功能性食品的毒理学及功能学评价演示文稿

功能性食品的毒理学及功能学评价演示文稿当前1页，总共147页。功能性食品的毒理学及功能学评价当前2页，总共147页。毒性及功能检验评价依据《功能性食品与方便食品》1996年3月卫生部《保健食品的管理方法》

保健食品的标准、功能评价、审批程序和监督管理办法1996年7月GB15193《食品安全性毒理学评价程序和方法》

卫生部《保健食品功能学评价程序和检验方法》

仅包含了12项功能检验及评价方法2001年7月卫生部《保健食品功能学评价程序和检验方法》

可受理和评价的功能调整到31项2003年2月卫生部《保健食品检验与评价技术规范》

将功能学、毒理学、功效成分及卫生指标检验评价方法三者合一当前3页，总共147页。毒理学评价的四个阶段《功能性食品与方便食品》第一阶段：急性毒性试验经口急性毒性试验：LD50，联合急性毒性，一次最大耐受量试验第二阶段：遗传毒性试验，30天喂养试验，传统致畸试验遗传毒性试验：原核细胞和真核细胞，体内试验和体外试验相结合Ames或基因突变试验；微核试验或染色体畸变试验；精子畸变试验等第三阶段：亚慢性毒性试验

90天喂养试验、繁殖试验、代谢试验第四阶段：慢性毒性试验（包括致癌试验）当前4页，总共147页。毒性试验原则《功能性食品与方便食品》一般无需进行毒性试验的原料或成分属于普通食品和卫生部规定的药食同源的物质：采用传统的工艺及食用方式水提取物，常规服用量，无不安全性报道来源、工艺和质量符合国家要求的营养强化剂或营养素补充剂当前5页，总共147页。毒性试验原则《功能性食品与方便食品》需进行一阶段和三项致突变毒性试验的原料或成分属于普通食品和卫生部规定的药食同源的物质且用水提以外的其它常用工艺生产的：（1）服用量与常规用量相同急性毒性、三项致突变试验（2）服用量大于常规用量还需加做30天喂养试验，必要时进行传统致畸试验和第三阶段毒性试验当前6页，总共147页。毒性试验原则《功能性食品与方便食品》需进行一、二阶段毒性试验的原料或成分文献显示无危害，人群长期食用；具有国际性毒理学评价结果的已知的化学物质，产品质量规格与国外产品一致；国外广泛食用且能提供安全性评价资料；卫生部规定允许使用的动植物及其提取物或微生物。当前7页，总共147页。毒性试验原则《功能性食品与方便食品》需进行一至三阶段毒性试验的情况：一、二阶段试验结果与国外产品不一致的国外少数国家或地区食用的原料或成分水提取物，大于常规服用量用水提以外的其它常用工艺生产的，大于常规用量当前8页，总共147页。毒性试验原则《功能性食品与方便食品》需进行一至四阶段毒性试验的原料和成分 国内外均无食用先例敏感指标及敏感试验的保健食品 不同食用人群和（或）不同功能的保健食品当前9页，总共147页。毒性试验原则《功能性食品与方便食品》保健食品新原料保健食品新原料（以下简称新原料）是指不在国家食品药品监督管理局公布的可用于保健食品、卫生部公布或批准可以食用以及生产普通食品的范围内，拟用于保健食品的原料。国家食品药品监督管理局和国家有关部门规定的不可用于保健食品以及禁止使用的物品，不得作为新原料。当前10页，总共147页。毒性试验原则《功能性食品与方便食品》在已批准的保健食品中使用过，或卫生部已批准为新资源食品的原料，符合以下情况的仍按新原料进行管理：未列入国家食品药品监督管理局公布的可用于保健食品的物品名单；尚未列入卫生部公布或批准的食品新资源或新资源食品名单内；卫生部已批准为食品新资源或新资源食品，但保健食品注册申请人与食品新资源或新资源食品生产批件中载明的申报单位不一致。当前11页，总共147页。毒性试验原则《功能性食品与方便食品》新原料安全性毒理学试验项目的选择①无食用史需做四阶段试验②局部地区有食用史需做三阶段试验其中，100倍<摄入量<300倍需做第四阶段试验③有食用史需做二阶段试验经评价后下一阶段试验④广泛食用的原料二阶段试验（食用史包括地区、年代、人群、食用量、频率等情况）当前12页，总共147页。毒性试验原则《功能性食品与方便食品》新原料安全性毒理学试验项目的选择⑤已知化学物:⑤-1可只做二阶段实验的包括已有权威机构进行系统的毒理学安全性评价有资料证明所用原料与其一致⑤-2如试验结果与权威机构进行的评价不一致，需进入下阶段的试验⑥有新原料的保健食品:根据试验结果综合分析。当前13页，总共147页。对受试保健食品的要求《功能性食品与方便食品》

单一已知化学成分，应提供物理和化学性质多种原料的配方产品，应提供配方配方产品，必要时还应提供各组分，功效成分的物理和化学性质及其检测报告提供原料来源、生产工艺、人的可能摄入量。使用说明书等有关资料受试物应符合既定配方和生产工艺的规格化产品当前14页，总共147页。实验动物的选择及给样量《功能性食品与方便食品》

1.根据各项实验的具体要求，合理选择实验动物

常用大鼠和小鼠，品系不限，推荐使用近交系。2.动物应符合《实验动物管理条例》

清洁级或清洁级以上动物合格证号及动物实验室合格证号3.灌胃量当前15页，总共147页。样品的预处理原则1.介质的选择

应选择适合于受试动物的溶剂、乳化剂、助悬剂，要求无毒、与受试物不发生反应、稳定性好。常用的介质有：蒸馏水、食用植物油、淀粉、明胶及羧甲基纤维素等。2.液体类

受试物浓缩倍数应符合试验要求。浓缩方法不应破坏其有效成份，常用的有60℃～70℃减压或常压蒸发、冷冻干燥。按工艺要求。当前16页，总共147页。样品的预处理原则3.袋泡茶类处理方法与产品推荐饮用方法相同推荐用：80℃--90℃常压用水浸泡30min

