胃癌组织EGFR、HER-2与TopoⅡα的表达及临床意义

胃癌组织EGFR、HER-2与Topolla的表达及临床意义梁秀菊।高明।周云2郑州大学第一附属医院肿瘤科郑州450052【摘要】目的：研究EGFR、HER-2、TopoIIa在胃癌组织中的表达与临床病理特征之间的关系，探讨其做为分子靶点指导胃癌分子靶向治疗的临床意义。方法：应用免疫组化方法检测108例胃癌及22例正常胃组织中EGFR、HER-2、TopoIIa的表达情况，分析三者的表达与临床病理特征之间的关系，并对其相关性进行分析。结果：108例胃癌组织中EGFR、HER-2、TopoIIa阳性表达率分别为41.67%、31.5%、53.7%,22例正常胃组织阳性表达率分别为和0%、0%、4.5%。EGFR、HER-2、TopoIIa蛋白的高表达与胃癌的部位、细胞分化程度、浸润深度、淋巴结转移及TNM分期均呈正相关；而与患者的性别、年龄及肿瘤的大小无明显关系。EGFR与HER-2；EGFR与TopoIIa；HER-2与Topolla的表达均呈正相关。结论：EGFR、HER-2、TopoIIa在胃癌组织表达增高与胃癌的发生发展密切相关，EGFR、HER-2、TopoIIa在胃癌组织高表达为胃癌分子靶向治疗提供了理论依据。【关键词】胃癌；EGFR；HER-2；TopoIIa；靶向治疗中图分类号：735.2文献标识码：AExpressionandclinicalsignificanceofEGFR>HER-2>TopoIIain

gastriccancer[Abstract]Objective:ToinvestigatetheexpressionofEGFR、HER-2、TopoIIaingastriccancersandtheirrelation-shipwithclinicalpathologiccharacter.Exploretheirsclinicalsignificanceasthemoleculartargetstoguidethemoleculartargetedtherapyofgastric.Methods:ExpressionsofEGFR,HER-2andTopoIIaproteinsin108gastriccancertissuesamplesand22normaltissuesamplesweredetectedwithimmunohistochemicalstaining.,toanalyzetherelationshipbetweentheexpressionof।梁秀菊，女，郑州大学第一附属医院肿瘤科在读研究生，恶性肿瘤内科治疗与应用基础，电话：，邮箱।高明，男，郑州大学第一附属医院肿瘤科，主治医师，恶性肿瘤内科治疗与应用基础。2周云通讯作者男河南省人民医院肿瘤科主任医师教授，硕士研究生导师，研究方向：恶性肿瘤内科治疗与应用基础。E-mail：EGFR、HER-2>TopoIIaandthecorrelationbetweents:TheexpressionratesofEGFR,HER-2andTopoIIaproteiningastriccancertissuesampleswere41.67%,31.5%and53.7%,respectivelyinnormaltissuesampleswere0%,0%and4.5%.EGFR,HER-2andTopoIIaexpressionwerenotcorrelatedwiththepatients1sex,age,tumorsize,butwiththelocationorthedegreeofdifferentiation,depthofinvasion,clinicalstage,lymphnodeanddistantmetastasisofthetumors.EGFR,HER-2andTopoIIaexpressionswerepositiveusion:EGFR,HER-2andTopoIIaexpressioningastriccanceriscloselyrelatedtotheincidenceincreasedthedevelopmentofgastriccancer,EGFR,HER-2andTopoIIciingastriccancer,thehighexpressionprovidatheoreticalbasisofmoleculartargettherapyforgastriccancer.Keywords：gastriccancer,EGFR,HER-2,TopoIIa,targetedtherapy.