微柱凝胶免疫检测卡长春博迅

微柱凝胶免疫检测卡长春博迅第1页/共61页微柱凝胶免疫检测技术MicrocolumnGelImmunoassay第2页/共61页

长春博迅生物技术有限责任公司是一家中外合资高新技术企业。公司自主研发了微柱凝胶免疫检测技术，替代了在血型检测、抗体筛查以及交叉配血过程中应用多年的试管、玻片血凝检测方法，使Coomb’s试验作为临床常规检测项目成为可能，同时解决了混合血液标本检测标准等问题，使我国红细胞血型检测技术跨入国际先进行列。在国际上，博迅生物率先研发出微柱凝胶血小板血型抗原抗体检测技术，使血小板血型抗原抗体的临床常规检测成为可能，并使其同红细胞的检测一样简捷、方便。我公司通过了GMP认证。获得了SFDA颁发的两项新药证书。公司拥有雄厚的技术力量，竭诚为客户提供及时、周到的售后服务和技术支持。博迅公司致力于新产品的开发，在市场竞争中塑造崛起的民族品牌。公司简介第3页/共61页

长春博迅公司主要产品如下：1、ABO、RhD血型定型试剂卡（ABO、RhD血型定型试剂卡，ABO、RhD抗原检测卡，新生儿溶血病检测卡Ⅰ）2、血型不完全抗体检测卡（抗人球蛋白试验交叉配血卡，不规则抗体筛检卡，新生儿溶血病检测卡Ⅱ，HDN母体IgG抗体效价检测卡，血小板抗体筛检卡，血小板交叉配血卡）

用于血型血清学检测。产品介绍第4页/共61页

反应原理

微柱凝胶免疫反应的本质是红细胞凝集试验，也可称之微柱凝胶血凝试验（MicrocolumnGelHeamagglutinationAssay，MGHA）在微柱凝胶管中，红细胞和相应抗体结合后，形成红细胞凝集团块。在一定离心力下，该凝集团块位于胶表面或胶中；而红细胞未和相应抗体结合，仍为分散的红细胞，在同样的离心力下，红细胞沉降到微柱管尖底部。第5页/共61页

特点和优点

简单：不需洗涤，对阴性结果不需确证试验，适用于大量标本检测，解决了Coombs试验因为程序复杂费时等原因未能在临床常规应用问题。使不完全抗体检测理论“金标准”成为临床的“金标准”。多份标本一次离心出结果，有利于临床大量标本检测。另外还具备准确、敏感、标本用量少、结果保存时间长、易于标准化、操作更安全等优点。第6页/共61页ABO、RhD血型定型试剂卡

1、ABO、RhD血型定型试剂卡（正反定型）——用于血型定型

操作简单，结果清晰、准确，尤其对弱抗原和亚型的检测有传统的方法无法比拟的敏感性，成为临床血型检测的常规方法。第7页/共61页2、ABO、RhD血型定型试剂卡(ABD)——用于血型抗原检测一卡两人份，可作为血型复查的常规检测卡。3、ABO、RhD血型定型试剂卡（Rh）——用于Rh血型抗原检测对Rh系统抗原进行检测，微管中含有抗D、抗C、抗c、抗E、抗e单克隆抗体。第8页/共61页新生儿溶血病检测卡系列

新生儿溶血病（HDN）是发生在胎儿和新生儿的一种免疫溶血性疾病。该病由母婴血型不合引起，轻者出现贫血、水肿、肝脾肿大，严重者造成新生儿死亡或发生核黄疸且产生后遗症。准确的产前和产后诊断可为HDN的预防及治疗提供依据，并指导临床采取相应措施，预防HDN的发生，对优生优育、提高人口素质具有重要的意义。1、血型不完全抗体检测卡——用于孕期母体IgG抗体效价检测

对孕妇体内IgG类不完全抗体效价做定期检测，根据结果初步判断胎儿是否有患新生儿溶血病的可能。第9页/共61页2、ABO、RhD血型定型试剂卡（新生儿溶血病检测卡Ⅰ）

用于确定新生儿ABO、RhD抗原及新生儿红细胞是否在母体内被不完全抗体致敏。其灵敏度是常规血凝试验法的十倍，且标本用量少，解决了新生儿采血不易的问题。其中检测管含有－AB抗体，对于新生儿血型的鉴定更安全准确，避免了漏检情况的发生。3、血型不完全抗体检测卡（新生儿溶血病检测卡Ⅱ）