水量为受试物的10倍，提取2次，2次提取液合并浓缩至所需浓度标明该浓缩液与受试物的比例当前17页，总共147页。样品的预处理原则4.含乙醇类（1）不需浓缩的受试物乙醇浓度<15％直接进行试验乙醇浓度>15％乙醇浓度应调至15％（2）需浓缩的受试物乙醇浓度<15％浓缩后调至原乙醇浓度乙醇浓度>15％浓缩后调至15％乙醇浓度在进行乙醇浓度调整时必须用原酒基当前18页，总共147页。样品的预处理原则5.膨胀系数较高的受试物选择可溶性介质给受试物的方法：灌胃其最高浓度最大灌胃量时达不到人体推荐量的100倍，按实际达到的倍数标明受试物的膨胀系数当前19页，总共147页。样品的预处理原则6.益生菌等微生物类保健食品在进行Ames试验或体外细胞试验时需将受试物灭活。需浓缩的应采用低温干燥法或由企业提供所需浓度的受试物（附方法、技术参数）。7.以食品为载体的受试物

（1）有营养价值：按设计量进行饲料的营养成份调整，提供详细的说明。（2）大豆蛋白、乳清蛋白如质量、工艺等符合食品标准和安全要求，允许去除。如仅以该原料生产的，可申请免做毒理学试验。当前20页，总共147页。毒理学试验项目要点介绍

急性经口毒性试验鼠伤寒沙门氏菌（Ames）试验骨髓细胞微核试验哺乳动物骨髓细胞染色体畸变试验小鼠精子畸形试验小鼠睾丸染色体畸变试验

30天喂养试验当前21页，总共147页。急性经口毒性试验目的：测定LD50，毒性分级。了解毒性强度、性质和可能的靶器官，为进一步的毒性试验提供剂量和观察指标的选择依据。原理：急性毒性：经口一次性、24h内多次给予，短时间内的毒性反应。致死剂量通常用半数致死剂量LD50表示。急性联合毒性：两种或两种以上的受试物，可能发生拮抗、相加或协同的联合方式，可以根据一定的公式计算和判定标准来确定这三种不同的作用。当前22页，总共147页。急性经口毒性试验时间周期：一般为3周

3-5天，大、小鼠适应期

7-14天，染毒及实验观察期 发生动物死亡时，应进行大体解剖观察和评价指标：毒性反应症状：各器官系统的反常表现（中枢、自主神经、呼吸、心血管、胃肠、生殖泌尿系统、皮毛、粘膜等）及体重变化死亡情况：死亡的时间、数量、性别、表现等。大体尸检结果：如果发生死亡动物当前23页，总共147页。急性经口毒性试验当前24页，总共147页。急性经口毒性试验当前25页，总共147页。急性经口毒性试验当前26页，总共147页。急性经口毒性试验当前27页，总共147页。急性经口毒性试验当前28页，总共147页。急性毒性（LD50）剂量分级表当前29页，总共147页。急性毒性（LD50）剂量分级表当前30页，总共147页。急性经口毒性试验试验结果的判定：1.LD50＜人可能摄入量的100倍，放弃；反之继续下一步试验。2.LD50≥10g/kg体重或按最大耐受量染毒而未出现动物死亡的，可继续下一步试验。当前31页，总共147页。鼠伤寒沙门氏菌（Ames）试验原理：检测受试物诱发鼠伤寒沙门氏菌组氨酸营养缺陷型突变株(his-)回复突变成野生型(his+)的能力。即组氨酸突变菌(his-)在不含组氨酸的最低营养平皿上不能生长；回复突变成野生型(his+)，可在不含组氨酸的最低营养平皿上生长。目的：检测受试物的诱变性，预测其遗传危害和潜在致癌作用的可能性。当前32页，总共147页。鼠伤寒沙门氏菌（Ames）试验时间周期：一般为2周 第一周，鼠伤寒沙门氏菌种、试剂、培养基准备 第二周，染毒，培养48h，读平板，菌落计数剂量设计：决定受试物最高剂量的因素是对细菌的毒性及其溶解度。最低剂量为0.2ug/皿；最高剂量为5mg/皿，或最大溶解剂量，最大饱和剂量以及最小毒性剂量。可设五个剂量组，组间距不超过5倍。同时设：阳性对照组，溶剂对照组和未处理对照组。当前33页，总共147页。鼠伤寒沙门氏菌（Ames）试验当前34页，总共147页。鼠伤寒沙门氏菌（Ames）试验观察及评价指标：各受试物组及三个对照组的四种菌株（TA97a，TA98，TA100和TA102）分别在加和不加S9情况下的菌落计数。

结果判断:➢

只要在一种试验菌株得到阳性结果，即认为受试物是致突变物➢仅当四种试验菌株均得到阴性结果，才认为受试物是非致突变物❖不加S9混合液得到阳性结果，说明受试物是直接致突变物❖加S9混合液才得到阳性结果，说明该受试物是间接致突变物当前35页，总共147页。鼠伤寒沙门氏菌（Ames）试验评价（掺入法）：受试物组回变菌落数增加一倍以上（即回变菌落数≥2×未处理对照组数），并有剂量反应关系或有可重复的阳性反应，即可判试验阳性。当前36页，总共147页。骨髓细胞微核试验原理：微核是在细胞有丝分裂后期染色体有规律地进入子细胞形成细胞核时，仍然留在细胞质中的色单体或染色体的无着丝点断片。末期之后，单独形成一个或几个规则的次核，被包含在细胞胞质内，因比主核小，故称为微核。1有丝分裂毒物的作用使个别染色体或带着丝点的染色体环和断片在细胞分裂后期被滞留在细胞质中2断片或无着丝点染色体在细胞分裂后期不能定向移动，从而遗留在细胞质中当前37页，总共147页。骨髓细胞微核试验目的：检测整体动物体内骨髓嗜多染红细胞微核发生率，以评价受试物致突变的可能性。当前38页，总共147页。骨髓细胞微核试验时间周期：一般为2周

