DB11-T1804-2020实验动物繁育与遗传监测

ICS65.020.30CCSB44

DB11北 京 市 地 方 标 准DB11/T1804—2020DB11/T828.3—2011，DB11/T1053.3—2013，DB11/T1461.1—2017，DB11/T1461.2—2017，DB11/T1461.3—2017，DB11/T1461.4—2018，DB11/T1461.5—2018实验动物繁育与遗传监测Laboratoryanimal—Breedingandgeneticmonitoring2020-12-24发布 2021-04-01实施北京市市场监督管理局 发布DB11/T1804—2020目 次前言 II1范引文件 1语定义 1略语 2传类命原则 2殖4传5附录A（范） 实动物星DNA标遗检测8附录B（范） 实斑鱼SNP遗标的测方法 26附录C（范） MHC倍型验和验直测序测29参考34IDB11/T1804—2020前 言本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分:标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。DB11/T3DB11/T1053.3—2013《实验用鱼第3DB11/T1461.1—2017部分:DB11/T1461.2—20172DB11/T1461.3—2017《实验动物遗传质量控制第3部分:实验用羊》、DB11/T1461.4—2018《实验动物繁育与遗传监测第4部分:实验用狨猴》、DB11/T1461.5—2018《实验动物繁育与遗传监测第5部分:实验用长爪沙鼠》，除结构调整和编辑性改动外，主要技术变化如下：a)删除了“实验鱼命名原则”相关内容（见DB11/T1053.3—2013的4.2）；b)增加了“实验雪貂、实验猫、实验鸡、实验鸭、实验鹅、实验鸽繁育与遗传监测”相关内容（见5、6、7、附录A、附录C）。本文件由北京市科学技术委员会提出并归口。本文件由北京市科学技术委员会组织实施。,本文件及其所代替文件的历次版本发布情况为：DB11/T828.3—2011、DB11/T1053.3—2013、DB11/T1461.1—2017DB11/T1461.2—2017DB11/T1461.3—2017、DB11/T1461.4—2018DB11/T1461.5—2018；——本次为第一次修订。IIDB11/T1804—2020实验动物繁育与遗传监测范围本文件规定了实验动物的遗传分类及命名原则、繁殖方法和遗传检测。）（GB/T2416 GB/T3157 GB14923 实动物 乳类验物遗质控制GB/T19166中国西门塔尔牛GB/T19376波尔ft羊种羊GB/T22283长白猪种猪GB/T22284大约克夏猪种猪GB/T22285杜洛克猪种猪GB/T22909小尾寒羊GB/Z34792验物 引种术程NY/T14 NY625 NY/T1339肉牛育肥良好管理规范NY/T1446种公牛饲养管理技术规程NY/T1673畜禽微卫星DNA遗传多样性检测技术规程NY/T1901鸡遗传资源保种场保种技术规范NY/T2662准养场 奶牛NY/T2665准养场 肉羊下列术语和定义适用于本文件。3.1实验物 laboratoryanimal经人工饲育，对其携带的微生物和寄生虫实行控制，遗传背景明确或者来源清楚，用于科学研究、1DB11/T1804—2020教学、生产和检定以及其他科学实验的动物。[来源：GB14925-2010，3.1]3.2实验群 experimentalpopulation以远交方式进行繁殖生产的实验动物群体。3.3封闭群 closedcolony以非近亲交配方式进行繁殖生产，在不从外部引入新个体的条件下，至少连续繁殖4代以上的实验动物种群。3.4近交系 inbredstrain通过近亲交配的繁殖方式培育，近交系数（inbreedingcoefficient）高于99%的实验动物群体。3.5单倍群体 haplotypepopulation通过近亲交配繁殖方式培育出的单倍体基因型一致的实验动物群体。3.6杂交群 hybrids由两个不同近交系杂交产生的后代群体。注：子一代简称F1。缩略语下列缩略语适用于本文件。PCR：聚合酶链式反应（PolymeraseChainReaction）SNP:单核苷酸多态性(SingleNucleotidePolymorphism)STR:短串联重复序列（ShortTandemRepeat）根据不同品种品系动物及个体间遗传差异将实验动物分为实验种群、封闭群、近交系、单倍型群体和杂交群，具体符合表1的要求。表1 实验物传类表实验动物群体遗传分类实验长白猪实验种群实验大约克夏猪2DB11/T1804—2020表1 实动遗分表（）实验动物群体遗传分类实验杜洛克猪实验种群实验中国荷斯坦牛实验西门塔尔牛实验波尔ft羊实验小尾寒羊实验东北细毛羊实验狨猴实验猫实验雪貂实验长爪沙鼠封闭群实验鸡实验鸭实验鹅实验鸽实验小型猪实验斑马鱼实验剑尾鱼实验小型猪近交系实验斑马鱼实验剑尾鱼实验鸡单倍型群体实验鸭在原有的品种品系名称前面加上实验，如实验长白猪。封闭群由2～4近交系以大写英文字母或大写英文字母加阿拉伯数字命名，符号应简短。以单倍体基因型英文名称（或缩写）加英文字母和阿拉伯数字命名，符号应简短。