用于游离放散试验，检测新生儿体内游离抗体和放散抗体。第10页/共61页1、抗人球蛋白交叉配血——用于交叉配血

可同时检出IgM和IgG类抗体，另有加入抗C3d的品种，使临床输血更安全，杜绝输血反应的发生。2、不规则抗体筛检——用于不规则抗体筛检

配套使用的筛检细胞包含多个血型系统的抗原，可以检出更多的临床有意义抗体，尤其对配血不合的原因查找有重要意义，也为受检者体内不规则抗体的进一步鉴定提供了检测范围。血型不完全抗体检测卡第11页/共61页血小板抗原抗体反应试剂盒

用于临床常规的血小板配型试验和血小板抗体筛检。指示细胞上包被着鼠抗人血小板单克隆抗体，其Fab段可与血小板抗原结合，Fc段结合在人红细胞膜上。如果受检者血清中存在血小板抗体，该血小板抗体Fab段与血小板抗原结合。相邻的血小板抗体Fc段通过抗人球蛋白Fab段桥联成肉眼可见的免疫复合物。即以抗人球蛋白为桥，连接血小板抗体、血小板和指示细胞，形成免疫复合物（指示细胞—血小板—血小板抗体—抗人球蛋白—血小板抗体—血小板—指示细胞），形成凝集网络。该复合物在一定离心力下，浮于胶表面或位于胶中。如果受检者血清中无抗血小板抗体，则不能形成肉眼可见的免疫复合物，指示细胞沉于微柱凝胶管尖底部。第12页/共61页组成：

1、指示细胞1ml×42、血小板抗体阴性血清对照1.2ml×13、血小板抗体阳性血清对照1.2ml×14、红细胞稀释液4ml×15、微柱凝胶卡6孔/卡×126、红细胞保存液10ml×17、血小板广谱裂解抗原4ml×1

此检测方法简化了多次洗涤的繁琐操作，大大缩短了试验时间，可为血小板输注无效症在血液血清学范围内提供科学的解释。第13页/共61页1、血型不完全抗体检测卡——用于血小板交叉配血试验

经过配型，输注与患者相合或基本相合的血小板，才能达到安全有效的输注血小板疗效。2、血型不完全抗体检测卡——用于血小板抗体检测

用于血小板免疫性疾病相关的同种抗体、自身抗体，药物依赖性抗体的筛检。第14页/共61页

配套试剂反定型试剂：采用新鲜血制备，抗原性稳定、完整，保存期三个月以上，不同浓度、规格可供选择第15页/共61页筛检细胞：采用新鲜血制备，抗原性稳定、完整，保存期三个月以上，不同浓度、规格可供选择红细胞稀释液：稀释红细胞，排除纤维蛋白干扰红细胞保存液：可使红细胞保存三个月第16页/共61页巯基乙醇（2-Me）：新生儿溶血病检测配套试剂牛血清白蛋白：新生儿溶血病检测配套试剂二硫苏糖醇(DTT)：用于灭活IgM类抗体第17页/共61页血小板广谱裂解抗原：多人份血小板制备，抗原谱广泛，可长期存放，方便使用，抗原性稳定指示细胞：冻干品，可长期保存稀释液：血小板配套试剂PH7.2PBS：用于洗涤血小板

第18页/共61页产品操作一、准备工作：试剂卡的准备：1、在18-25℃条件下平衡30分钟。2、离心2-3分钟，均衡反应介质。3、外观检查应无气泡、干胶和杂质。4、要缓慢撕膜。防止膜面上的液滴凝结（因冷热交替产生的）污染邻孔。第19页/共61页

检测标本的准备：1、标本要求新鲜血（如陈旧血需设阴性对照）。2、抗凝血样标本要上清澄清。如有纤毛状、浑浊、乳糜、溶血、脂肪等状，应再次洗涤离心。为防止纤维蛋白影响红细胞沉降，建议使用红细胞稀释液。3、血辫血样须放置试管中离心处理，确保血清澄清微黄。必要时需洗涤。4、在18-25℃条件下平衡30分钟，防止冷凝集。红细胞悬液的制备：1、将红细胞配制为0.5-0.8%的悬液，最高浓度不要超过1%。如，取8微升压积红细胞，加入到1毫升的红细胞稀释液中，配制出的即是0.8%的红细胞悬液。2、外观检查呈均匀淡红色，无血块、无絮状物（如有纤维蛋白需去除）。第20页/共61页