3-5天适应期 小鼠经口染毒，30h给受试物法 取胸骨或股骨，收集骨髓，涂片，染色，镜检剂量设计：至少设置3个剂量，最高剂量组为动物出现严重中毒表现和/或个别动物出现死亡的剂量。低剂量组应不出现毒性反应。一般取LD50的1/2、1/4、1/8作为三个剂量。当受试物的LD50≥10g/kg.bw时，最高剂量通常采用10g/kg.bw。同时设阳性对照组和溶剂对照组。当前39页，总共147页。骨髓细胞微核试验观察及评价指标：每只动物计数1000个嗜多染红细胞，记录含有微核的细胞数，并计算微核千分率。观察嗜多染红细胞与成熟红细胞的比例。结果评价：受试物组与对照组微核率相比，增高呈剂量反应关系并有统计学意义，试验结果为阳性。当前40页，总共147页。哺乳动物骨髓细胞染色体畸变试验目的：检测受试物对整体动物骨髓细胞染色体畸变的致突变性，以评价其致突变的可能性。原理：当受试物作用于细胞周期G1期和S期时，可诱发染色体型畸变，而作用于G2期时则诱发染色体单体型畸变。给动物腹腔注射秋水仙素，抑制细胞分裂时纺锤体的形成，增加中期分裂相细胞的比例，并使染色体丝缩短、分散，轮廓清晰。在显微镜下便可观察染色体数目和形态。当前41页，总共147页。哺乳动物骨髓细胞染色体畸变试验时间周期：一般为3周

3-5天适应期 小鼠或大鼠经口染毒2-4次，每次间隔24h，在末次染毒18-24h进行取材（取材前2-4h，腹腔注射秋水仙素）。 取股骨，收集骨髓，制片，染色，镜检剂量设计：同骨髓细胞微核试验当前42页，总共147页。哺乳动物骨髓细胞染色体畸变试验观察及评价指标：每只动物分析100个中期相细胞，每个剂量组不少于1000个。记录染色体数目及结构的改变。结果评价：受试物组与对照组染色体畸变率相比，增高呈剂量反应关系并有统计学意义，试验结果为阳性。当前43页，总共147页。小鼠精子畸形试验目的：检测整体动物体内精子畸形发生率，以评价受试物对体内生殖细胞的致突变作用。原理：小鼠精子畸形受基因控制，具有高度遗传性，许多常染色体及X、Y性染色体基因决定精子形态。精子的畸形主要是指形态的异常，已知精子的畸形是决定精子形成的基因发生突变的结果。因此形态的改变提示有关基因及其蛋白产物的改变。当前44页，总共147页。小鼠精子畸形试验时间周期：一般为7周

3-5天适应期 小鼠经口连续染毒5天，于首次给样后的35天处死动物 取两侧附睾，收集精子，滴片，染色，镜检剂量设计：同骨髓细胞微核试验当前45页，总共147页。小鼠精子畸形试验观察及评价指标：每只动物检查1000个精子，记录精子畸形数目及类型。结果评价：受试物组与对照组精子畸变率相比，增高呈剂量反应关系并有统计学意义，试验结果为阳性。当前46页，总共147页。小鼠睾丸染色体畸变试验目的：检测整体动物睾丸染色体畸变发生率，以评价受试物对整体哺乳动物睾丸生殖细胞的致突变性。原理：不同周期的雄性生殖细胞对化学物质的敏感性不同，多数情况下化学诱变剂诱发染色体畸变必须经过DNA复制期，故在前细线期处理。第12～14d采样，以观察作用于前细线期引起的精母细胞染色体畸变效应。当前47页，总共147页。小鼠睾丸染色体畸变试验时间周期：一般为7周

3-5天适应期 小鼠经口连续染毒5天，与首次给样后的12-14天处死动物取材，（取材前6h，腹腔注射秋水仙素）。取两侧睾丸，收集生殖细胞，滴片，染色，镜检剂量设计：同骨髓细胞微核试验当前48页，总共147页。小鼠睾丸染色体畸变试验观察及评价指标：每只动物分析100个中期相细胞，记录染色体数目及结构的改变（包括断片、易位、畸变细胞率、常染色体单价体、性染色体单价体等）。结果评价：受试物组与对照组的断片、易位、畸变细胞率、常染色体单价体、性染色体单价体等差异有统计学意义，试验结果为阳性。当前49页，总共147页。遗传毒性试验组合试验结果的判定：如三项致突变试验（Ames试验，微核或骨髓细胞染色体畸变试验，精子畸形或睾丸染色体畸变试验）中，体外或体内有一项或以上阳性，一般应放弃该受试物用于保健食品。如三项试验均为阴性，则可继续进行下一步的毒性试验。当前50页，总共147页。30天喂养试验目的：急性毒性试验的基础上，此试验可进一步了解毒性作用，特别是观察对生长发育的影响，并可初步估计最大观察到的无作用剂量，估计亚慢性摄入的危害性。原理：以不同剂量受试物每日经口给予各组实验动物，连续30天。染毒期间每日密切观察动物的毒性反应，染毒结束后进行大体解剖、血生化及病理检查，以此观察重复喂食不同剂量的受试物对动物引起的有害作用。当前51页，总共147页。30天喂养试验时间周期：在获得了急性毒性数据后，一般为2月

3-5天，大鼠适应期

30天，染毒及实验观察期 再进行大体解剖、血液、生化、器官病理检查。当前52页，总共147页。30天喂养试验剂量设计：至少设三个剂量组和一个对照组。高剂量应能引起动物明显毒效应但不造成动物死亡。低剂量应不出现任何毒作用，同时在这二剂量之间设几个中间剂量组。对于能获得LD50的受试物：最高剂量为10％～25％的LD50，最低剂量组至少为人可能摄入量的3倍。对于不能获得LD50的受试物：最高剂量为人可能摄入量的100倍，或按最大灌胃剂量或在饲料中的最大掺入量。当前53页，总共147页。30天喂养试验观察及评价指标：一般情况观察：每日的表现、行为、中毒和死亡情况。每周1次体重及2次食物摄入量，计算食物利用率。血液学指标：喂养结束后测定血红蛋白、红和白细胞总数及分类，必要时测定血小板或网织红细胞数等指标。生化学指标：喂养结束后测定谷丙转氨酶、谷草转氨酶、尿素氮、肌肝、血糖、白蛋白、总蛋白、胆固醇和甘油三酯。病理检查：大体解剖、脏器称重、组织病理学检查。当前54页，总共147页。30天喂养试验试验结果的判定：对于只要求进行一、二阶段试验者，最大未观察到有害作用剂量≥人可能摄入量的100倍，综合其它试验结果可初步做出安全性评价。最小观察到有害作用剂量≤人可能摄入量的100倍，或观察到毒性反应的最小剂量组其受试物在饲料中比例≤10％，放弃。在中低剂量组中个别指标与对照组相比有差异，应综合分析，决定取舍或进行下一步毒理试验。当前55页，总共147页。其它试验结果判断