杂交群3DB11/T1804—2020以雌性亲代名称在前，雄性亲代名称在后，二者之间以符号“Í”相连。将以上部分用括号括起，在其后表明杂交代数，以F1……Fn表示。引种选择双亲健康、无遗传疾病、繁殖性能好、体貌符合品种特征的动物作为种用动物。实验猪按照NY625的规定进行。实验西门塔尔牛按照NY/T1339和NY/T1446规定执行，实验中国荷斯坦牛按照NY/T14和NY/T2662的规定进行。实验羊应按照GB14923和NY/T2665的规定进行。实验狨猴和雪貂应按GB14923的规定进行。实验猫按照雌雄5:1以上比例进行繁殖。封闭群引种作为繁殖用种子的封闭群动物应三代以内无共同亲代并符合GB/Z34792对封闭群种用动物的要求。封闭群实验长爪沙鼠和实验鸽引种数量不少于25对。封闭群实验小型猪引种数量不少于13对（循环交配方式繁殖）或25对（随机交配方式繁殖）。封闭群实验鱼（斑马鱼和剑尾鱼）引种数目不少于100尾。实验鸡、实验鸭和实验鹅引种规模按照NY/T1901执行。其他封闭群实验动物引种规模按照GB14923规定执行。封闭群实验小型猪、实验长爪沙鼠和实验鸽繁殖方法按照GB14923的规定执行。实验鸡、实验鸭、实验鹅应按照NY/T1901的规定进行。近交系引种作为繁殖用种子的近交系动物应符合GB/Z34792对近交系种用动物的要求。（foundationstock）（pedigreeexpansionstock）（productionGB14923引种4DB11/T1804—2020作为繁殖用种子的单倍型群体动物按照GB/Z34792的规定执行。以全同胞或半同胞兄妹交配方式进行。杂交群将不同品系实验动物的亲代雌性与亲代雄性杂交，即可得到F1实验动物。遗传满足以下要求：——体貌符合品种特征；——群体遗传符合品种特征；——遗传质量检测合格。每12个月至少进行一次检测。抽样从每个种群中随机抽取非同窝成年实验动物的血液或其他组织，雌雄各半。抽样数量按照表2规定执行。表2 实验群封群传测抽数量群体大小（只/头/羽）抽样数量（只/头/羽）＜100≥15≥100≥30基础群留种动物的双亲均应进行遗传检测；各生产群体采取随机抽取非同窝成年动物雌雄各半，抽样数量按照表3规定执行。表3 近交实动遗检抽样群体大小（只/头/羽/尾）抽样数量（只/头/羽/尾）＜100≥6≥100≥群体数量×6%5DB11/T1804—2020DNASNP表4 遗传测法用验物群体实验动物群体遗传分类检测方法执行标准或方法实验长白猪实验种群群体遗传结构评估按照GB22283的规定执行实验大约克夏猪按照GB22284的规定执行实验杜洛克猪按照GB22285的规定执行实验中国荷斯坦牛按照GB/T3157的规定执行实验西门塔尔牛按照GB19166的规定执行实验波尔ft羊按照GB19376的规定执行实验小尾寒羊按照GB/T22909的规定执行实验东北细毛羊按照GB/T2416的规定执行实验狨猴微卫星DNA标记检测法按照附录A的规定执行实验猫实验雪貂实验长爪沙鼠封闭群实验鸡实验鸭实验鹅实验鸽实验小型猪实验斑马鱼实验剑尾鱼实验小型猪近交系实验斑马鱼SNP分子标记检测法按照附录B的规定执行实验剑尾鱼实验鸡单倍型群体直接测序检测法按照附录C的规定执行实验鸭当实验猪、实验牛、实验羊体貌特征与品种品系特征相符合时，判定合格，否则判定不合格。DNA实验狨猴、实验猫和实验雪貂适用于微卫星DNA标记检测法。6DB11/T1804—2020（chi-squaretest）实验雪貂采用群体平均杂合度进行评价，当群体平均杂合度在0.5～0.7时，该群体判为合格，否则判为不合格。封闭群实验长爪沙鼠、实验鸡、实验鸭、实验鹅、实验鹅、实验小型猪和实验鱼（斑马鱼和剑尾鱼）采用微卫星DNA标记检测法。0.5～0.7单倍型实验鸡和实验鸭采用聚合酶链式反应（PCR）产物直接测序法。单倍型采用单倍基因型序列进行评价，当测定序列与参考序列一致率为100%时，该群体判为合格，否则判为不合格。DNA近交系实验小型猪采用微卫星DNA标记检测法。近交系实验小型猪采用微卫星DNA品系特征进行评价，当检测位点符合品系的特征时，该群体判为合格，否则判为不合格。SNP近交系实验鱼采用SNP分子标记检测法。SNP7DB11/T1804—2020附 录 A（规范性）实验动物微卫星DNA标记遗传检测方法DNA基因组DNA提取方法按照NY/T1673的规定执行。25个和10A.1表A.1 实验型微星点引物列退温、位基数等基分范围位点引物序列(5´～3´)所在染色体Mg2+浓度（mM）退火温度(℃)等位基因数等位基因范围适用群体SW974GGTGAAGTTTTTGCTTTGAACCGAAAGAAATCCAAATCCAAACC12.05817129～175封闭群S0091TCTACTCCAGGAGATAAGCCAGATCAGTGACTCCATGCACAGTTATGA21.5551496～174封闭群SW240AGAAATTAGTGCCTCAAATTGGAAACCATTAAGTCCCTAGCAAA21.5581192～114封闭群SW1066GCAGGATGAACCACCCTGCTCTTGAGGCAACCTGCTG32.06019166～214封闭群SW1089TTTTCCCCTTCACTCACCCGATCAAAGTCCCTTACTCCGG41.55810142～190封闭群S0005TCCTTCCCTCCTGGTAACTAGCACTTCCTGATTCTGGGTA52.05411204～244封闭群SW1057TCCCCTGTTGTACAGATTGATGTCCAATTCCAAGTTCCACTAGC62.05814142～191封闭群SW632TGGGTTGAAAGATTTCCCAAGGAGTCAGTACTTTGGCA72.0549148～173封闭群OPNCCAATCCTATTCACGAAAAAGCCAACCCACTTGCTCCCAC82.05912138～170封闭群SW29AGGGTGGCTAAAAAAGAAAAGGATCAAATCCTTACCTCTGCAGC82.06112133～187封闭群SW911CTCAGTTCTTTGGGACTGAACCCATCTGTGGAAAAAAAAAGCC92.06014151～178封闭群8DB11/T1804—2020表A.1 