胃癌是消化系统最常见的恶性肿瘤，发病率居恶性肿瘤第4位⑴。手术治疗仍然是根治胃癌的最有效方法，然而仅有30%〜40%的胃癌患者可通过单纯的手术治疗而获得治愈,大部分患者死于肿瘤的再发或远处转移，内科治疗仍是胃癌主要的治疗方法，近年来，胃癌的分子靶向治疗研究取得实质性的进展,靶向治疗制剂的高效低毒特性越来越引起临床医师的重视，目前这种治疗策略主要包括表皮生长因子受体(EGFR)靶向治疗、血管内皮生长因子(VEGF)通道的靶向治疗、细胞周期抑制剂、细胞凋亡促进剂、基质金属蛋白酶抑制剂及多靶点治疗等。本研究应用免疫组化法检测并分析EGFR、HER-2、TopoIIa在胃腺癌组织和正常胃粘膜组织中的表达情况，探讨其做为分子靶点指导胃癌分子靶向治疗的临床意义。1材料与方法标本108例胃腺癌组织和22例正常胃组织均来自河南省人民医院2008年11月〜2009年12月间手术切除的新鲜标本，胃癌组织标本均经甲醛固定、石蜡包埋，并经HE染色组织学确诊。全部患者术前均未行放化疗。根楣2003年国际抗癌联盟(UICC)和美国肿瘤联合会(AJCC)联合制定的TNM分期标准进行临床分期。另取正常胃粘膜组织22例作对照，其中男12例，女10例，年龄44〜77岁。试剂与仪器一抗分别为EGFR(产品编号：MAB-0196)；HER-2(产品编号：MA为0198)；TopoIIa(产品编号:MAB-0588),试剂盒选用即用型MaxVision检测试剂盒，对

二甲氨基偶氮苯(DAB)显色剂，均购自福州迈新生物技术开发公司。仪器包括：石蜡切片机、显微镜、电热恒温干燥箱，镜下图像以OlympusDp70图像采集分析仪进行采集、分析。方法1.新鲜胃癌组织标本常规用10%中性甲醛固定，石蜡包埋，制成3-5pm切片;2.切片65℃电热恒温干燥箱过夜，脱蜡至水；3.EGFR经胃酶进行酶消化抗原修复,37℃水浴箱内孵育30min,HER-2、TopoIIa采用柠檬酸高温修复15min；4.PBS液冲洗3min；5.H202100ml+CH30H900ml液浸泡lOmin；6.PBS冲洗3次滴加一抗，4℃冰箱过夜;7.PBS冲洗2次，滴加即用型MaxVision检测试剂,室温下40min；8.PBS冲洗3次后DAB显色；9.苏木素复染；10.脱水封片，显微镜下观察。结果判断每批实验均设阳性和阴性对照，EGFR表达阳性可见细胞膜细胞浆有棕黄色颗粒样沉淀,阴性细胞膜细胞浆无棕黄色颗粒样沉淀。HER-2表达阳性可见细胞膜有棕黄色颗粒样沉淀，阴性细胞膜无棕黄色颗粒样沉淀。Top。IIa表达阳性可见细胞核有棕黄色颗粒样沉淀，阴性细胞核无棕黄色颗粒样沉淀。染色分级整张切片无阳性细胞(-),阳性细胞数<10%(+),阳性细胞数10%-50%(++),阳性细胞数250%(+++)。统计分析应用SPSS17.0统计软件包进行统计分析.计数资料采用2个(或多个)样本率比较的x2检验,积分相关性采用Spearman等级相关分析,P<0.05为差异有统计学意义。2结果2.1EGFR、HER-2、TopoIIa在胃癌中的表达。见图A-D,表1EGFR、HER-2、TopoIIa在胃腺癌中的表达分别为41.7%(45//108)>31.5%(34/108).53.7%(58/108)o在正常胃组织中的表达为0%、0%、4.5%(1/22)0A正常胃组织染色(SPX200)B胃癌组织EGRF染色阳性(SPX200)C胃癌组织HER-2染色阳性(SPX200)D胃癌组织TopoIIa染色阳性.(SPX200)表1EGFR、HER—2、TopolIQ表达与胃癌临床病理参数之间的关系(n)因素例数EGFRHer-2/neuTopoIIa阳性P值阳性P值阳性P值阳性总数45(41.67%)34(31.5%)58(53.7%)性别男7028(40%)x2=0.22720(28.6%)x2=0.44640(57.1%)x2=0.946女3817(44.7%)P=0.63314(36.8%)P=0.52818(47.4%)P=0.331年龄<505219(36.5%)x=1.08516(30.8%)x2=0.02426(50%)x2=0.5532505626(46.4%)P=0.29818(32.1%)P=0.87832(57.1%)P=0.457肿瘤大小<54016(40%)x2=0.07311(27.7%)x2=0.46719(47.5%)x2=0.983256829(42.6%)P=0.78823(33.8%)P=0.49439(57.4%)P=0.321肿瘤部位上部3810(26.3%)x=21.0447(18.4%)x2=16.31417(44.7%)x2=12.028中部307(23.3%)P=0.0005(17.2%)P=0.00011(3.