传统致畸试验：需大于或等于人摄入量的100倍。在50倍至100倍之间需进行安全性评价，小于50倍需放弃。

90天喂养试验、繁殖试验：1.仅在国外少数国家或国内局部地区有食用历史的原料或成分，需大于或等于人摄入量的100倍。2.国内外均无食用历史的原料或成分时，需大于或等于人摄入量的300倍。在100倍至300倍之间需进行慢性毒性试验，小于100倍需放弃。当前56页，总共147页。其它试验结果判断

慢性毒性试验：以LD50或30天喂养试验的最大未观察到有害作用剂量设计受试物各剂量组，未见有毒性作用。致癌试验阳性判定依据：肿瘤只发生在实验组动物，对照组中无肿瘤发生。实验组和对照组均发生肿瘤，但实验组发生率高。实验组和对照组肿瘤发生率无明显差异，但实验组发生时间较早。符合以上三项中的情况之一，并经统计学处理有统计学意义，可认为致癌试验阳性。当前57页，总共147页。安全性评价的科学性和艺术性安全性评价的艺术性：1.动物实验结果外推到人必须考虑动物与人的种属差异；2.安全性标准与社会经济基础、技术能力的相符性；3.安全性标准与社会和公众利益之间的平衡性。结论：在对化学物质进行科学地安全性评价之后，应结合试验的局限性，社会经济状况，人们的生活习惯等因素，对评价结果作出一个合理的分析，为卫生标准的制定提供具有实际指导意义的依据。当前58页，总共147页。应综合考虑的问题1.试验指标的统计学意义和生物学意义在分析试验组与对照组指标统计学的显著性时，应根据其有无剂量反应关系及与本实验室的历史性对照值范围比较的原则,来综合考虑指标差异有无生物学意义。2.生理作用与毒性作用对实验中某些指标的异常改变，在结果分析时要注意区分是生理学表现还是受试物的毒性作用。当前59页，总共147页。应综合考虑的问题3.时间-毒性效应关系对由受试物引起的毒性效应进行分析评价时，要考虑在同一剂量水平下毒性效应随时间的变化情况。4.特殊人群和敏感人群对孕妇、乳母或儿童食用的保健食品，应特别注意其胚胎毒性或生殖发育毒性、神经毒性和免疫毒性。当前60页，总共147页。应综合考虑的问题5.人的可能摄入量较大的保健食品应考虑给予受试物量过大时，可能影响营养素摄入量及其生物利用率，从而导致某些毒理学表现，而非受试物本身的毒性作用所致。6.含乙醇的保健食品对实验中出现的某些指标的异常改变，在结果分析评价时应注意区分是乙醇本身还是其它成分的作用。当前61页，总共147页。应综合考虑的问题7.动物年龄对试验结果的影响对实验中出现的某些指标的异常改变，要考虑是否因动物年龄选择不当所致。8.安全系数鉴于动物、人的种属和个体之间的生物学差异，安全系数通常为100。当前62页，总共147页。应综合考虑的问题9.人体资料在评价保健食品的安全性时，应尽可能收集人群食用受试物后反应的资料。10.综合评价在对保健食品进行最后评价时，必须综合考虑受试物的原料来源、理化性质、毒性大小、代谢特点、蓄积性、接触的人群范围、食品中的使用范围、人的可能摄入量及保健功能等因素，确保其对人体健康的安全性。当前63页，总共147页。应综合考虑的问题11.保健食品安全性的重新评价：很早的毒性评价可能因为当时科学水平和技术条件的限制，现已不适用需重新评价。12.若受试物掺入饲料的最大加入量（10％）或液体受试物经浓缩后仍达不到最大观察到有害作用剂量为人的可能摄入量的规定倍数时，如何综合其它的毒性试验结果进行安全性评价。当前64页，总共147页。审评结论的判定1.认可毒理学试验：试验设计合理，操作规范，试验结果能够证明受试物的安全性。2.属以下几种情况之一，补充资料后建议批准：（1）检验报告格式不规范，需要重新出具检验报告毒理学试验报告。（2）数据偏离历史对照较大，需检验机构做出解释。（3）未提供某些试验数据，需要补充提供。当前65页，总共147页。审评结论的判定3.重做试验，大会再审，属以下几种情况之一：（1）由于实验操作不规范，根据提供的检验报告无法评价产品的安全性，需要做除30天/90天喂养试验以外的毒理学试验；（2）已有数据提示可能存在安全性问题，但难以下结论，需要重复试验。当前66页，总共147页。（1）毒理学评价的结果表明产品在推荐剂量下对人体具有一定的毒性，存在安全性问题。（2）产品的原料、配方存在明显的安全性问题，如配方含有“可用于保健食品的原料”名单以外的原料，且未进行新资源食品安全性毒理学评价。（3）选择安全性毒理学试验不符合程序规定，未完成相应阶段的毒理学试验。4.对产品的安全性不予认可的情况如下（一）：当前67页，总共147页。（4）毒理、功能、兴奋剂与卫生学、稳定性试验样品的批号不一致。（5）未按规定提供安全性毒理学评价资料的。（6）30天/90天喂养试验剂量设计不合理或某些指标异常，结果不可信。4.对产品的安全性不予认可的情况如下(二)：当前68页，总共147页。《功能性食品与方便食品》当前69页，总共147页。70功能食品的功能学评价对功能食品进行功能学评价是功能食品科学研究的核心内容，主要针对功能食品所宣称的生理功效进行动物学甚至是人体试验。本节将介绍评价功能食品的统一程序和试验规程。当前70页，总共147页。《功能性食品与方便食品》一个保健食品最多可以申报两个功能。27个保健食品功能学评价的具体方法。其中有7个功能不需做人体试食试验。功能学评价增强免疫力改善睡眠缓解体力疲劳提高缺氧耐受力对辐射危害有辅助保护功能增加骨密度对化学性肝损伤有辅助保护功能改善皮肤油份当前71页，总共147页。《功能性食品与方便食品》5个保健功能学评价只需进行人体试食试验，不必进行动物试验缓解视疲劳祛痤疮祛黄褐斑改善皮肤水份改善皮肤油份当前72页，总共147页。73一、功能学评价的基本要求（一）对受试样品的要求1.学性质（包括化学结构、纯度、稳定性等）有关资料。2.受试样品必须是规格化的定型产品，即符合既定的配方、生产工艺及质量标准。3.提供受试样品的安全性毒理学评价的资料以及卫生学检验报告，受试样品必须是已经过食品安全性毒理学评价确认为安全的食品。功能学评价的样品与安全性毒理学评价、卫生学检验的样品必须为同一批次（安全性毒理学评价和功能学评价实验周期超过受试样品保质期的除外）。4.应提供功效成分或特征成分、营养成分的名称及含量。5.如需提供受试样品违禁药物检测报告时，应提交与功能学评价同一批次样品的违禁药物检测报告。当前73页，总共147页。74（二）对实验动物的要求1.根据各项实验的具体要求，合理选择实验动物。常用大鼠和小鼠，品系不限，推荐使用近交系动物。2.动物的性别、年龄依实验需要进行选择。实验动物的数量要求为小鼠每组10～15只（单一性别），大鼠每组8～12只（单一性别）。3.动物应符合国家对实验动物的有关规定。当前74页，总共147页。75（三）对给受试样品剂量及时间的要求