验型微位点引序、火度、位因及位因分范（）位点引物序列(5´～3´)所在染色体Mg2+浓度（mM）退火温度(℃)等位基因数等位基因范围适用群体SW511AAGCAGGAATCCCTGCATCCCCAGCCACCAGTCTGAC91.56212161～196封闭群SWr158TCCAATTCAACTCCTGGCTCGAATGTGCACATACCACATGC102.06018158～200封闭群SW951TTTCACAACTCTGGCACCAGGATCGTGCCCAAATGGAC101.55814108～142封闭群SW271TTCCAGTGGCTTTCTGTGCCATTCATTCCCAGTGAAACTTG111.55813111～144封闭群S0386TCCTGGGTCTTATTTTCTATTTTTATCTCCAACAGTAT112.04812155～178封闭群S0068CCTTCAACCTTTGAGCAAGAACAGTGGTCTCTCTCCCTCTTGCT132.06210210～256封闭群SWr1008ACAGCCACCAACAGTGTTTGGAACTTCCATATGCTGCAAGTG132.0621698～256封闭群S0007TTACTTCTTGGATCATGTCGTCCCTCCTCATAATTTCTG142.05415142～192封闭群SW857TGAGAGGTCAGTTACAGAAGACCGATCCTCCTCCAAATCCCAT142.05816129～173封闭群SWr312ATCCGTGCGTGTGTGCATCTGGTGGCTACAGTTCCGAT151.56411116～136封闭群SW81gatctggtcctgcacagggGGGGCTCTCAGGAAGGAG161.5608128～144封闭群SWr1120CAAATGGAACCCATTACAGTCCACTCCTAGCCCAGGAGCTTC171.56011147～178封闭群S0062AAGATCATTTAGTCAAGGTCACAGTCTGATAGGGAACATAGGATAAAT182.05612144～204封闭群S0218GTGTAGGCTGGCGGTTGTCCCTGAAACCTAAAGCAAAGX1.55411158～196封闭群CGAATAGACATTATGTAAGTTGCTGATGAACTTTCACATCCCTAAGGTCGT1q2.55512250～320近交系SW240AGAAATTAGTGCCTCAAATTGGAAACCATTAAGTCCCTAGCAAA2P1.555896～115近交系SW72ATCAGAACAGTGCGCCGTGTTTGAAAATGGGGTGTTTCC3P1.5558100～116近交系S0005TCCTTCCCTCCTGGTAACTAGCACTTCCTGATTCTGGGTA5q3.05510205～248近交系S0090CCAAGACTGCCTTGTAGGTGAATAGCTATCAAGTATTGTACCATTAGG12q1.5554244～251近交系9DB11/T1804—2020表A.1 验型微位点引序、火度、位因及位因分范（）位点引物序列(5´～3´)所在染色体Mg2+浓度（mM）退火温度(℃)等位基因数等位基因范围适用群体SW769GGTATGACCAAAAGTCCTGGGTCTGCTATGTGGGAAGAATGC133.0557106～140近交系SW857TGAGAGGTCAGTTACAGAAGACCGATCCTCCTCCAAATCCCAT141.5556144～160近交系S0355TCTGGCTCCTACACTCCTTCTTGATGGTTTGGGTGGGTGCTGAAAAATAGGA153.05514243～277近交系SW24CTTTGGGTGGAGTGTGTGCATCCAAATGCTGCAAGCG171.555896～121近交系S0218GTGTAGGCTGGCGGTTGTCCCTGAACCCTAAAGCAAAGX1.5558164～184近交系20A.2表A.2 