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MTT实验操作流程MTT实验标准操作流程1.原理瓒(Formazan)并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。二甲基亚砜(DMSO)能溶解形成的量与细胞数成正比。根据测得的吸光度值(即OD值)，来判断活细胞数量，OD值越大，细胞活性越强(如果是测药物毒性，则表示药物毒性越小)。2.试剂及耗材3.注意事项，小剂量分装，用避光袋或锡箔纸包住避光以免分解，当MTTDMSO准曲线制作la)每孔加入10μLMTT溶液(5mg/ml)，继续细胞培养箱培养4-6h；b)小心吸去孔内培养液；c)每孔加入150μLDMSO，使结晶物充分溶解；d)加DMSO后10min内，用酶标仪检测各孔波长μl570nm的吸光值；细胞计数后调整其浓度至5-10×104/ml，药物毒性实验一般每孔细胞数量5000—10000个(具体数目根据预实验判断)。此外，还应根据细胞本身特性，如生长快慢，来决定细胞数量。比如：生长较快l度为5000—10000/孔(边缘孔用无菌PBS填充)。5%CO2，37C培养箱继续培养，待细胞单层铺满孔底(96孔平底板),加入浓度梯度的药物。(原则上，细胞贴壁后即可加药，或两h，或半天时间，但我们常在前一天下l释好的药物体积应略按照药物作用时间点，每24h取出一块96孔板检测：a)每孔加入10μLMTT溶液(5mg/ml)，继续细胞培养箱培养4-6h；b)小心吸去孔内培养液；c)每孔加入150μLDMSO，置上低速振荡10min，使结晶物充分溶解；d)加DMSO后10min内，用酶标仪检测各孔波长570nm的吸光值；同时设置调零孔(培养基、MTT、二甲基亚砜)，对照孔(细胞、相同浓度的药物溶解分别收集各组对数期的细胞，调整细胞悬液浓度；取4块96孔板，每孔加入100μL细胞悬液，铺板使待测细胞为5×103cell/孔(边缘孔用无菌PBS填充以消除边缘效应)，每组设置3个复孔；5%CO2，37C培养箱继续培养，每24h取出一块96孔板检测：a)每孔加入20μLMTT溶液(5mg/ml)，继续细

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