大肠杆菌培养专家讲座

微生物培养和利用第二节大肠杆菌培养和分离试验大肠杆菌培养第1页思索？

1.培养大肠杆菌需要配制培养基，培养基中应该添加哪些营养成份？培养基怎样灭菌？2.若大肠杆菌和其它微生物混杂在一起，怎样取得大肠杆菌纯种？取得纯种后怎样保留？

3.怎样处理大肠杆菌便于在显微镜下观察？大肠杆菌培养第2页试验主要原理1.培养大肠杆菌原理：大肠杆菌代谢类型为异养、兼性厌氧型，培养基中应加入有机碳源、氮源、水和无机盐。培养时应提供有氧环境。牛肉膏蛋白胨培养基配方：牛肉膏5g，蛋白胨10g，氯化钠5g，（20g琼脂）加水定容至1000mL大肠杆菌培养第3页2.平板划线法分离大肠杆菌原理用接种环在固体培养基表面连续划线，将聚集菌种逐步稀释分散到培养基表面。经屡次划线后，能够分离由一个细胞繁殖而来单菌落大肠杆菌培养第4页此法可将细菌分为两大类：不被脱色而保持蓝紫色者为革兰氏阳性菌（G+）；被脱色后又被染上红色者为革兰氏阴性菌（G-）。大肠杆菌(革兰氏阴性菌)金黄葡萄球菌(革兰氏阳性菌)细菌先经碱性染料结晶紫染色，再经碘液媒染（以增加染料与细胞亲和力）后，用酒精或丙酮脱色，再用番红复染。3.革兰氏染色，使大肠杆菌便于观察原理大肠杆菌培养第5页试验目标

1.配制牛肉膏蛋白胨固体、液体培养基，进行高压蒸汽灭菌2.掌握倒平板技术。3.利用液体培养基进行大肠杆菌扩增。

4.用平板划线法在固体培养基上进行接种5.培养微生物并观察大肠杆菌单菌落6.显微镜下观察大肠杆菌形态7.利用斜面培养基和划线取得单菌落进行纯培养。

大肠杆菌培养第6页斜面大肠杆菌菌种大肠杆菌培养第7页试验流程

LB液体LB固体50ml培养基配制和灭菌用于大肠杆菌扩增扩大培养（代替斜面菌种）倒平板，大肠杆菌划线培养取得单菌落（纯种分离）100mL

5mL

挑取单菌落或液体培养基，制片，显微镜下观察大肠杆菌大肠杆菌培养第8页

1.培养基配制和灭菌

称量溶化称量→溶化→调pH→分装→高压蒸汽灭菌→搁斜面大肠杆菌培养第9页分装加棉塞大肠杆菌培养第10页包扎大肠杆菌培养第11页高压蒸汽灭菌大肠杆菌培养第12页大肠杆菌培养第13页搁置斜面大肠杆菌培养第14页2.无菌操作倒平板3.平板划线法接种大肠杆菌培养第15页4.37℃恒温箱中倒置培养12~24h倒置培养原因：培养基中水分会以水蒸气形式蒸发，并凝结成水滴留在培养皿盖上；水蒸气形成水滴会落入培养基表面而且扩散开。假如培养皿中已形成菌落，则菌落中菌会随水扩散，菌落间相互影响，极难再分成单菌落，达不到分离目标。大肠杆菌培养第16页大肠杆菌培养第17页5.利用液体培养基扩大培养大肠杆菌摇床上震荡培养目标：6.显微镜下观察染色后大肠杆菌增加溶氧使菌体和培养液充分接触大肠杆菌培养第18页试验结果观察和分析

1.观察平板划线法取得单菌落大肠杆菌培养第19页大肠杆菌培养第20页请分析没有出现单菌落可能原因？菌液浓度大划线次数少培养时间长大肠杆菌培养第21页2.观察液体培养基浑浊度空白培养基生长细菌培养基大肠杆菌培养第22页3.显微镜下观察经革兰氏染色大肠杆菌大肠杆菌培养第23页1.平板划线法分离微生物纯种方法2.液体稀释涂布法大肠杆菌培养第24页1.试验结束后，用过细菌培养基等怎样处理？思索与讨论

加热灭菌后废弃，不能直接倾倒到无机环境中，预防细菌污染2.怎样保留菌种？在无菌操作下将单菌落用接种环取出，再划线接种在空白斜面上，37℃培养24h后，4℃冰箱保留。3.未接种培养基表面有菌落出现