实验猴卫位的物序、火度等基因及位因布位点引物序列（5´～3´）退火温度（℃）最大等位基因数等位基因分布范围CAJA1GAAGACGGGGGCGTAAATATGTGGTGGCTCATACCTGAA609386～402CAJA6GAGCACCAAGATTGGCATTTCCAATACACATCGGCTTTGA606235～243CAJA10ACCCTACATTGCCAAATTGCGCCTCTTCTGAGGGAAGTGA606198～208CAJA11CGAAAGTGTGCTCAACAGGAAAGGTGGGATTCTGAAAGCA605254～262CAJA13AGCACATGAACACCCAGGTTAGTGAAAACAGGCTGGGAGA606378～390CAJA14AGCACATGAACACCCAGGTTAGTGAAAACAGGCTGGGAGA606216～232CAJA17GGGCACTCCAAGGTCAGTAATTGCCCCCTGCTTATTGTAG6010382～400CAJA18ACTTGCAGGCCAGTGTTCTTTGGACAGCTGAGGTTTCCTT638315～329D10qham51CGGGAATTCAAAGGCGTTCTAGGAGGATTTCGCATTTGGG606103～117Ham157CAGCCAACATGCTTCTCAGTGGTGGAATAAATCAGGCTACCAG606193～205Ham60TGCTCTAGAGGTTCCACTCTGGGCATGTTACCTAACCTCTCTG588139～16510DB11/T1804—2020表A.2 验猴卫点的物列退温、等基数等基分布围续）位点引物序列（5´～3´）退火温度（℃）最大等位基因数等位基因分布范围Ham65TGAGAACGACTGCTCTAGGTTGGAAGTGGCTTCATTCCTG5810177～201Ham181CAATGAGATGTGTCCAAGTGAGCCAAACACCCAATATGCAGT587213～239Ham184GGCGCAGCTCATCTCTTCACCCTCCCCAGCATCTTCAAGAC637150～172Ham125GTGGGTAAATGCTGCCATCTGTTTCAACTCCTGCGTCTAGTC598187～201Ham101AGACCAAGCATCTTCTTGGACCACCTTTAAACTGCTGTGGTTG596281～297Ham61CAAAGATGCTTGGGGATGGAAAGATCTTGCAGGGCGTAAG6110263～287Ham32GCCCAAATCCTGTTTGACACCCACCTAGATCATCGAGAGTAG587183～199Ham100GACCAACTCCAAAGCTAGCAGGTAACATGCTCTCGACCTT588244～262Ham26GCAAATTCGTGAAGCATTCCAACAGTTGGATGAGTTCCAG598182～20628基因数、等位基因范围和退火温度按照表A.3的规定执行。表A.3 实验爪鼠卫位的引序、火度等位因及位因布范围位点引物序列（5´～3´）退火温度（℃）最大等位基因数等位基因分布范围AF200942CAGGCACCCCCAGTTTGTCTACACAGGCTGAGGATGT5415180～215AF200943GGCTCCTGATTCTACATTTCTCAACCATTGGCAACTCTC5717154～181AF200944GCTGGGCTTTAATGTTTATTTGGTGGCTCACACTTTCTGT5419113～134AF200946TTTCTGGGGTCTCTTTCTCTCCCATTCTGCAAGACTCCTCT5728195～242AF200945AGTCCCTATTACATCCACAAGTTATCCTGCAAAGCCTAAG5712166～186AF200941TGGGTCCTTTGGAAGATGGCTTAAAATGAATCACTTA5524115～153AF200947GACAGAGTGGGAGGGGTATGTTGGCAAGTTTGGTTTGTTTGA5517188～21211DB11/T1804—2020表A.3 验爪鼠星位的物列退温度等基数等基因布围续）位点引物序列（5´～3´）退火温度（℃）最大等位基因数等位基因分布范围D16Mit7CTGCCACCCCTGAACCATTACTACAAGATGTGGGGCATGA52.615480～529D16Mit26CAGGAATAAAGTATAATGGGGTGCCCCATGATCAGTTGGGTTTT49.19207～266D1Mit362TGTGTGACTGCTTGGAAGATGCTGAGTCCCTAAAGTTGTCCTTG50.016476～504D8Mit184GTTTTTCTCAGAAGAATGCAATATACCTGAGAAGAATGAGGAATTTGTCC48.111196～229D7Mit33TCTGAAGTTTGAATGGTTGTGGTTTCAAAATCGTGTCATTTTGC47.315376～394D6Mit37AAAGAATTGCACATCCACTGGTGCCCAGGATGTTTAAGAGG47.014246～265D5Mit31TCAGGGCTCTCTAAGGGACAACTATGCAGCCACCAAATCC53.19318～350D12Mit201CCACTGGATGGCAACAGACTATGTGTTTCAAAACCACACTCG53.118245～283D2Mit22GCTCCCTTTCCTCTTGAACCGGGCCCTTATTCTATCTCCC49.19173～192D15Mit124AGGAGAGAACCAACTGCTGCGGCCAGTGATGACTTTATAATGC59.817232～258D11Mit36CCAGAACTTTTGCTGCTTCCGTGAGCCCTAGGTCCAGTGA58.715234～256D7