临床血液学检验汇总细胞化学染色

第二篇

造血细胞及其检验

第二章

造血基础理论第三章

造血细胞检验方法第四章

造血细胞检验的临床应用目的要求2023/3/241第三章

造血检验技术

第一节

造血细胞形态学第二节

细胞化学染色第三节

骨髓活体组织检验（自学）第四节

血细胞超微结构检验（自学）第五节

造血祖细胞培养检验（自学）第六节

血细胞遗传学检验（自学）第七节

分子血液学检验（自学）2023/3/242第二节细胞化学染色检验过氧化物酶染色苏丹黑染色酯酶染色过碘酸-雪夫反应中性粒细胞碱性磷酸酶染色酸性磷酸酶染色铁染色急性白血病分型2023/3/243急性白血病分型

急性淋巴细胞白血病（ALL）

急性髓细胞白血病（AML,NALL）M0急性髓细胞白血病微小分化型M1急性粒细胞白血病未分化型M2急性粒细胞白血病部分分化型M3急性早幼粒细胞白血病M4急性粒单核细胞白血病M5急性单核细胞白血病M6急性红白细胞白血病M7急性巨核细胞白血病2023/3/244一

、过氧化物酶染色

peroxidase(POX)血细胞所含的POX主要为髓过氧化物酶（myeloperoxidase，MPO）1985年血液学国际标准化委员会（ICSH）推荐三种方法：二氨基联苯胺法（DAB）、过氧化物酶氨基－甲基卡巴唑染色法及二盐酸联苯胺法。以前常用复方联苯胺法（Washburn法）

下一页2023/3/245二氨基联苯胺法（DAB）的原理

血细胞内的POX，在H2O2存在的情况下，氧化二氨基联苯胺，形成金黄色不溶性沉淀，定位于POX酶所在的活性部位2023/3/246二氨基联苯胺法（DAB）2023/3/247复方联苯胺法的原理

（Washburn法）

四甲基联苯胺

联苯胺蓝→棕黑色↓POXH2O2H2O2023/3/248复方联苯胺法2023/3/249POX染色的结果判断在细胞浆中出现阳性的颗粒，根据阳性物质有无、多少分为（-）至（++++）结果应报阳性率（观察100个白血病细胞，阳性细胞所占的比例）及阳性分布情况

下一页2023/3/2410POX染色的结果分级（-）

无阳性颗粒。（±）

颗粒细小、分布稀疏（+）

颗粒较粗、常呈局灶性分布、约占胞浆1/4（++）

颗粒粗大、分布较密、约占胞浆1/4～1/2（+++）

颗粒粗大、团块状分布、约占胞浆1/2～3/4（++++）布满整个细胞、可覆盖核上2023/3/2411POX染色结果分级：2023/3/2412各种细胞POX染色的结果粒细胞系统：早期原粒为阴性，随着细胞的成熟阳性率和阳性程度逐渐增强单核细胞：早期单核细胞呈阴性，其余各期均呈阳性（弱阳性至＋）白血病时Auer小体可呈阳性吞噬细胞有时阳性，其余细胞系均呈阴性2023/3/2413POX－中性、嗜酸性中幼粒2023/3/2414POX－单核细胞2023/3/2415POX－淋巴、粒、巨核2023/3/2416POX了－粒、红、浆细胞2023/3/2417POX染色的临床意义是辅助判断急性白血病细胞类型的首选、最重要的细胞化学染色

ALL：阴性（阳性率＜3%）M3、M2b：强阳性M2a、M1、M6、M4、M5:多数阳性POX染色阳性为急性髓细胞白血病！2023/3/2418POX－ALL2023/3/2419POX-M12023/3/2420POX-M22023/3/2421POX-M32023/3/2422POX-M3-22023/3/2423POX-M52023/3/2424二、苏丹黑染色法