二、结果判定：阳性结果：红细胞抗原与相应抗体在微柱凝胶中形成的特异性抗原抗体复合物浮在凝胶表面或胶中，为阳性反应。阴性结果：红细胞抗原无相应的抗体结合，不出现特异性抗原抗体复合物，红细胞沉于微柱凝胶的尖底部，为阴性反应。反应强度：特异性红细胞抗原抗体复合物位于胶表面，为强阳性反应；复合物在胶中，为弱阳性反映；愈靠近胶底部颗粒愈小，反应愈弱。第21页/共61页4+红细胞复合物（凝集）位于凝胶表面3+大部分红细胞复合物位于凝胶表面，少部分位于凝胶中部2+大部分红细胞复合物位于凝胶中部，少部分位于凝胶中上部1+红细胞复合物位于凝胶中下部±

与同一卡中阴性管结果对照，如与阴性结果有差别，即为±—

红细胞完全沉积在凝胶管尖底部完全溶血凝胶和液体无凝集或未凝集的红细胞，液体出现透明清澈红色不完全溶血残留红细胞在胶表面、胶中或胶底部，液体出现透明清澈红色混合凝集红细胞复合物位于凝胶表面和凝胶底部反应强度现象及说明４＋

３＋２＋＋±－ＨＨＭ

完全不完全混合凝集第22页/共61页三、标准操作规程：

1、ABO、RhD血型定型试剂卡（单克隆抗体）操作步骤：1）将准备好的试剂卡做好标记；2）将待检者0.5-0.8%红细胞悬液分别加入1-4管中，各50µl；待检者0.5-0.8%红细胞悬液50µl50µl50µl50µl第23页/共61页3）将待检者血清分别加入5-6管中，各50µl；4）取0.5-0.8%的ABO血型反定型红细胞试剂悬液，分别加入5-6管中，各50µl；50µl50µl50µl50µl待检者血清A细胞B细胞第24页/共61页5）离心5分钟（900rpm2分钟，1500rpm3分钟）；6）肉眼观察结果。结果：A型RhD阳性第25页/共61页2、ABO、RhD血型定型试剂卡（单克隆抗体）—红细胞抗原检测

操作步骤：1）将准备好的试剂卡做好标记；2）将待检者0.5-0.8%红细胞悬液分别加入第1—3或4—6管中，各50µl；

待检者1的0.5-0.8%红细胞悬液50µl50µl50µl待检者2的0.5-0.8%红细胞悬液50µl50µl50µl第26页/共61页3）离心5分钟（900rpm2分钟，1500rpm3分钟）；4）肉眼观察结果。结果：1.A型RhD阳性；2.B型RhD阳性第27页/共61页3、ABO、RhD血型定型试剂卡（单克隆抗体）——Rh血型抗原检测

操作步骤：1）将准备好的试剂卡做好标记；2）将待检者0.5-0.8%红细胞悬液分别加入1—6管中，各50µl；待检者0.5-0.8%红细胞悬液50µl50µl50µl50µl50µl50µl第28页/共61页3）离心5分钟（900rpm2分钟，1500rpm3分钟）；4）肉眼观察结果。结果：RhD、C、e阳性第29页/共61页

4、血型不完全抗体检测卡—交叉配血试验操作步骤：1）将准备好的检测卡做好标记；

2）将供血者0.5-0.8%红细胞悬液与受血者血清各50µl先后加入主侧管中；

受血者1血清50µl受血者2血清50µl受血者3血清50µl供血者1红细胞50µl供血者2红细胞50µl供血者3红细胞50µl第30页/共61页3）将受血者0.5-0.8%红细胞悬液与供血者血清各50µl先后加入次侧管中；4）37℃孵育15分钟；供血者1血清50µl供血者2血清50µl供血者3血清50µl受血者1红细胞50µl受血者2红细胞50µl受血者3红细胞50µl第31页/共61页5）离心5分钟（900rpm2分钟，1500rpm3分钟）；6）肉眼观察结果。结果：1、3不配合；2配合第32页/共61页