Mit71CCACCTGGAATACATGTAACCCTAAGATCCAAGAGATGGGTTAAGC49.111165～200D2Mit76CTCAAGTCTCACTTCTCTGCACAACACCCAAGGTTGACCTCTG47.319281～328D3Mit130AACACATGAAACGTGTGCGTTGATAGGCATGCTTAAGCCC50.611213～251D19Mit1AATCCTTGTTCACTCTATCAAGGCCATGAAGAGTCCAGTAGAAACCTC49.115133～165D11Mit35AGTAACATGGAACATCGACGGTGCTCAGCTCTGGAGTGCTA48.113287～307D17Mit38CCTCTGAGGAGTAACCAAGCCCACAGAGTTCTACCTCCAACCC52.614195～251DXMit17CCTGTTTGGGCACCTAGATTTAATAACCCATGTTTTCTGTGGG48.19234～251D8Mit56ACACTCAGAGACCATGAGTACACCGAGTTCACTACCCACAAGTCTCC50.69100～12612DB11/T1804—2020表A.3 验爪鼠星位的物列退温度等基数等基因布围续）位点引物序列（5´～3´）退火温度（℃）最大等位基因数等位基因分布范围D10Mit66TCTCCTTGGAATTCACAGCCGACATTCCTTAAGAGAGACAGTCC54.714272～298D13Mit1TCATTCAACATTCTGTCAATCGCACAACAAGGTTAACCTCTAGACA49.014104～13221A.4表A.4 实验貂卫位的物序、位因及位基分范围位点引物序列（5´～3´）等位基因分布范围重复等位基因数MpuA4w1CACTTCCTCCCATGGACACTCAAAGTCTCCCACCCTATGC152～174(AC)23MpuA10w4TGGCCTATATGTGCAGATGACTGTTTGTCTTGTACCCTCTGACC154～158(AC)13(AC)7MpuA121w7ACTGCCATCAGGTCATCTAGGGGGTAGACACCTGGCTCAAG105～129(CA)14MpuA129w7GGCCTCTGAACACATAGTTGAAGTACAGAATGGAAGGATCTG197～205(CA)13MpuA212w1CCCTATGAGGGCATGTTTGTCTGCCATGTTTCCACTGGT137～153(TG)13MpuA223w3GAAGACAGCACCCCAGAGTCTGGTTGCCAAGAACTAGCAG213～239(GT)19MpuA229w4GGGTAGGACGTGCTTAAAGATGAGCCCTCAAAGCCTCTTCTC107～139(GT)11(TG)7MpuA231w6CCTCTGGTAACCATCTGTTTGTCTTCAAGATGTTCAGTGTGGA182～224(GT)15MpuB1w4TCCACTACCTGGCCTCATTCACCTCAGGCTCCACTCTCAG178～190(CT)15(CA)8(AC)5(AC)11MpuB6w2TGGGTGTAGAGCATGTTTGGTGCCTATTCCAGGTACCTCAT156～164(TC)18MpuB9w7CGTTACCAACTGTGGCTGTGTGCCTGGGCCTGTGATTA180～192(GA)18MpuB12w3AGTCGACAGATGAGTCCACGAAGTGTCACACATGGCAGGATCT175～179(AG)11(AC)8(AC)7MpuB112w5CCATTACAAGTGCTTGGAGACATGGAACATGCTGGAAATTGT161～165(AG)14MpuB202w3TCTCCTCCTCCTCCTCCTTCATGAGATTGACCGTGCATCA164～168(CTC)5(GA)1413DB11/T1804—2020表A.4 验貂卫点的物列等基数及位因布围续）位点引物序列（5´～3´）等位基因分布范围重复等位基因数MpuB209w2TGCTTCTCCCTCTGACTGCTCCGCCCAAGTATCCCTAAAT119～125(CT)16MpuB217w3TTCCCTGCTTGTGCTCTCTTTGGGGTAAGGGTAGGTATGC126～144(TC)5(TC)17MpuC4w7CTGGCCCTATCACATACATATTCAGGAAGTATACTCATGCCTGCAA147～163(TCCA)9MpuC102w3GGGTGGATGGGTGAGTAGGTACCTTCCCACATTCCATCCTT119～135(TGGA)7MpuD207w5CAGGTGAAGAAGTCCCTCTGTCTTGGTTCTGACCATTTGGA188～214(CT)10(ATAG)7MpuD209w4GAACAGCAAGTAGTCCAACTCTCAGTTGGATCCTTTCCATCACC165～185(TATC)7MpuD231w2TTTGGGTTCCACAGTAGGTGATGCTCTCAATCCATGCTCA132～160(GATA)937退火温度按照表A.5的规定执行。