有机磷酸酯类中毒及搭救

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有机磷酸酯类中毒及搭救

ToxicationandDetoxicationofOrganophosphates

观测有机磷酸酯类（organophosphates）中毒的病症，理解搭救药阿托品、解磷定的搭救作用及机制。把握家兔耳缘静脉注射的方法。

Organophosphates通过抑制胆碱酯酶（cholinesterase，AChE）活性，使乙酰胆碱

（acetylcholine，ACh）在体内堆积，产生中毒病症。抗胆碱药阿托品能解除有机磷酸酯类中毒的M样病症，而解磷定可复活AChE，恢复其水解ACh的能力，对M及N样病症均有效，以缓解骨骼肌震颤的效果最快，两药合用可提高搭救效果。家兔，体重2.5～3.0kg。

兔固定箱、测瞳尺、听诊器、注射器（5ml、10ml、20ml）、针头、兔耳夹、脱脂棉球、台秤、722分光光度计、恒温水浴箱、试管及试管架、加样器、effendorff管、滤纸。

10%美曲膦酯[敌百虫(depterex)]、0.05%硫酸阿托品（atropinesulfate）、2.5%解磷定（pyridinealdoximemethiodide,PAM）、生理盐水（saline）。

1．健康家兔5只，称体重，分为5组，分别为空白对照组（甲）、模型组（乙）、给搭救药组：atropine组（丙）、PAM组（丁）、atropine+PAM组（戊），观测并记录各组家兔

的活动状况：呼吸（频率、幅度、肺呼吸音、有无呼吸困难，呼吸道有无分泌物等），瞳孔大小（pupillarysize），唾液分泌（salivarysecretion），大小便（urinationanddefecation），肌

张力（musculartension）及有无肌肉震颤（muscletremor）等。2．将甲、乙、丙、丁、戊、五只家兔分别放于兔固定箱内，甲兔由耳缘静脉给予saline（1ml/kg）；乙、丙、丁、戊兔分别由耳缘静脉缓慢注入depterex（1ml/kg），给药后密切

观测上述指标的变化并记录。待M样、N样中毒病症均较明显时，乙兔不予搭救药，使其中毒病症充分表现出来，假使死亡，分析死亡原因；丙兔耳缘静脉注射atropine（2ml/kg），丁

兔耳缘静脉缓慢注射PAM（4ml/kg），戊兔耳缘静脉先atropine（2ml/kg），而后注射PAM（4ml/kg），观测中毒病症有何变化，atropine和PAM分别改善了哪些病症？3.试验结果记录:

一般呼吸心率瞳孔唾液大小便肌张力肌震颤状态次/min次/min大小分泌

给药前给敌百虫给阿托品

给解磷定

阿+解

附：胆碱酯酶活性测定（determinationofactivityofAChE）

学习AChE活性的测定方法,观测中毒前后及使用不同搭救药后AChE活性的变化。

ACh在血液中被AChE水解，产生醋酸和胆碱。在一定范围，水解的ACh量与AChE的活性成正比。故在反应体系中，参与定量的ACh使之参与

反应，通过测定剩余的ACh即可计算出水解ACh的量，从而推算出AChE活性。

ACh的呈色反应

ACh可与羟胺反应生成乙酰羟肟酸，后者在酸性条件下与三价铁离子形成褐色的羟肟酸铁络合物，其颜色的深浅可反映ACh含量。反应过程如下：(1)

盐酸羟胺与氢氧化钠作用释放出游离羟胺NH2OH·HCL+NaOH→NH2OH+NaCL+H2O

(2)剩余ACh与游离羟胺作用，生成羟肟酸化合物

（CH3）≡N—(CH2)2OCOCH3+NH2OH→CH3CONHOH+（CH3）3≡N—（CH2）2OH(3)羟肟酸化合物在酸性环境中与三氯化铁生成褐色复合物（羟肟酸铁络合物）酸性Fe/3

FeCL3+CH3CONHOH

CH3CONHO+HCL(棕红色)

(1)7×10-3mol/L氯化ACh：取ACh用蒸馏水配成2.54％溶液，冰箱保存。用前以蒸馏水20倍稀释即成7×10-3mol/LACh溶液。(2)1mol/L盐酸羟胺（NH2OH·HCL）：取25g盐酸羟胺，加蒸馏水359ml，冰箱保存。(3)3.5NNaOH。(4)4NHCL。

(5)3.7×10-1mol/L三氯化铁（FeCL3·6H2O）：取10g三氯化铁，加蒸馏水至20ml，浓HCl0.84ml，加温溶解，最终加蒸馏水至100ml制成3.7×10-1mol/L三氯化铁（FeCL30.1NHCl）溶液。

(6)PH7.2的磷酸缓冲液：取Na2HPO4·12H2O16.72g和KH2PO42.72g加蒸馏水至100ml，冰箱保存。

(1)家兔在给药前、中毒病症明显后、给atropine待病症明显缓解后、给予PAM搭救后0min、10min、20min、30min等时间点分别由兔耳缘静脉或股静脉取血0.5ml，测定AChE活性。具体步骤见表1。

(2)取20ml试管若干个，按表参与磷酸缓冲液0.85~1ml，血样0~0.15ml，置37℃±1℃恒温水浴中预热3~5min。

(3)参与7×10-3mol/LACh溶液1.0ml（用加样器），于37℃±1℃水浴中反应40min，每隔10min摇动一次。

(4)反应40min后马上参与碱性羟胺（1mol/LNH2OH·HCL与3.5NNaOH溶液在用前20min等容混合，并不断震荡）4.0ml。

(5)依次参与4NHCL和3.7×10-1mol/LFeCL3各2ml，每参与一种试剂都要充分振荡。(6)上述反应液均用滤纸过滤，将滤液倒入比色杯中，以530nm的波长比色。(7)对照管（标准ACh值）：为反应体系中全量ACh对照。空白管：为无血、无Ach的其它试剂对照。对照管与空白管操作步骤同其它样品（见表）。以上操作顺序见表。

1.计算酶活性：全血AChE活性值以0.15ml全血在40min内水解ACh的μmol数表示（μmol/0.15ml/40min）①酶活性计算：

OD标准管—OD测定管全血AChE活性值=×7OD标准管

②酶活性值百分数计算样本AChE活性值

×100%

正常全血AChE活性值

1．绘制时效曲线

根据给予PAM搭救后几个时间点的AChE活性值制图。酶活性（％）时间

1.Depterex属于剧