1.各种动物实验至少应设3组，必要时可设阳性对照组或空白对照组。剂量选择应合理，尽可能找出最低有效剂量。在3个剂量组中，其中一个剂量应相当于人体推荐摄入量（折算为每公斤体重的剂量）的5倍（大鼠）或10倍（小鼠），且最高剂量不得超过人体推荐摄入量的30倍（特殊情况除外），受试样品的功能实验剂量必须在毒理学评价确定的安全剂量范围之内。2.给受试样品的时间应根据具体实验而定，一般为30天。当给予受试样品的时间已达30天而实验结果仍为阴性时，则可终止实验。当前75页，总共147页。76（四）对受试样品处理的要求1.受试样品推荐量较大，超过实验动物的灌胃量、掺入饲料的承受量等情况时，可适当减少受试样品的非功效成分的含量。2.对于含乙醇的受试样品，原则上应使用其定型的产品进行功能实验，其三个剂量组的乙醇含量与定型产品相同。如受试样品的推荐量较大，超过动物最大灌胃量时，允许将其进行浓缩，但最终的浓缩液体应恢复原乙醇含量，如乙醇含量超过15％，允许将其含量降至15％。调整受试样品乙醇含量应使用原产品的酒基。当前76页，总共147页。773.液体受试样品需要浓缩时，应尽可能选择不破坏其功效成分的方法。一般可选择60～70℃减压进行浓缩。浓缩的倍数依具体实验要求而定。4.对于以冲泡形式饮用的受试样品（如袋泡剂），可使用该受试样品的水提取物进行功能实验，提取的方式应与产品推荐饮用的方式相同。如产品无特殊推荐饮用方式，则采用下述提取的条件：常压，温度80～90℃，时间30～60分钟，水量为受试样品体积的10倍以上，提取2次，将其合并浓缩至所需浓度。当前77页，总共147页。78（五）对给受试样品方式的要求必须经口给予受试样品，首选灌胃。如无法灌胃则加入饮水或掺入饲料中，计算受试样品的给予量。（六）对合理设置对照组的要求以载体和功效成分（或原料）组成的受试样品，当载体本身可能具有相同功能时，应将该载体作为对照。当前78页，总共147页。79（七）人体试食试验规程评价食品保健作用时要考虑的因素•1.人的可能摄入量除一般人群的摄入量外，还应考虑特殊的和敏感的人群(如儿童、孕妇及高摄入量人群)。•2.人体资料由于存在动物与人之间的种属差异、在将动物试验结果外推到人时，应尽可能收集人群服用受试物的效应资料，若体外或体内动物试验未观察到或不易观察到食品的保健效应或观察到不同效应，而有关资料提示对人有保健作用时，在保证安全的前提下，应进行必要的人体试食试验。•3.结果的重复性和剂量反应关系在将评价程序所列试验的阳性结果用于评价食品的保健作用时，应考虑结果的重复性和剂量反应关系，并由此找出其最小有作用剂量。当前79页，总共147页。80二、试验项目、试验原则及结果判定(一)免疫调节作用1.试验项目:（1）动物试验①脏器/体重比值:a.胸腺/体重比值b.脾脏/体重比值②细胞免疫功能测定a.小鼠脾淋巴细胞转化实验b.迟发型变态反应③体液免疫功能测定a.抗体生成细胞检测b.血清溶血素测定④单核－巨噬细胞功能测定：a.小鼠碳廓清试验b.小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验⑤NK细胞活性测定当前80页，总共147页。81（2）人体试食试验①细胞免疫功能测定

外周血淋巴细胞转化试验②体液免疫功能试验单向免疫扩散法测定IgG、IgA、IgM③非特异性免疫功能测定吞噬与杀菌试验④NK细胞活性测定当前81页，总共147页。822.试验原则要求选择一组能够全面反映免疫系统各方面功能的试验，其中细胞免疫、体液免疫和单核——巨噬细胞功能三个方面至少各选择1种试验，在确保安全的前提下尽可能进行人体试食试验。当前82页，总共147页。833.结果判定在一组试验中，受试物对免疫系统某方面的试验具有增强作用而对其他试验无抑制作用，可以判定该受试物具有该方面的免疫调节效应；对任何一项免疫试验具有抑制作用可判定该受试物具有免疫抑制效应。在细胞免疫功能、体液免疫功能、单核－巨噬细胞功能及NK细胞功能检测中，如有两个以上(含两个)功能检测结果阳性，即可判定该受试物具有免疫调节作用。当前83页，总共147页。84（二）延缓衰老作用•1.试验项目•

（1）动物试验①生存试验•a.小鼠生存试验•b.大鼠生存试验•c.果蝇生存试验②过氧化脂质含量测定•a.血(或组织)中过氧化脂质降解产物丙二醛(MDA)含量测定•