表A.5 实验微星点扩条件染体位点引物序列(5´～3´)染色体Mg2+浓度（mM）退火温度(℃)FCA123CTTCACACTGCGAGAGGACTTCTGACAGGCTCCAGGTTACTA11.557FCA1062CTTCACACTGCGAGAGGACTTCTGACAGGCTCCAGGTTACTA11.558FCA522GTTTGAAATTATGGCTTCCCAACTTCTGGAGAACAAGAGGGAAAAGTB11.554FCA275TCACTCCTGGACTTAACCATCAGTGCTATTGACGAAGGGGCAGB21.557FCA848CTCCTTCACCAAAGGCTGGATGGACATTCTGGAAATGCGGAGB31.557FCA664AGAAAAATGACTACCGACATGGTTGAGTGCGGCTACTATCTGGGC11.556FCA346AATGCCTAGGTAGCACTGTCCCCCAAGTCACCCTCCTGTTGC21.558FCA920CTAGTTGAAGGGGCCAGCACTCTGTCCAGCCCATAGGTGTD11.559FCA221TGGCCCATTAAGCAAGAAGGTTGGCTATGCCAGCAGTTGAAD31.55714DB11/T1804—2020表A.5 验微星的扩条和色分（续）位点引物序列(5´～3´)染色体Mg2+浓度（mM）退火温度(℃)FCA1014CTGGCAAGAAGTCCACTGGGCATGGCTCCTGAGGTCATGTE31.558FCA1015CTCCAGTGCCCATACGTTGTTGGCCACAAAGATGGTTGTTCE31.557FCA1016GTCACTAAGTGGTGACAGAGCAAACGTTTGAAAGGTGTGCCTF11.556FCA1030CGCCCGCAAAAAGACTCAAGGGACGCCCACTAGCCAAATAF11.558FCA1315CCTGCATCAGTTGATTCCTTGTGGACCATCAGAATGCAGCTCF21.558FCA823AGGGTGTGCTAGAACTAGCTGGCATTTAGAGGTTCAGGACTGGGB11.558FCA770TCAAGAGTCTTTGCTCAAGGGTTTACTTAGGACTGACAGGGCAA11.556FCA559GCCAAAATGTTCAAGAGTGGTTTTGGCTTGATGAGCATCAB11.555FCA976TCCATTTACCTGGGAAATTCCACCCTCATGTCTTGGCAATCD41.555FCA1240TCCTGATGTGGCAGTTAAACCGCATGCCTTGAACCTTTCATD21.558FCA176GGAAACTTGGAAAGCAAAACCTCCACAGTTGGAGTTCTTAAGGA11.558FCA045TGAAGAAAAGAATCAGGCTGTGGTATGAGCATCTCTGTGTTCGTGD41.558FCA723TGAAGGCTAAGGCACGATAGACGGAAAGATACAGGAAGGGTAA11.558FCA085GGTCCTCACGTTTTCCTATGTCTGTATGAGATGCGGTE21.558FCA084TAGGTGAATGTTGGGATTTATGGAACTGAAGACCAAATTGATGAGA11.555FCA210TGAGCCACCTAGGCACTCTTAGAAGCATCCAGTGACAATGGB41.559FCA453AATTCTGAGAACAAGCTGAGGGATCCTCTATGGCAGGACTTTGA11.560FCA672AAGTTGCTTGCACACACTGCTCCAAGAGCCTTTTCAGTTAGGF21.560FCA1056GGTGTGAGGGCCTATTCTGAGGATGTCTCCCTTGACTGGTB41.55815DB11/T1804—2020表A.5 验微星的扩条和色分（续）位点引物序列(5´～3´)染色体Mg2+浓度（mM）退火温度(℃)FCA1239AAAAGCCCTGACACCCAAGCTTGACCTTAATTGCTCATTGGD21.558FCA700CCCTTAAAATCGCAGCTCTGAATCCAAGGAAAACAGGCCTB11.558FCA742TCAATGTCTTGACAACGCATAAAGGATTGCATGACCAGGAACD41.556FCA678TCCCTCAGCAATCTCCAGAAGAGGGAGCTAGCTGAAATTGTTA11.556FCA096CACGCCAAACTCTATGCTGACAATGTGCCGTCCAAGAACE21.558FCA075ATGCTAATCAGTGGCATTTGGGAACAAAAATTCCAGACGTGCE21.558FCA149CCTATCAAAGTTCTCACCAAATCAGTCTCACCATGTGTGGGATGB11.558FCA220CGATGGAAATTGTATCCATGGGAATGAAGGCAGTCACAAACTGF21.558FCA229CAAACTGACAAGCTTAGAGGGCGCAGAAGTCCAATCTCAAAGTCA11.55829A.6表A.6 