SudanblackB（SB）原理：细胞浆内的中性脂肪、类固醇、磷脂+苏丹黑→脂类物质被染成黑色结果分级：基本同POX染色临床意义：基本同POX染色。但苏丹黑比POX更为敏感，但特异性差一些2023/3/2425SB染色－M32023/3/2426SB染色－M52023/3/2427SB染色－急单2023/3/2428三、酯酶染色的种类不同血细胞中所含酯酶的成分不同根据酯酶特异性高低分为：特异性酯酶（specificesterase,SE）非特异性酯酶（nonspecificesterase,NSE）特异性酯酶就是指氯乙酸AS-D萘酚酯酶染色非特异性酯酶的种类有多种，根据pH值不同分为酸性：酸性α-醋酸萘酚酯酶中性：α-醋酸萘酚酯酶、醋酸AS-D萘酚酯酶等碱性：α-丁酸萘酚酯酶2023/3/24291．氯乙酸AS-DCE）D萘酚酯酶染色

（naphytholAS-Dchloroacetateesterasestain，NASNAS-DCE几乎仅出现在粒细胞、特异性高。因此又称为“粒细胞酯酶”、“特异性酯酶”氯乙酸ASD萘酚NAS-DCEASD萘酚重氮盐有色沉淀2023/3/2430

NAS-DCE的正常血细胞的染色反应

粒系：原粒细胞为阴性反应或阳性反应,自早幼粒细胞至成熟中性粒细胞均为阳性反应，EOS阴性或弱阳性,BAS阳性单系：个别可呈弱阳性反应其他：淋巴、浆、幼红细胞和血小板均呈阴性反应2023/3/2431

NAS-DCE的临床意义

主要用于辅助鉴别急性白血病细胞类型急性粒细胞白血病：呈阳性或少数阴性急性早幼粒细胞白血病：呈强阳性急性单核细胞白血病：呈阴性，少数弱阳性急粒-单核细胞白血病：粒系阳性，单系阴性急性淋巴细胞白血病：呈阴性2023/3/2432

NAS-DCE染色：1中性成熟粒细胞，呈强阳性；2淋巴细胞，呈阴性；4单核细胞，呈阴性；5幼红细胞，呈阴性

2023/3/2433NAS-DCE染色：M1型中的1原始粒细胞细胞，呈阳性；其他均呈阴性2023/3/2434NAS-DCE染色：M3--早幼粒细胞均呈强阳性，并可见柴捆细胞中的棒状小体也呈阳

2023/3/2435NAS-DCE染色：M3-2023/3/2436NAS-DCE染色：M5--呈强阳性为中性成熟粒细胞，其他原幼单核细胞均呈阴性2023/3/24372．醋酸AS-D萘酚酯酶染色

naphythyolAS-Dacetateesterasestains，

NAS-DAE单核细胞系统的阳性可被氟化钠抑制，通常同时做氟化钠抑制试验

醋酸ASD萘酚NAS-DAEASD萘酚重氮盐有色沉淀2023/3/2438氟化钠抑制率的计算：氟化钠试验抑制率=

抑制前阳性率或阳性积分-抑制后阳性率或阳性积分

抑制前阳性率或阳性积分氟化钠抑制试验的抑制率大于0.50为抑制2023/3/2439

NAS-DAE染色的正常血细胞染色反应

粒系：

常阳性，此反应不被氟化钠抑制单系：

阳性（常较强），此反应能被氟化钠抑制淋系：

阴性或弱阳性，此反应不被氟化钠抑制红系：

早期可呈阳性，随着成熟而减弱

巨系：巨核细胞和血小板为阳性反应2023/3/2440

NAS-DAE染色的临床意义

用以辅助鉴别急性白血病的细胞类型急性粒细胞白血病：阳性，不被NaF抑制急性早幼粒细胞白血病:强阳性，不被NaF抑制急性单核细胞白血病：阳性(常较强)，被NaF抑制急性粒单核细胞白血病：阳性，被NaF部分抑制急性淋巴细胞白血病：弱阳性或阳性，不被NaF抑制2023/3/2441NAS-DAE染色:1中性成熟粒细胞，呈阳性；2单核细胞，阳性较强；3中幼红细胞，呈阴性2023/3/2442NAS-DAE染色:中性中幼粒细胞，呈阳性

2023/3/2443NAS-DAE染色:M5呈强阳性2023/3/2444NAS-DAE染色:M5被氟化钠抑制2023/3/2445NAS-DAE染色:M3强阳性，加氟化钠不抑制2023/3/2446NAS-DAE染色:ALL呈弱阳性2023/3/24473．α-丁酸萘酚酯酶染色—原理

