动物细胞融合与单克隆抗体

动物细胞融合与单克隆抗体第1页，共27页，2023年，2月20日，星期三(1)(1)(2)(3)(4)(5)回顾：植物体细胞杂交过程示意图第2页，共27页，2023年，2月20日，星期三A细胞B细胞人工诱导杂交细胞动物细胞融合（也称细胞杂交）：是指两个或多个细胞融合形成一个单核细胞的过程。一、动物细胞融合概念第3页，共27页，2023年，2月20日，星期三细胞膜的流动性灭活的病毒、PEG、电激等融合后的细胞进行有丝分裂，形成完整的杂交细胞2、诱导的手段？3、融合后细胞的类型？4、AB杂种细胞遗传物质有什么特点？三种AA、AB、BB含两种生物的遗传物质动物细胞融合过程1、原理？第4页，共27页，2023年，2月20日，星期三动物细胞融合技术的意义和应用第5页，共27页，2023年，2月20日，星期三比较项目细胞融合的原理细胞融合的方法诱导手段用途植物体细胞杂交细胞膜的流动性细胞的全能性纤维素酶、果胶酶去除细胞壁后诱导原生质体融合离心、电刺激、振动、聚乙二醇克服远源杂交不亲和，获得杂种植株动物细胞融合细胞膜的流动性用胰蛋白酶使细胞分散后诱导细胞融合除应用植物细胞杂交手段外，还有灭活病毒获得杂种细胞、制备单克隆抗体比较动、植物细胞杂交技术第6页，共27页，2023年，2月20日，星期三【例1】能使动物细胞融合的特有的诱导因子是（）A.离心B.灭活的病毒C.电刺激D.振动【例2】融合后的杂交细胞的遗传物质有何特点（）具有原来两个或多个细胞的遗传信息B.能无限增殖C.可形成新个体D.培养过程会贴壁【例3】动物细胞融合的作用中最重要的是（）A.克服远源杂交不亲和B.制备单克隆抗体C.培育新物种D.生产杂种细胞

BB初试牛刀A第7页，共27页，2023年，2月20日，星期三抗体：能够与抗原发生特异性结合的免疫球蛋白。能产生抗体的细胞是浆细胞（即效应B细胞）。温故知新二、单克隆抗体强调：效应B淋巴细胞是能够产生抗体的B淋巴细胞，下文将其简称为B淋巴细胞第8页，共27页，2023年，2月20日，星期三抗体的传统生产方法抗原反复注射动物从动物的血清中分离抗体该法制备抗体的缺点：产量低、纯度低，且抗体的特异性差、灵敏度低。如何解决这个问题呢？单克隆抗体！第9页，共27页，2023年，2月20日，星期三读下面一段资料，找出单克隆抗体的概念

人们发现，在动物发生免疫反应的过程中，体内的B细胞可以产生多达百万种以上的特异性抗体，但是每个B细胞只分泌一种化学性质单一、特异性强的抗体。要想获得大量的单一抗体，必须用单个B细胞进行无性繁殖，即克隆。单克隆抗体的概念单克隆抗体：单个B细胞克隆产生的单一、特异性强的抗体问题：如何大量生产单克隆抗体？请尝试设计一个方案。第10页，共27页，2023年，2月20日，星期三一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体骨髓瘤细胞能无限增殖杂交瘤细胞动物细胞培养技术设计方案：动物细胞融合技术单克隆抗体既能产生特异性抗体，又能大量增殖的细胞1975年英国科学家米尔斯坦和柯勒的实验第11页，共27页，2023年，2月20日，星期三BB

、B瘤、瘤瘤

（一选）选择性培养基：只有杂交瘤细胞才能存活获得产生相应抗体的B细胞（二选）：选能产生所需专一抗体的杂交瘤细胞√体外培养小鼠腹腔内培养杂交瘤细胞特点：既能产生特异性抗体，又能大量增殖。第12页，共27页，2023年，2月20日，星期三杂交细胞灭活的病毒等手段培养骨髓瘤细胞B淋巴细胞经免疫的小鼠杂交瘤细胞第一次筛选用特定的选择性培养基第二次筛选能产生特定抗体、培养条件下能无限增殖的杂交瘤细胞体外培养注射到小鼠腹腔提取单克隆抗体第13页，共27页，2023年，2月20日，星期三单克隆抗体的应用：1、诊断试剂——最广泛应用准确、高效、简易、快速单克隆抗体最主要的优点：

