动物细胞培养课件

皮肤烧伤，如果创面很小（不大于硬币）只要保持清洁，甚至深度烧伤，也可能自愈。如果下层真皮受损面积较大，常常需要植皮。植皮需要的健康皮片。植皮需要的健康皮片，可以取自烧伤病人自身未烧伤的部位（自体植皮），也可取自其他活人或尸体（异体植皮）等。自体植皮是永久性的，取自其他人或动物的植皮是暂时性的，是在创面愈合过程中为保护创面而采取的措施，10～14天后就要被身体排斥。

如果一个大面积烧伤的病人来说，自体皮肤有限，其他渠道的皮肤来源不足。如何才能获得大量的自体健康皮肤？动物细胞工程离体植物器官、组织或细胞植物细胞工程常用的技术:植物组织培养、植物细胞培养、植物体细胞杂交温故而知新悬浮细胞植物体愈伤组织胚状体脱（去）分化再分化（芽、根）细胞群体细胞次生代谢产物动物细胞工程常用技术动物细胞培养动物组织培养细胞核移植体细胞克隆动物细胞融合单克隆抗体

动物细胞培养技术是其他动物细胞工程技术的基础。一、动物细胞与组织培养1、概念：

是指在体外模拟动物体内环境，将动物的细胞或组织在无菌、温度适宜和营养充足的条件下培养，使其继续生长、增殖并维持原有的结构和功能的技术。目的是获得细胞或细胞代谢产物。

2、选料：

动物胚胎或幼龄动物的组织、器官，因为这些细胞生命力旺盛，分裂能力强。动物细胞培养过程：动物胚胎或幼龄动物的组织、器官细胞悬浮液10代细胞50代细胞无限传代单个细胞加培养液剪碎胰蛋白酶胰蛋白酶或胶原蛋白酶细胞株：原代培养的细胞一般传至10代左右，细胞生长停滞，大部分细胞衰老死亡，少数细胞存活到40~50代，这种传代细胞为细胞株。

细胞系：细胞株传代至50代后又出现细胞生长停滞状态只有部分细胞由于遗传物质的改变，使其在培养条件下可以无限制传代，这种传代细胞为细胞系。细胞株和细胞系的区别：细胞系的遗传物质改变，具有癌细胞的特点，失去接触抑制，容易传代培养。贴壁生长：动物细胞在液体培养基中生长一段时间之后，大部分细胞会贴附在培养瓶的表面生长。

接触抑制:细胞在培养瓶中贴壁生长，随着细胞越来越多，当贴壁生长的细胞分裂生长到表面相互接触时，就停止分裂增殖，这种现象叫做接触抑制。动物细胞培养过程：动物胚胎或幼龄动物的组织、器官细胞悬浮液胰蛋白酶或胶原蛋白酶10代细胞原代培养50代细胞细胞株无限传代细胞系传代培养单个细胞加培养液遗传物质未改变遗传物质改变剪碎胰蛋白酶问题：1.为何要定期用胰蛋白酶使细胞从瓶壁上脱离下来？2.比较动物细胞培养和植物组织培养所用的培养基的成分.3.动物细胞培养是否能像植物细胞一样最终培养成新个体？》获得细胞细胞的全能性细胞株、细胞系植物体培养结果或细胞分泌蛋白快速繁殖、培育无病毒植株等培养目的葡萄糖、动物血清蔗糖、植物激素培养基特有成分液体培养基固体培养基培养基性质细胞增殖原理动物细胞培养植物组织培养比较项目2、植物组织培养和动物细胞培养的比较6、动物细胞培养技术的应用1、获得细胞产物，如蛋白质生物制品－病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体等2、器官移植的培养3、获得细胞用于检测有毒物质5、在动物细胞培养的有关叙述中，正确的是（）

A．动物细胞培养的目的就是为了获得大量的细胞分泌蛋白

B．动物细胞培养前要用胰蛋白酶处理使细胞分散

C．细胞遗传物质的改变发生于原代培养过程中

D．培养至50代后继续传代的细胞是细胞株6、在动物细胞培养中有部分细胞可能在培养条件下无限制地传代下去，这种传代细胞称之为（）

A．原代培养B．传代培养

C．细胞株D．细胞系BD7、下列与动物细胞培养有关的表述中，不正确的是（）A．培养液通常含有葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清B．原代培养的细胞一般传至10代左右便会出现生长停滞C．动物细胞培养一般能够传到40～50代，但其遗传物质发生了改变D．动物细胞培养可用于检测有毒物质和获得大量自身健康细胞C8、下图是动物细胞培养的基本过程示意图。请据此图回答

(1)容器A中放置的是动物器官或组织。它一般取自___________。(2)容器A中的动物器官或组织首先要进行的处理是__________，然后用

酶处理，这是为了使细胞分散开来。这样做的目的是_______________.(3)培养首先在B瓶中进行。瓶中的培养基成分有_______

___等。在此瓶中培养一段时间后，一般传到第

代，有许多细胞衰老死亡，到这时的培养称为___________.(4)为了把B瓶中的细胞分装到C瓶中，用_____处理，然后配置成___________，再分装。(5)在C瓶中正常培养了一段时间后，发现细胞全部死亡。原因是_________________________。幼龄动物的器官或组织、动物胚胎剪碎