实验微星点引序列退温、位因数等基分范围位点引物序列（5´～3´）退火温度（℃）最大等位基因数等位基因分布范围MCW0029GTGGACACCCATTTGTACCCTATGCATGCAATTCAGGACCGTGCA63.88139～188ADL0293GTAATCTAGAAACCCCATCTACATACCGCAGTCTTTGTTC53.96106～120ADL0317AGTTGGTTTCAGCCATCCATCCCAGAGCACACTGTCACTG58.58177～219GCT0016TCCAAGGTTCTCCAGTTCGGCATAAGGATAGCAACAG52.26111～148ADL0304GGGGAGGAACTCTGGAAATGCCTCATGCTTCGTGCTTTTT53.97138～161LEI0074GACCTGGTCCTGACATGGGTGGTTTGCTGATTAGCCATCGCG58.56221～243ADL328CACCCATAGCTGTGACTTTGAAAACCGGAATGTGTAACTG53.95107～12016DB11/T1804—2020表A.6 验微星的引序、火度等位因及位因布范（）位点引物序列（5´～3´）退火温度（℃）最大等位基因数等位基因分布范围GGANTEClGCGGGGCCGTTATCAGAGCAAGTGCAGGGCGCTCCTGGT65.07139～194LEI0094*CAGGATGGCTGTTATGCTTCCACACAGTGCAGAGTGGTGCGA56.07176～211MCW0330TGGACCTCATCAGTCTGACAGAATGTTCTCATAGAGTTCCTGC58.56217～287LEI0141CGCATTTGATGCATAACACATGAAGGCAAACTCAGCTGGAACG52.25221～245MCW0087ATTTCTGCAGCCAACTTGGAGCTCAGGCAGTTCTCAAGAACA58.59268～289MCW0347GCTTCCAGATGAGCTCCATGGCACAGCGCTGCAGCAACTG52.03121～149ADL176TTGTGGATTCTGGTGGTAGCTTCTCCCGTAACACTCGTCA58.59183～200ADL0201GCTGAGGATTCAGATAAGACAATGGCYGACGTTTCACAGC58.57111～151GGNCAMZOGTCACTAGGTTAGCAGCATGGCTGGATACAGACCTCGATT56.01234GGAVIRAGAGATGGTGCACGCAACCTCGAGCACTTTCTGGCAGAGA60.7386～89MCW0063GGCTCCAAAAGCTTGTTCTTAGCTGAAAACCAGTAAAGCTTCTTAC53.98116～149ADL185CATGGCAGCTGACTCCAGATAGCGTTACCTGTTCGTTTGC58.59116～142GGMYCCGAGGCGCTCTGCGAGTTTATGGGGACCTCTGGCTCTGAC62.45139～151LEI0094GATCTCACCAGTATGAGCTGCTCTCACACTGTAACACAGTGC53.96250～283GGVITCAGCCATCATTCAGGGCATCTGATGTCCTGAGTGATGCTCA58.5286～90ADL0292CCAAATCAGGCAAAACTTCTAAATGGCCTAAGGATGAGGA58.56110～136GGVITIIG*GGCAGGTTTCTAATGCCTGACCCATCGTTTCAACTGTATG56.02186～189ADL166TGCCAGCCCGTAATCATAGGAAGCACCACGACCCAATCTA58.56131～154MCW0014AAAATATTGGCTCTAGGAACTGTCACCGGAAATGAAGGTAAGACTAGC58.59172～19517DB11/T1804—2020表A.6 验微星的引序、火度等位因及位因布范（）位点引物序列（5´～3´）退火温度（℃）最大等位基因数等位基因分布范围GGCYMA*AGCGAGGCGCTCTGCGAGTTGGGCACCTCTGGCTCTGACC64.65140～153MCW0402ACTGTGCCTAGGACTAGCTGCCTAAGTCTGGGCTCTTCTG56.015141～229STMSGGHU2-1ACTTAATATGTGTGAGGTGGCGTTCTCACAATTGCATTAGC53.92235～23829A.7表A.7 实验微星点引序列退温、位因数等基分范围位点引物序列（5´～3´）退火温度（℃）最大等位基因数等位基因分布范围APL2GATTCAACCTTAGCTATCAGTCTCCCGCTCTTGGCAAATGTCC58.54115～125APL579ATTAGAGCAGGAGTTAGGAGACGCAAGAAGTGGCTTTTTTC557118～227APH09GGATGTTGCCCCACATATTTTTGCCTTGTTTATGAGCCATTA58893～188APH11GGACCTCAGGAAAATCAGTGTAGCAGGCAGAGCAGGAAATA58.52183～185APH18TTCTGGCCTGATAGGTATGAGGAATTGGGTGGTTCATACTGT583179～324AY258ATGTCTGAGTCCTCGGAGCACAATAGATTCCAGATGCTGAA58.1990～161AY264GCAGACTTTTACTTATGACTCCTTAGCCCAGTGAAGCATG58.111112～328AY314CTCATTCCAATTCCTCTGTACAGCATTATTATTTCAGAAGG50.33135～250CAUD001ACAGCTTCAGCAGACTTAGAGCAGAAAGTGTATTAAGGAAG55.52234～390CAUD002CTTCGGTGCCTGTCTTAGCAGCTGCCTGGAGAAGGTCT60.84175～231CAUD004TCCACTTGGTAGACCTTGAGTGGGATTCAGTGAGAAGCCT60.83162～290CAUD005CTGGGTTTGGTGGAGCATAATACTGGCTGCTTCATTGCTG60.83180～30018DB11/T1804—2020表A.7 