组织中脂褐质含量测定•③抗氧化活力测定•a.血(或组织)中超氧化物歧化酶(SOD)活力测定•b.血(或组织)中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH－PX)活力测定当前84页，总共147页。85（2）人体试食试验血中过氧化脂质降解产物丙二醛(MDA)含量测定血中超氧化物歧化酶(SOD)活力测定血中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH－PX)活力测定当前85页，总共147页。862.试验原则衰老机制比较复杂，迄今尚无一种公认的衰老机制学说，因而无单一、简便、实用的衰老指标可供应用，应采用尽可能多的试验方法，以保证试验结果的可信性。动物试验，除上述生存试验，过氧化脂质含量测定、抗氧化酶活力测定3个方面各选一项必做外，可能时应多选择一些指标(如脑、肝组织中单胺氧化酶(MAO-B)活力测定等)加以辅助。生存试验是最直观、最可靠的实验方法，果蝇具有自下而上期短，繁殖快，饲养简便等优点，通常多选果蝇作生存试验，但果蝇种系分类地位与人较远，故必须辅助过氧化脂质含量测定及抗氧化活力测定才能判断是否具有延缓衰老作用。生化指标测定应选用老龄鼠，除设老龄对照外，最好同时增设少龄对照，以比较受试物抗氧化的程度，必要时可将动物试验与人体试食试验相结合综合评价。当前86页，总共147页。873.结果判定若大鼠或小鼠生存试验为阳性，即可判定该受试物具有延缓衰老的作用。若果蝇生存试验、过氧化脂质和抗氧化酶三项指标均为阳性，即可判定该受试物具有延缓衰老的作用。若过氧化脂质和抗氧化酶两项为阳性，可判定该受试物具有抗氧化作用，并提示可能具有延缓衰老作用。当前87页，总共147页。88（三）改善记忆作用1.试验项目•

（1）动物试验•①跳台试验•②避暗试验•③穿梭箱试验•④水迷宫试验•

（2）人体试食试验•①韦氏记忆量表•②临床记忆量表当前88页，总共147页。892.试验原则（1）试验应通过训练前、训练后及重测验前3种不同的给予受试物方法观察其对记忆全过程的影响。（2）应采用一组(2个以上)行为学试验方法，以保证实验结果的可靠性。（3）人体试食试验为必做项目，并应在动物试验有效的前提下进行。（4）除上述试验项目外，还可以选用嗅觉厌恶试验、味觉厌恶试验、操作式条件反射试验，连续强化程序试验、比率程序试验、间隔程序试验。当前89页，总共147页。903.结果判定动物试验2项或2项以上的指标为阳性，且2次或2次以上的重复测试结果一致，可以认为该受试物具有改善该类动物记忆作用；人体试食试验结果阳性，则可认为该受试物具有改善人体记忆作用。当前90页，总共147页。91（四）促进生长发育作用1.试验项目本功能试验研究是以动物学试验为研究基础•

（1）胎仔情况包括活胎数、雌雄比例、死胎数、分娩胎仔总数。•

（2）体重及食物利用率记录出生时及生后4、7、14、21、30、60d幼鼠的体重，计算断乳后幼鼠的食物利用率。•

（3）生理发育指标记录耳廓分离、门齿萌出、开眼、长毛时间、阴道开放、睾丸下降时间。•

（4）神经反射指标平面翻正、前肢抓力、悬崖回避、嗅觉定位、听觉警戒、负趋地性、回旋运动、视觉发育、空中翻正、游泳发育。当前91页，总共147页。922.试验原则（1）给受试物的时间可根据具体情况选择在母鼠孕期或哺乳期至成年期。（2）在神经反射指标中应选择一组(5个以上)的行为学试验方法，以保证结果的可靠性。当前92页，总共147页。933.结果判定在胎仔情况、体重及食物利用率、生理发育、神经反射4类指标中有3类以上(含3类)指标为阳性，可认为受试物有促进生长发育的作用。当前93页，总共147页。94（五）抗疲劳作用本功能试验研究是以动物学试验为研究基础•1.试验项目•

（1）运动试验•a.负重游泳试验•b.爬杆试验•

（2）生物化学指标测定•a.血乳酸含量•b.血清尿素氮含量•c.肝/肌糖原比值测定当前94页，总共147页。952.试验原则运动试验与生化指标检测相结合。在进行游泳或爬杆试验前，动物应进行初筛。除以上生化指标外，还可检测血糖、乳酸脱氢酶、血红蛋白以及磷酸肌酸等指标。3.结果判定若1项以上(含1项)运动试验和2项以上(含2项)生化指标为阳性，即可以判断该受试物具有抗疲劳作用。当前95页，总共147页。96（六）减肥作用1.减肥原则•（1）减除体现人多余的脂肪，不单纯以减轻体重为标准。•（2）每日营养素的摄入量应基本保证机体正常生命活动的要求。•（3）对机体健康无明显损害。当前96页，总共147页。972.试验项目（1）动物试验（首先建立动物肥胖模型）•体重测定•体内脂肪重量测定（2）人体试食试验•主要测定指标：体重、体重指数、腰围、腹围、臀围、体内脂肪含量。当前97页，总共147页。983.试验原则在进行减肥试验时，除上述指标必测外，还应进行机体营养状况检测，运动耐力测试以及与健康有关的其它指标的观察。该功能的人体试食试验为必做项目，动物试验与人体试食试验相结合，综合进行评价。当前98页，总共147页。994.结果判定在动物试验中，体重及体内脂肪重量2个指标均阳性，并且对机体健康无明显损害，即可初步判定该受试物具有减肥作用。在人体试食试验中，体内脂肪量显著减少，且对机体健康无明显损害，可判定该受试物具有减肥作用。当前99页，总共147页。100（七）耐缺氧作用本功能试验研究是以动物学试验为研究基础•1.试验项目•