5、血型不完全抗体检测卡—不规则抗体筛检

操作步骤：1）将准备好的检测卡做好标记；

2）将0.5-0.8%Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ筛检红细胞各50µl分别加入对应的微管中;

50µl50µl50µlⅠⅡⅢ50µl50µl50µlⅠⅡⅢ0.5-0.8%Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ筛检红细胞第33页/共61页3）将待检者血清各50µl分别加入Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ微管中；4）37℃孵育15分钟；待检者1血清50µl50µl50µl待检者2血清50µl50µl50µl第34页/共61页5）离心5分钟（900rpm2分钟，1500rpm3分钟）；6）肉眼观察结果。根据所提供的筛检红细胞或谱红细胞的反应格局来判定结果：待检者1血清中可能含有抗-E待检者2血清中可能含有抗-c编号Rh-hrKiddMNSDuffyDiegoKellLewisPDCEceJkaJkbMNSsFyaFybDiaKkLeaLebP1Ⅰ＋＋－－＋－＋＋＋－＋＋－－－＋＋＋－Ⅱ＋＋＋＋＋－＋＋＋－＋＋－＋－＋＋＋＋Ⅲ＋＋－＋＋＋＋＋－－＋＋＋－－＋－＋－第35页/共61页

6、血型不完全抗体检测卡—抗人球蛋白试验

操作步骤：1）将准备好的检测卡做好标记；

2）将0.5-0.8%待检者和阴性对照（健康男性O型）红细胞悬液各50µl分别加入微管中；

50µl阴性对照50µl50µl50µl50µl50µl0.5-0.8%待检者红细胞悬液12345第36页/共61页3）离心5分钟（900rpm2分钟，1500rpm3分钟）；4）肉眼观察结果。结果：1、2、3和5阳性；4阴性第37页/共61页7、ＡＢＯ、ＲhＤ血型定型试剂卡（单克隆抗体）—新生儿溶血病检测卡Ⅰ

操作步骤：1）将准备好的试剂卡做好标记；2）将0.5％-0.8％待检者红细胞悬液分别加入１—６管中,各50µl；

待检者0.5-0.8%红细胞悬液50µl50µl50µl50µl50µl50µl第38页/共61页3）离心5分钟（900rpm2分钟，1500rpm3分钟）；4）肉眼观察结果。结果：AB型RhD阳性，直抗试验阳性第39页/共61页8、血型不完全抗体检测卡—新生儿溶血病检测卡Ⅱ

准备工作：热放散：取同体积的压积血（至少洗涤三次）和６％牛血清白蛋白混匀，置于56℃孵育10分钟，期间不断摇动，然后离心２－３分钟（1000rpm），取上清。即放散液。酸放散：取一定量的红细胞用生理盐水洗涤至少6次,与等体积的酸放散液(取4体积的A液与1体积的B液均匀混合)均匀混合,室温孵育1-2分钟,3000rpm离心1分钟,尽量取尽上清,加入中和液(500µl上清加入60-80µl的中和液),在3000rpm离心2分钟,取上清,即放散液.操作步骤：1）将准备好的检测卡做好标记；第40页/共61页2）将１－３管分别加入50µl新生儿血清，4—6管分别加入50µl新生儿红细胞放散液；3）将0.5％-0.8％A型红细胞悬液各50µl分别加入1号、4号管中；将0.5％-0.8％B型红细胞悬液各50µl分别加入2号、5号；将0.5-0.8％的O型红细胞悬液各50µl分别加入3号、6号孔中；

新生儿血清50µl50µl50µl50µl50µl50µl新生儿红细胞放散液50µl50µl50µl50µl50µl50µl0.5-0.8%红细胞悬液ABO第41页/共61页4）37℃孵育15分钟；5）离心5分钟（900rpm2分钟，1500rpm3分钟）；6）肉眼观察结果。结果：游离抗体阳性、放散试验阳性第42页/共61页9、血型不完全抗体检测卡—母体IgG抗体效价检测操作步骤：1）在试管中分别加入200µl母体血清和200µlDTT（或2-Me）应用液，然后置于37℃水浴30-60分钟。以充分破坏血清中IgM类抗体；200µl母体血清200µlDTT（或2-Me）应用液37℃水浴30-60分钟第43页/共61页2）取6只干净试管，分别做好标记。将处理后的血清做倍比稀释；

