期六五、思考题1．外标一点法的主要误差来源是什么？2．紫外检测器的优缺点是什么？第50页，共62页，2023年，2月20日，星期六实验八、气相色谱仪的使用一、实验目的1.掌握气相色谱仪的使用方法2.了解气相色谱仪的结构第51页，共62页，2023年，2月20日，星期六二、实验原理气相色谱法是采用气体作流动相（载气）流经色谱柱进行分离分析的方法。主要由气源部分、进样部分、色谱柱、柱温箱、检测器和数据处理系统组成。第52页，共62页，2023年，2月20日，星期六三、仪器与试剂岛津GC-2014气相色谱仪（FID检测器）樟脑对照品溶液试剂均为A.R纯第53页，共62页，2023年，2月20日，星期六四、实验内容及操作步骤

（一）启动GC-2014气相色谱仪（二）参数的设定（三）打开N2000色谱工作站（四）运行GC-2014气相色谱仪（五）进样第54页，共62页，2023年，2月20日，星期六（六）待数据采集完毕后，点击停止采集；（七）待样品分析结束后，在离线处理数据，察看数据报告，打印报告。（八）关机第55页，共62页，2023年，2月20日，星期六附:练习气相色谱仪使用的色谱条件、样品溶液和进样量

色谱条件：聚乙二醇（PEG）-20M毛细管柱（柱长30m，内径0.25mm，膜厚度0.25µm）；柱温为160℃。样品溶液樟脑对照品溶液。进样量：1μl。第56页，共62页，2023年，2月20日，星期六五、

思考题使用气相色谱仪时，应该注意那些问题？第57页，共62页，2023年，2月20