小鼠常压耐缺氧实验•2.结果判定•

耐缺氧实验阳性，说明该受试物具有耐缺氧作用。当前100页，总共147页。101（八）抗辐射作用本功能试验研究是以动物学试验为研究基础•1.试验项目•

（1）亚急性试验•30天存活率或平均存活时间•

白细胞总数•

（2）亚慢性或慢性试验•

小鼠睾丸染色体畸变试验•

小鼠骨髓细胞微核试验当前101页，总共147页。1022.试验原则较高剂量一次辐射，选择亚急性试验；小剂量多次辐射，选择亚慢性或慢性试验。当前102页，总共147页。1033.结果判定亚急性试验项目中2项结果为阳性，则可判定该受试物对较高剂量一次辐射有拮抗作用。亚慢性或慢性试验中2项结果为阳性，则可判定该受试物对小剂量多次辐射有拮抗作用。当前103页，总共147页。104（九）抗突变作用1.试验项目•Ames试验或V79细胞基因突变试验•小鼠骨髓细胞微核试验•小鼠睾丸染色体畸变试验当前104页，总共147页。1052.试验原则•Ames试验与V79细胞基因突变试验任选一项，采用体内与体外试验相结合的原则。3.结果判定•抗突变三项试验中有两项为阳性时，则可判定该受试物具有抗突变作用。当前105页，总共147页。106（十）抑制肿瘤作用1.试验项目•(1)动物诱发性肿瘤试验•(2)动物移植性肿瘤试验•(3)免疫功能试验•NK细胞活性测定•

单核－巨噬细胞功能测定当前106页，总共147页。1072.试验原则•

动物诱发性肿瘤试验及动物移植性肿瘤试验两项中任选一项，同时必做2项免疫功能试验3.结果判定•

动物诱发性肿瘤试验及动物移植性肿瘤试验两项试验中有一项为阳性，并且对免疫功能无抑制作用，则可判定该受试物具有抑制肿瘤的作用。当前107页，总共147页。108（十一）辅助降血脂1.试验项目•

（1）动物实验•①体重•②血清总胆固醇•③甘油三酯•④高密度脂蛋白胆固醇•

（2）人体试食试验•①血清总胆固醇•②甘油三酯•③高密度脂蛋白胆固醇当前108页，总共147页。1092.试验原则（1）动物实验和人体试食试验所列指标均为必测项目。（2）动物实验选用脂代谢紊乱模型法，预防性或治疗性任选一种。用高胆固醇和脂类饲料喂养动物可形成酯代谢紊乱动物模型，再给予动物受试样品或同时给予受试样品，可检测受试样品对高脂血症的影响，并可判定受试样品对脂质的吸收、脂蛋白的形成、脂质的降解或排泄产生的影响。当前109页，总共147页。110（3）在进行人体试食试验时，应对受试样品的食用安全性作进一步的观察后进行。选择单纯血脂异常的人群，保持平常饮食，半年内采血2次，如两次血清总胆固醇（TC）均为5.2~6.24mmol/L或血清甘油三酯（TG）1.65~2.2mmol/L，均可作为备选对象，受试者最好为非住院的高血脂症患者，自愿参加试验。受试期间保持平日的生活和饮食习惯，空腹取血测定各项指标。但年龄在18岁以下或65岁以上者、妊娠或哺乳期妇女、对功能食品过敏者、合并有心、肝、肾和造血系统等严重疾病、精神病患者、短期内服用与受试功能有关的物品，影响到对结果的判断者、未按规定食用受试样品，无法判定功效或资料不全影响功效或安全性判断者不可作为人体试食试验对象。当前110页，总共147页。1113.结果判定（1）动物实验•①辅助降血脂结果判定•检测中血清总胆固醇和甘油三酯二项指标阳性，可判定该受试样品辅助降血脂动物实验结果阳性。•②辅助降低甘油三酯结果判定•

甘油三酯二个剂量组结果阳性；甘油三酯一个剂量组结果阳性，同时高密度脂蛋白胆固醇结果阳性，可判定该受试样品辅助降低甘油三酯动物实验结果阳性。•③辅助降低血清总胆固醇结果判定•

血清总胆固醇二个剂量组结果阳性；血清总胆固醇一个剂量组结果阳性，同时高密度脂蛋白胆固醇结果阳性，可判定该受试样品辅助降低血清总胆固醇动物实验结果阳性。当前111页，总共147页。112（2）人体试食试验血清总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白胆固醇三项指标检测中，血清总胆固醇和甘油三酯二项指标阳性，可判定该受试样品具有辅助降血脂作用；血清总胆固醇、甘油三酯两项指标中任一项指标阳性，同时高密度脂蛋白胆固醇结果阳性，可判定该受试样品具有辅助降低血清总胆固醇或辅助降低甘油三酯作用。当前112页，总共147页。113（十二）清咽功能1.试验项目•

（1）动物试验•①大鼠棉球植入试验•②大鼠足趾肿胀试验•

（2）人体试食试验•

咽部症状、体征当前113页，总共147页。114

2.试验原则（1）动物实验和人体试食试验为必做项目。（2）大鼠棉球植入实验和大鼠足趾肿胀实验任选其一。（3）在进行人体试食试验时，应对受试样品的食用安全性作进一步的观察后进行。选择慢性咽炎人群，主观症状有咽痛、咽痒、咽干、干咳、异物感、多言加重等。当前114页，总共147页。115

3.结果判定（1）动物实验•

大鼠棉球植入实验或大鼠足趾肿胀实验结果阳性，可判定受试样品清咽动物实验结果阳性。（2）人体试食试验•

咽部症状、体征明显改善，症状、体征的改善率明显增加，可判定受试样品具有清咽的作用。当前115页，总共147页。116（十三）调节血糖

1.试验项目•

（1）动物实验•①高血糖模型动物的空腹血糖值、糖耐量试验。•②正常动物的降糖试验。（2）人体试食试验•

空腹血糖值、糖耐量试验、胰岛素测定、尿糖测定。当前116页，总共147页。1172.试验原则（1）建立高血糖动物模型，常用四氧嘧啶作为建模药物。（2）人体试食试验是必须项目，在动物学试验有效基础上并对受试样品的食用安全性作进一步的观察后进行。试验人群为Ⅱ型糖尿病患者，除测定规定的指标外，应加测一般健康指标。当前117页，总共147页。1183.结果判定（1）动物实验动物学试验有一项指标阳性；（2）人体试食试验的空腹血糖值、糖耐量试验两项指标中有一项阳性，胰岛素又未升高，可判定受试样品有降血糖作用。当前118页，总共147页。119（十四）改善胃肠道功能改善胃肠功能表现在多方面：促进消化吸收功能、改善胃肠道菌群功能、润肠通便、保护胃粘膜功能。分述如下：•1.促进消化吸收功能•（1）试验项目• ①动物试验•