特异性强，灵敏度高，并能大量制备。第14页，共27页，2023年，2月20日，星期三“生物导弹”＝单克隆抗体＋药物单抗导向，药物为弹头2、治疗疾病和运载药物主要用于治疗癌症治疗，单克隆抗体作为载体，运载抗癌药物，形成“生物导弹”，准确杀伤癌变细胞。第15页，共27页，2023年，2月20日，星期三两个过程动物细胞培养过程单克隆抗体制备过程三个“一”一个诱导细胞融合的新方法－－灭活病毒一个新细胞－－杂交瘤细胞一个优势－－单克隆抗体特异性强、灵敏度高的优势本节小结重点第16页，共27页，2023年，2月20日，星期三【例4】科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，得到杂交细胞，经培养可产生大量的单克隆抗体，与骨髓瘤细胞融合的是（）A.经过免疫的B淋巴细胞C.经过免疫的T淋巴细胞B.不经过免疫的T淋巴细胞D.不经过免疫的B淋巴细胞【例5】单克隆抗体是由下列哪种细胞产生的（）B淋巴细胞B．T淋巴细胞C．骨髓瘤细胞D．杂交瘤细胞A初试牛刀D第17页，共27页，2023年，2月20日，星期三【例6】用动物细胞工程技术获取单克隆抗体，下列实验步骤中错误的是（）A．将抗原注入小鼠体内，获得能产生抗体的B淋巴细胞B．用纤维素酶处理B淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞C．用聚乙二醇作诱导剂，促使能产生抗体的B淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合D．筛选杂交细胞，并从中选出能产生所需抗体的细胞群，培养后提取单克隆抗体B初试牛刀×第18页，共27页，2023年，2月20日，星期三谢谢第19页，共27页，2023年，2月20日，星期三

2002年12月30日，

两场筹备了10年的“太空婚礼”首次在神舟四号飞船上举行，植物细胞“新人”—黄花烟草和革新一号烟草叶肉细胞原生质体，动物细胞“新人”是小鼠B淋巴细胞和骨髓瘤细胞，两批新人同时在“产房”—电融合仪内孕育新生命。“太空婚礼”这两场“太空婚礼”实质是哪两项细胞工程技术？植物体细胞杂交技术动物细胞融合技术第20页，共27页，2023年，2月20日，星期三阅读课本P52及识图2-23第21页，共27页，2023年，2月20日，星期三(1)若A细胞是小鼠骨髓瘤细胞，则B细胞是取自小鼠体内的

细胞，从小鼠体内提取分离该细胞之前，应给小鼠注射_____________类物质。（2）d过程是一个_____________过程，该过程的进行常用_____________或_____________的诱导。(3)假设仅考虑某两个细胞的融合，则可形成

种类型的C细胞，因此需用__________培养基筛选出D细胞用于培养，D细胞的名称是

，其特点是_________________________________________。效应B

抗原

细胞融合

聚乙二醇灭活的病毒

选择性3既能无限增殖又能产生特异性抗体

杂交瘤细胞第22页，共27页，2023年，2月20日，星期三(4)在培养时通过________分裂方式大量繁殖。D细胞体外培养需要注意的条件是（要求答5项）__________________________________。（5）单克隆抗体在疾病的诊断、治疗和预防方面，与常规抗体相比，其特点是_________________。特异性强、灵敏度高

有丝无菌、无毒的环境；充足的营养；适宜的温度和pH；适宜的气体环境

第23页，共27页，2023年，2月20日，星期三15、（1）单克隆抗体是指

。（2）制备单克隆抗体的步骤：①将__________注入小鼠体内，从小鼠脾脏中获得淋巴细胞，其中至少1个淋巴细胞带有抗该抗原的抗体。②将步骤①获得的B淋巴细胞与步骤②培养的骨髓瘤细胞在_________________的诱导下融合。③将诱导后产生的多种细胞，放在_______培养基的多孔培养板上培养，筛选。④这样获得的杂交瘤细胞既具有B淋巴细胞_____________的能力，又具有________________的本领。⑤检测和分离带有抗X抗体的阳性细胞，培养板中每孔放一个细胞进行培养。⑥将阳性细胞进行增殖，从而制备出大量抗该抗原的单克隆抗体。化学性质单一，特异性强的抗体

抗原

聚乙二醇选择性

无限增殖

产生专一抗体第24页，共27页，2023年，2月20日，星期三（3）大量制备单克隆抗体的方法主要有两种：①体外培养法，可获得10μg/mL的抗体；②动物体内诱生法可获得5~20mg/mL的抗体。你选择的方法及原因是

。（4）用本法制备出的单克隆抗体仍具有局限性，因为它是用小鼠的_______细胞制备的，其化学本质是___________，应用于人体，会作为

产生

，解决这个问题的方法是_____________________________。大量生产选①，小规模生产选②效应B蛋白质异物免疫反应采用人的效应B细胞制备第25页，共27页，2023年，2月20日，星期三15、右图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤风杆菌抗体的实验方案。据图回答：

（1）该方案能达到预期效果吗？

。原因是

______________________________________________。

（2）图中②为

过程，常用

作为诱导剂。该细胞继承了__________________