胰蛋白

使每个细胞能与培养液接触

葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清

10原代培养胰蛋白酶

细胞悬浮液细胞没有发生癌变多利羊的产生过程：黑面绵羊去核卵细胞白面绵羊乳腺细胞核细胞核移植重组细胞早期胚胎胚胎移植另一头绵羊的子宫妊娠、出生克隆羊多利2过程供体动物的组织细胞培育供体细胞核卵细胞去核去核卵细胞注入重组细胞分裂重组胚胎胚胎移植代孕母牛新个体用卵细胞的原因？细胞已经发育成熟;细胞核较易取出；有重组和发育所需的因子便于发育成胚胎受体卵母细胞为什么要先去核？为了使克隆动物的遗传物质(核内)全部来自供体动物的细胞；保证获得其遗传特性。克隆是100%的复制吗？不是，克隆动物的核内DNA跟供体动物的体细胞一样，但其细胞质的DNA则来源于受体卵母细胞。此外，动物的行为，习性受还环境的影响，可能与供体动物不同。三动物细胞融合1概念指在一定条件下2个或多个动物细胞融合形成一个细胞的过程融合后形成的具有原来两个或多个细胞的遗传信息的细胞为杂交细胞。2过程不同的两个细胞灭活病毒或PEG杂交细胞3意义克服远缘杂交的不亲和性诱导动物细胞融合的方法动物细胞融合的用途：制备单克隆抗体：仙台病毒紫外线丧失感染活性（不感染细胞）保留融合活性（诱导细胞融合）物理法化学法（PEG）生物法设计方案：一个B淋巴细胞－－只分泌一种特异性抗体小鼠骨髓瘤细胞－－能无限增殖杂种细胞目的:制备单克隆抗体.原理：B淋巴细胞能产生抗体，骨髓瘤细胞能无限增殖，杂交瘤细胞既能产生抗体又能无限增殖。单克隆抗体制备过程

注射抗原效应B淋巴细胞骨髓瘤细胞诱导细胞融合、筛选杂交瘤细胞细胞培养筛选，继续培养足够数量的、能产生特定抗体的细胞群体外培养注射到小鼠腹腔单克隆抗体诱导其融合的方法有哪些？？

？抗原效应B细胞筛选

筛选

AA型、BB型AB型杂交瘤细胞能产生所需抗体的细胞杂交瘤细胞（1）为什么用小鼠骨髓瘤细胞与B淋巴细胞融合？融合形成杂交瘤细胞的特点？思考：（2）单克隆抗体制备过程中应用哪些细胞工程技术手段？（3）制备过程为何要经过两次筛选？细胞膜的流动性；杂交瘤细胞既能大量繁殖，又可以产生单一抗体动物细胞融合、动物细胞培养技术第一次筛选出杂交瘤细胞；第二次筛选出能产生特定抗体的杂交瘤细胞（4）为什么选用小鼠骨髓瘤细胞与B细胞融合？这样融合成的杂交瘤细胞，继承了双亲细胞的遗传物质，不仅具有B细胞分泌抗体的能力，而且还有无限增殖的本领，因而可以获得大量单克隆抗体单克隆抗体的应用与常规抗体相比，单克隆抗体产量高，特异性强，灵敏度高，优越性十分明显。1、作为诊断试剂2、用于治疗疾病和运载药物作为载体，运载抗癌药物，形成“生物导弹”治疗肿瘤主要用于制备单克隆抗体获得杂种植株用途物理、化学方法（同左）灭活的病毒物理（离心、振荡、电刺激）化学（聚乙二醇）诱导方法使细胞分散后诱导细胞融合去除细胞壁后诱导原生质体融合细胞融合的方法细胞膜的流动性细胞膜的流动性、植物细胞全能性细胞融合的原理动物细胞融合植物体细胞杂交比较项目比较项目植物、动物细胞融合的比较

下图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤风杆菌的抗体实验方案3、图中B为________过程，常用_________作为诱导剂，该细胞继承___________的遗传特性，既能__________,又能___________。1、该实验方案的目的是__________2、A是从小鼠的脾脏中取得_______,该细胞能够产生______制备单克隆抗体B淋巴细胞抗体细胞融合灭活病毒双亲细胞分泌抗体无限增殖B体外培养骨髓瘤细胞杂交瘤细胞足够数量的细胞群注射到小鼠腹腔AC

1、在动物细胞培养过程中遗传物质发生改变的细胞是--------------------（）

A．细胞系B．细胞株C．原代细胞D．传代细胞2、动物细胞工程技术的基础是------（）

A.动物细胞融合B.单克隆抗体C.胚胎移植D.动物细胞培养

AD3、动物细胞融合的目的中最重要的是（）A.克服远缘杂交不亲和B.制备单克隆抗体C.培育新品种D.生产杂种细胞4、动物细胞融合与植物体细胞杂交的比较中，正确的是（）诱导融合的方法完全相同

B.所用的技术手段基本相同C.所采用的原理完全相同D.都能形成杂种细胞BD5、单克隆抗体制备过程中培育的杂交细胞是（）A.由小鼠能产生抗体的B淋巴细胞与肝细胞融合B.由小鼠一个B淋巴细胞诱导融合而成C.由小鼠一个B淋巴细胞与肌瘤细胞诱导融合而成D.由小鼠一个B淋巴细胞与骨髓瘤细胞诱导融合而成D6、用于动物细胞培养的组织和细胞大都取自胚胎或出生不久的幼龄动物的器官或组织，其主要原因是这样的组织细胞