%)P=0.002下部4028(70%)22(55%)30(75%)分化程度高分化275(18.5%)x2=10.9324(14.8%)x2=l1.9869(33.3%)x2=20.974中分化3413(38.2%)P=0.0047(20.6%)P=0.00212(353%)P=0.000低分化4727(57.4%)23(48.9%)37(78.7%)浸润深度未浸及浆284(14.3%)x2=11.662(7.1%)x2=10.3814(14.3%)x2=23.623膜层浸及浆膜8041(51.3%)层淋巴结转移无4111(26.8%)浸及浆膜8041(51.3%)层淋巴结转移无4111(26.8%)有6734(50.7%)无10038(38%)有87(87.5%)远处转移TNM分期1+115815(25.9%)x=5.986P=0.014x=7.467P=0.009x2=12.87532(40%)7(17.1%)27(40.3%)27(27%)7(87.5%)4(6.9%)P=0.001x2=6.361P=0.012x=12.569P=0.001x2=35.10454(67.5%)8(19.5%)50(74.6%)43(43%)7(87.5%)12(20.7%)P=0.000x2=31.076P-0.000x2=5.573P=0.023x2=54.920111+IV5030(60%)P=0.00030(60%)P=0.00046(92%)P=0.000、EGFR、HER-2、TopoIIa蛋白表达与胃癌临床病理特征间的关系。EGFR、HER-2、TopoIIa蛋白表达与患者性别、年龄、肿瘤大小、均无显著性相关,与肿瘤部位、分化程度、浸润深度、淋巴结转移、远处转移及临床分期相关,表loEGFR、HER-2、TopoIIa在胃癌组织中的相关性。EGFR、HER-2、TopoIIa在胃癌肿瘤组织中表达呈正相关.其中EGFR和HER-2的相关系数为0.317(P=0.001);EGFR和TopoIIa的相关系数为0.257(P=0.007);HER-2和TopoIIa的相关系数为0.270(P=0.005).3讨论EGFR属于酪氮酸激酶I型受体家族,EGFR高表达可促进血管生成及肿瘤细胞的增殖、粘附、侵袭和转移，抑制肿瘤细胞的凋亡⑵，其胞外区与配体结合后,促进其胞内区酪氨酸激酶磷酸化，通过RAS/RAF/MAPK等细胞信号传导途径将信号传向细胞核内，调节细胞生长、凋亡等生命活动5，EGFR基因突变或表达异常与多种恶性肿瘤的发生、发展密切相关。许多研究表明，胃癌中常有EGFR表达增多⑸。本研究显示EGFR在胃癌组织中阳性表达率为：41.7%,其表达随着肿瘤部位、侵袭深度加深、出现淋巴结转移及远处转移而明显增高，这说明EGFR参与了胃癌肿瘤细胞的增殖、侵袭和转移等生物学行为。因此抑制EGFR信号通路将可以抑制胃癌的增殖、侵袭和转移。单克隆抗体和小分子酪氨酸激酶抑制剂是目前临床应用比较广泛的分子靶向药物。单克隆抗体西妥昔单抗等能与EGFR胞外区结合，竞争性抑制EGFR与配体的结合，阻断其信号传导通路，从而抑制恶性肿瘤细胞生长；而小分子酪氨酸激酶抑制剂吉非替尼等与EGFR胞内区18~21外显子编码酪氨酸激酶区结合，通过抑制酪氨酸激酶活性发挥作用5,这两类作药物已应用于胃癌的治疗。Lordick⑼等研究表明西妥昔单抗加上FUFOX治疗晚期胃癌患者，其TTP达到7.6个月总生存期9.5个月，耐受性良好。HER-2与EGFR同属HER/erbB的成员，两者具有约50%的同源性,在结构和功能上均相似，主要参与细胞生长分化的调节，正常情况下HER-2处于非激活状态，当受到体内外某些因素作用后，其结构或表达调控失常从而被激活,具有肿瘤转化活性口叫研究结果显示,Her-2扩增和过度表达与许多有害的细胞特性有关，包括血管生成、细胞生成、细胞运动、生长促进以及细胞生存能力的增强皿。本研究显示HER-2在胃癌中的阳性表达率为31.5%且其表达随着肿瘤部位、侵袭深度加深、出现淋巴结转移及远处转移而明显增高。