体重、食物利用率、胃肠运动实验、消化酶活性、小肠吸收实验• ②人体实验•

食欲、食量、胃胀腹感、大便性状与次数、体征症状、体重、血红蛋白、胃肠运动实验、小肠吸收实验。当前119页，总共147页。120（2）试验原则①动物试验与人体试验中的所列项目均为必做项目，人体试验还应增加一般健康指标。②针对纠正儿童食欲不良或成人消化不良者可从所列项目中选择重点项目。当前120页，总共147页。121（3）结果判定①动物实验中胃肠运动实验、消化酶活性、小肠吸收实验三项中一项阳性，检测结果判定为阳性。②针对纠正儿童食欲不振时，重点观察人体试验中食欲、食量明显增加，体重、血红蛋白项中有一项阳性，检测结果判定为有促进消化吸收功能。③针对成人消化不良时，项目中体征症状、胃肠运动实验、小肠吸收实验项中一项阳性，检测结果判定为有促进消化吸收功能。当前121页，总共147页。1222.改善胃肠道菌群功能（1）试验项目（肠道菌群以cfu/g粪便计）•①动物试验•

双歧杆菌、乳杆菌、肠球菌、肠杆菌、产气荚膜梭菌。•②人体实验•

双歧杆菌、乳杆菌、肠杆菌、产气荚膜梭菌。•

（2）试验原则•①动物与人体所列检验项目均为必测项目。•②人体试验为必做项目，还可以加测一般健康指标。•③动物可用正常动物或肠道菌群紊乱动物模型。当前122页，总共147页。123（3）结果判定①动物试验•A双歧杆菌、乳杆菌明显增加，肠球菌、肠杆菌增加但幅度小于双歧杆菌、乳杆菌的增幅，产气荚膜梭菌减少或无变化；B双歧杆菌、乳杆菌明显增加而产气荚膜梭菌减少或无变化、肠球菌、肠杆菌无变化。上两项中一项符合可判定为阳性。②人体试食试验•A双歧杆菌、乳杆菌明显增加，肠球菌、肠杆菌增加但幅度小于双歧杆菌、乳杆菌的增幅，产气荚膜梭菌减少或无变化；B双歧杆菌、乳杆菌明显增加而产气荚膜梭菌减少或无变化、肠球菌、肠杆菌无变化。上两项中一项符合可判定有改善胃肠道菌群当前123页，总共147页。1243.润肠通便功能（1）试验项目•

动物试验：体重、小肠吸收实验(小肠推进速度)、排便时间、粪便重量或粒数、粪便性状。•

（2）试验原则•①制造便秘动物模型，与正常对照动物一起实验。•②不得引起动物腹泻。•

（3）结果判定•

动物实验:粪便重量或粒数明显增加，小肠吸收实验、排便时间一项阳性，检测结果判定为有润肠通便功能。当前124页，总共147页。1254.保护胃粘膜功能（1）试验项目•①动物试验•

胃粘膜损伤情况（损伤面积、溃疡情况）。•②人体试验•

胃部症状、体征、X线钡餐或胃镜检查胃粘膜情况。（2）试验原则•①人体试验为必测项目。•②人体试验还可加测一般健康状况指标。当前125页，总共147页。126（3）结果判定①动物试验•

胃粘膜损伤情况有明显改善，判定为阳性。②人体试食试验•

胃部症状、体征明显改善，胃粘膜损伤症状好转，可判定为有保护胃粘膜功能。当前126页，总共147页。127（十五）改善睡眠1.试验项目•

动物试验:•①体重。•②睡眠时间。•③睡眠发生率。•④睡眠潜伏期。•⑤观察指标:给被检样品在阈上剂量有催眠作用下是否延长睡眠时间;在阈下剂量作用下是否加快入睡时间。当前127页，总共147页。128•2.试验原则•(1)体重及另三项为必测项目。•(2)观测被检样品对催眠剂(巴比妥或戊巴比妥)在阈上或阈下剂量时的催眠作用。•3.结果判定•

体重以外三项检测项目中两项为阳性，检测结果判定为有改善睡眠功能。当前128页，总共147页。129（十六）改善营养性贫血•1.试验项目•

（1）动物试验（所列项目均为必测项目）•①体重•②血红蛋白•③红细胞压积•④血清铁蛋白•⑤红细胞游离原卟啉•⑥组织细胞铁•

（2）人体试验•①体重•②血红蛋白•③红细胞压积•④血清铁蛋白当前129页，总共147页。130•2.试验原则•(1)所列项目均为必测项目。•(2)人体可加测一般健康指标。•(3)贫血:按现行临床标准诊断。•3.结果判定•（1）动物实验• ②项阳性③④⑤⑥四项中任一项阳性，检测结果判定为阳性。•（2）人体实验• ②项阳性③④⑤四项中任一项阳性，结果判定为有改善营养性贫血功能。当前130页，总共147页。131（十七）对化学性肝损伤有保护作用

•1.试验项目•（1）动物试验• ①体重•②谷丙转氨酶(ALT)•③谷草转氨酶(AST)• ④肝组织病理•2.试验原则•(1)所列项目均为必测项目。•(2)还可加测肝中丙二醛、GSH、甘油三酯。•3.结果判定肝组织病理阳性，②、③项中任一项阳性，检测结果判定为具有对化学性肝损伤的保护作用.当前131页，总共147页。132（十八）促进泌乳•1.试验项目•（1）动物实验：以下所列项目均为必测项目• ①泌乳量。• ②仔鼠的发育状况如：体重与身长。•（2）人体试食试验• ①泌乳量。• ②母乳质量：乳汁蛋白质含量、脂肪含量。• ③婴儿生长发育状况观察。当前132页，总共147页。133•2.试验原则•(1)所列项目均为必测项目。•(2)人体试验还可选用母体乳房感觉、乳儿其他发育指标、乳汁质量指标。•3.结果判定•（1）动物试验•

泌乳量增加、与对照组相比仔鼠体重、身长增加明显