3264128256512161.4ml

200µl

200µl

200µl

200µl

200µl

标记并加入稀释液326412825651216处理后的血清200µl

200µl

200µl

200µl

200µl

200µl

第44页/共61页3）将准备好的母体IgG抗体效价检测卡做好标记，依次将50µl倍比稀释血清分别加入标记卡中；

16326412825651250µl

50µl

50µl

50µl

50µl

50µl

第45页/共61页4）在所有孔中分别加入50µl父亲（或父亲同型）的0.5-0.8%红细胞悬液（ABO血型系统IgG血型抗体）或在所有孔中分别加入50µl标准O型0.5-0.8%红细胞悬液（测定孕妇ABO血型系统以外IgG血型抗体）；

5）37℃孵育15分钟；0.5-0.8%红细胞悬液50µl50µl50µl50µl50µl50µl第46页/共61页6）离心5分钟（900rpm2分钟，1500rpm3分钟）；7）肉眼观察结果。结果：效价为

1：128第47页/共61页

临床遇到的一些问题及原因的分析第48页/共61页

1.问题：正反定型卡反定型侧出现弱阳性结果原因及分析：可能是一些特殊标本（如血液病、肿瘤病人和老年人等）抗体比较弱，有些大医院做过统计（当地10%左右的人群存在此情况），不同地区比例可能不同。第49页/共61页

2.问题：血型卡正定型结果阳性弱原因及分析：可能是一些特殊疾病引起抗原减弱。第50页/共61页3.问题：交叉配血阴性结果不好（假阳性，有1+或2+结果）原因及分析：a.标本本身的问题（放置时间长；标本本身存在致敏现象；标本被污染）。b.低于实验要求温度或没有孵育，特别是在冬天很容易出现此问题。第51页/共61页4.问题：正反定型不符原因及分析：a.一些特殊疾病引起。b.新生儿抗体弱或无抗体。c.抗原弱或亚型引起。第52页/共61页5.问题：血型卡或抗人球卡出现类似混合凝集现象原因及分析：a.不同血型相容性输血、骨髓移植和器官移植等。b.标本存放时间过长，存在一些细胞碎片、细胞团块或纤维蛋白（在胶上部形成红线或红色圆环）。第53页/共61页6.问题：卡式法检测HDN母体IgG抗体效价的临界值卡式法灵敏度更高，比试管法高1-2个滴度。第54页/共61页

注意事项运输造成的检测卡凝胶有断裂，气泡，干胶时，都会阻碍红细胞的通过，该卡不能使用。必须使用博研专用离心机，必要时请厂家对离心机进行校正，以确保结果的准确。严禁使用非抗凝血标本配制的红细胞悬液，以避免出现假阳性结果。被测定的血清中，蛋白含量异常时会出现假阳性结果，细胞凝聚团会被误认为是阳性凝集。不准确的加样（如加入高浓度的细胞或不足加样量的血清等）均可干扰结果。实验温度过低时，因凝胶颗粒活动性减少单个红细胞穿过时困难，易出现假阳性结果。由于抗原有效期问题，与新鲜红细胞相比，存放久的红细胞抗原反应会相应的减弱；破碎的红细胞膜浮于胶中或胶面。第55页/共61页

血浆或血清中含有颗粒状的物质可能会阻碍红细胞通过凝胶颗粒间隙，应对这样的标本进行离心处理分离。加样红细胞亦不应含有颗粒状物质，此种物质同样会阻碍红细胞通过凝胶颗粒间隙，建议使用红细胞稀释液。禁用严重溶血的标本，它会对结果的判读产生强烈的干扰。多种药物（包括大剂量的抗菌素）的使用或在某种疾病的状态下，与直抗试验的阳性结果有关。禁止使用被污染的标本和材料。不同抗原性红细胞的混合标本、多凝集红细胞（如T/Tn）或亚型红细胞（如A3）等可能出现混合反应。被酶过度处理的红细胞将会产生非特异性凝集。第56页/共61页交叉配血实验注意事项1、应用直接抗人球蛋白微柱凝胶免疫试验检测病人红细胞时，一定要用适量EDTA的试管采血液标本，该标本不能放入4℃-10℃冰箱保存