曲妥珠单抗是以HER-2为靶点的人源化单克隆抗体，Matsui'⑵、Fujimoto-Ouchi®和Kinr⑷等研究表明曲妥珠单抗无论在体外还是在体内都能够抑制HER-2过度表达人类胃癌细胞的生长，当曲妥珠单抗与化疗药物联合用药时可显示比单一曲妥珠单抗或是化学疗法更高的抗肿瘤效应。已有多项期小样本临床研究证实了曲妥珠单抗在晚期胃癌中的疗效，Hdhler等在治疗晚期胃癌的HI期临床研究中表明，在HER-2过度表达胃癌患者中应用曲妥珠单抗生存期可延长4.2个月(16.Ovsll.8)[15]oTopoIIa是真核细胞内重要的核酶，它对真核细胞中DNA的复制、转录、重组、修复有重要的作用。研究表明,在多种肿瘤中TopoHa的表达水平与预后有关。本研究结果显示，TopoIIa在胃癌和正常胃组织中的表达有明显的差异(P〈0.05),并且TopoIIa在高、中分化的胃癌中的表达明显低于在低分化胃癌中的表达(P<0.05)oTopoIIa是许多抗癌药如柔红霉素、阿霉素、VP-16等的重要靶点，TopoIIa表达降低使肿瘤细胞对多种抗癌药产生耐药，TopoIIa含量的高低,可以作为判定各种肿瘤对抗癌药物的敏感性或抗药性的指标。我们认为联合检测EGFR、HER-2、Topo11a在胃癌中的表达可作为判断胃癌预后、筛选高危转移患者、判定对抗癌药物的敏感性或抗药性，同时作为分子靶点指导胃癌靶向治疗，为胃癌患者提供另外一个有效的、综合的、个体化的治疗途径。4参考文献JemalA,SiegelR,WardE,etal.Cancerstatistics[J].CACancerJClin2006,56(1):106-130.TamasP,SoltiZ,bauerP,etal.MechanismofepidermalgrowthfactorregulationofVav2.aguaninenucleotideexchangefactorforRao,JBiolChem,2003,14;278(7):5163-5171.[3]ShigematsuH,GazdarAF:Somaticmutationsofepidermalgrowthfactorreceptorsignalingpathwayinlungcancers[J].IntJCancer,2006,118(2):257-262.YamamotoH,ToyookaS,MitsudomiT.ImpactofEGFRmutationanalysisinnon-smallcelllungcancer[J].LungCancer,2009,63(3):315-321.[5]王国栋，李侠，王连聪，等.胃癌组织EGFR和VEGF的表达及其意义[J].实用肿瘤杂志，2009,24(1):34-39.[6]LuijeGLenzHJ,EGFRsignalinganddrugdiscovery|J].Oncology,2009,77(6):400-410.[7]RayM,SalgiaR,VokesEE.TheroleofEGFRinhibitioninthetreatmentofnon-smallcelllungcancer[J].Oncologist,2009,14(11):1116-1130.[8]OkamotoI.Epidermalgrowthfactorreceptorinrelationtotumordevelopment:EGFRtargetedanticancertherapy[J].FEBSJ,2010,277(2):309-315.[9]LordickF,LuberB,LorenzenS,Hegewisch-BeckerS,FolprechtG,WollE,DeckerT,EndlicherE,RothlingN,SchusterT,KellerG,FendF,PeschelC.Cetuximabplusoxaliplatin/leucovorin/5-fluorouracilinfirst-linemetastaticgastriccancer:aphaseIIstudyoftheArbeitsgemeinschaftInternistischeOnkologie(AIO)BrJCancer.2010Feb2;102(3):500-505.[10]SiricaAE.RoleofErbBfamilyreceptortyrosinekinasesinintrahepaticcholang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