实验二细菌涂(抹)片的制备和革兰氏染色课件_第1页
实验二细菌涂(抹)片的制备和革兰氏染色课件_第2页
实验二细菌涂(抹)片的制备和革兰氏染色课件_第3页
实验二细菌涂(抹)片的制备和革兰氏染色课件_第4页
实验二细菌涂(抹)片的制备和革兰氏染色课件_第5页
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文档简介

实验二细菌涂（抹）片的制备和革兰氏染色目的要求：1、掌握细菌抹片的制备方法和常用染色方法。2、认识革兰氏染色和抗酸性染色的反应特性。实验内容：1、

细菌抹片的制备：细菌抹片

的制备l

玻片准备：透明、洁净、无油渍。l

抹片：液体材料、非液体材料、组织脏器材料的抹片方法讲解、示范。l

干燥固定：火焰固定和化学固定的示范。讲解其目的及注意事项。2、

细菌涂片的制备：讲解并示范涂片、干燥、固定的方法。3、

细菌常用染色方法：革兰氏染色法革兰氏染色法：1.制片：取待检病料或细菌培养物常规抹（涂）片、干燥、固定。2.初染：滴加结晶紫，染色1-2分钟，水洗。3.媒染：用碘液冲去残水，并用碘液覆盖约1分钟，水洗。4.脱色：用滤纸吸取或甩去载玻片上的残水，将载玻片倾斜，在白色背景下，用滴管流加95%乙醇脱色，直至流出的乙醇无紫色时（20—30秒），立即水洗。5.复染：用复红液复染约2分钟，水洗。6.镜检：用滤纸吸水，干燥后，显微镜油镜观察。革兰氏染色法原理：革兰氏染色法将细菌分为G＋和G-，这由两类细菌细胞壁的结构和组成的不同而决定。用结晶紫初染后，所有的细菌都染上蓝紫色。碘作为媒染剂能与结晶紫结合形成结晶紫-碘的复合物，增强了染料与菌体的结合力。用乙醇脱色处理时，两类细菌的脱色效果是不同的。G＋细菌的细胞壁主要由肽聚糖形成的网状结构组成，且壁厚、类脂含量低，用乙醇脱色时使细胞壁脱水、网状结构孔径缩小，通透性降低，使得结晶紫—碘的复合物不易被洗脱而保留在细胞内。虽经洗脱和复染仍然保持初染剂的蓝紫色。G-细菌则不同，由于其细胞壁肽聚糖层较薄，类脂含量高，所以在脱色处理时，类脂被乙醇溶解，细胞壁的通透性增大，使结晶紫—碘的复合物比较容易被洗脱出来，用复染剂复染后，细胞被染上复染剂的颜色。G+菌与G-菌细胞壁的区别细胞壁

革兰阳性菌

革兰阴性菌强

度较坚韧较疏松10~15nm1~2层厚

度21~80nm肽聚糖层

可达50

层肽聚糖量

50%~80%5

%~80%15%~20%11~22%糖类量脂类量磷壁酸外

膜约45%1%~4%革兰氏染色法过程示意图革兰氏染

色法动画革兰阳性菌

革兰阴性菌革兰氏

染色法革兰氏染

色法动画

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