α-naphtholbutyrateesterase，α-NBE)

血细胞内的α-丁酸萘酚酯酶在碱性条件下,将基质液中的α-丁酸萘酚水解,释出α-萘酚,α-萘酚与基质液中的坚牢紫酱GBC偶联,形成不溶性红色沉淀,定位于胞质内2023/3/2448

α-NBE染色的正常血细胞的染色反应

粒系：各期粒细胞均为阴性反应单系：原单为阴性或阳性，幼单和单核为阳性，此反应可被NaF抑制，组织细胞也可阳性,但不被NaF抑制淋系：外周血的T淋巴细胞可呈致密的局限性点状阳性反应，B淋巴细胞为阴性反应，非T非B细胞也可出现散在颗粒状阳性反应其它:如巨核细胞和浆细胞为阴性或弱阳性反应2023/3/2449

α-NBE染色的临床意义

急粒：阴性

急单：可呈阳性反应急粒单：部分白血病细胞呈阳性反应，部分白血病细胞呈阴性反应急淋：阴性

2023/3/2450

急性单核细胞白血病α-NBE染色2023/3/2451四、过碘酸-雪夫反应(糖原染色)－－原理

（periodicacid-Schiffreaction，PAS）

过碘酸(periodicacid)

乙二醇基

双醛基(-CHOH-CHOH)(-CHO-CHO)

有色品红

无色品红（shiff）2023/3/2452

PAS的正常血细胞的染色反应

粒系：分化好的原粒至中性分叶核粒细胞均呈阳性反应，并随着细胞的成熟而逐渐增强，阳性呈弥散性、细颗粒状；EOS中的嗜酸性颗粒阴性，BAS中的嗜碱性颗粒呈阳性单系

分化差的原始单核细胞呈阴性，其他阳性，绝大多数阳性呈细颗粒状淋系：大多数呈阴性，少数呈阳性（常小于20％），阳性呈粗颗粒状或块状巨系

均呈阳性，呈颗粒状或块状红系：均呈阴性2023/3/2453PAS的临床意义红细胞系统疾病：红血病、红白血病、骨髓增生异常综合征中有核红细胞可阳性

辅助鉴别急性白血病类型：ALL呈粗颗粒状或块状；急粒呈弥散红色或细颗粒状；急单：呈细颗粒状其他细胞：戈谢细胞呈强阳性，尼曼-皮克细胞呈阴性或弱阳性；Reed-Sternberg细胞阴性或弱阳性；骨髓转移性腺癌呈强阳性2023/3/2454PAS染色2：小淋巴细胞呈阳性，呈颗粒状（较粗）2023/3/2455PAS染色1：1中性中幼粒细胞，呈弥散及颗粒状阳性（较弱）；2中性成熟粒细胞，呈强阳性；3幼红细胞，呈阴性；4淋巴细胞，呈阴性2023/3/2456巨核细胞呈阳性2023/3/2457PAS染色：1和2为有核红细胞，呈阳性；其他有核红细胞呈阴性2023/3/2458PAS染色：原始及幼稚淋巴细胞均阳性，呈粗颗粒状、、块状阳性2023/3/2459PAS染色：淋巴瘤细胞均阳性，呈粗颗粒状、块状阳性2023/3/2460PAS染色：急粒2023/3/2461PAS染色：M3PAS染色：M32023/3/2462尼曼-皮克细胞呈弱阳性2023/3/2463细胞化学染色总结(1)对于不明原因贫血的初诊患者：常规做铁染色，必要时还应做中性粒细胞碱性磷酸酶染色和过碘酸－雪夫反应急性白血病：常规做过氧化物酶染色、特异性酯酶染色、非特异性酯酶染色及过碘酸-雪夫反应等慢性粒细胞白血病：常规做NAP染色2023/3/2464四种常见类型白血病的细胞化学染色结果M3M1、M2aM5

ALL

POX染色+++～+++++*或--或+**-SB染色+++～+++++*或--或+**-，个别+NAS-DCE染色+++～+++++*或--，个别+**-NAS-DAE染色+++～++++-或+*+～++++