验微星的引序、火度等位因及位因布范（）位点引物序列（5´～3´）退火温度（℃）最大等位基因数等位基因分布范围CAUD006ATGGTTCTCTGTAGGCAATCTTCTGCTTGGGCTCTTGGA63.58183～248CAUD007ACTTCTCTTGTAGGCATGTCACACCTGTTGCTCCTGCTGT60.86100～208CAUD010GGATGTGTTTTTCATTATTGATAGAGGCATAAATACTCAGTG50.39180～300CAUD011TGCTATCCACCCAATAAGTGCAAAGTTAGCTGGTATCTGC50.36137～222CAUD012ATTGCCTTTCAGTGGAGTTTCCGGCTCTAAACACATGAATG63.59182～286CAUD014CACAACTGACGGCACAAAGTCTGAGTTTTTCCCGCCTCTA58.13136～200CAUD026ACGTCACATCACCCCACAGCTTTGCCTCTGGTGAGGTTC60.89134～196CAUD027AGAAGGCAGGCAAATCAGAGTCCACTCATAAAAACACCCACA665100～180CAUD028TACACCCAAGTTTATTCTGAGACTCTCCAGGGCACTAGG55.58153～220CAUD031AGCATCTGGACTTTTTCTGGACACCCCAGGCTCTGAGATAA51.410140～187CAUD032GAAACCAACTGAAAACGGGCCCTCCTGCGTCCCAATAAG58.1996～206CAUD034TACTGCATATCACTAGAGGATAGGCATACTCGGGTTTAG55.59160～296CAUD035GTGCCTAACCCTGATGGATGCTTATCAGATGGGGCTCGGA63.57174～282CMO211GGATGTTGCCCCACATATTTTTGCCTTGTTTATGAGCCATT557112～205CMO212CTCCACTAGAACACAGACATTCATCTTTGGCATTTTGAAG583186～27214A.819DB11/T1804—2020表A.8 实验微星点引序列退温、位因数等基分范围位点引物序列（5´～3´）退火温度（℃）最大等位基因数等位基因分布范围Ans02TTCTGTGCAGGGGCGAGTTAGGGAACCGATCACGACATG587202～230Ans07GACTGAGGAACTACAATTGACTACAAAGACTACTACTGCCAAG586236～246Ans02TTCTGTGCAGGGGCGAGTTAGGGAACCGATCACGACATG587202～230Ans07GACTGAGGAACTACAATTGACTACAAAGACTACTACTGCCAAG586236～246Ans17ACAAATAACTGGTTCTAAGCACAGAGGACTTCTATTCATAAATA544111～123Ans18GTGTTCTCTGTTTATGATATTACAACAGAATTTGCTTGAAACTGC583229～237CKW47AACTTCTGCACCTAAAAACTGTCATGCTGAGGTAACAGGAATTAAAA626211～221APH13CAACGAGTGACAATGATAAAACAATGATCTCACTCCCAATAG554163～178APH20ACCAGCCTAGCAAGCACTGTGAGGCTTTAGGAGAGATTGAAAAA6013135～155Bcaμ5AGTGTTTCTTTCATCTCCACAAGCAGACCACAATCGGACCACATATTC624197～201Bcaμ8CCCAAGACTCACAAAACCAGAAATATGAAAGAAGAGTTAAACGTGTGCAA587155～164TTUCG1CCCTGCTGGTATACCTGAGTGTCTACACAACAGC583113～115G-Ans25CACTTATTAATGGCACTTGAAAGTTCTCTTGTCACAACTGGA624224～270G-Hhiμ1b¶ATCAAAGGCACAATGTGAAATAGTAAGGGGGCTTCCACC606163～221G-Bcaμ7TAGTTTCTATTTGCACCCAATGGAGTAGTTTCTATTTGCACCCAATGGAG606164～174G-CAUD006ATGGTTCTCTGTAGGCAATCTTCTGCTTGGGCTCTTGG5613152～21016A.920DB11/T1804—2020表A.9 实验微星点引序列退温、位因数等基分范围位点名称引物序列（5′～3′）退火温度（℃）最大等位基因数等位基因分布范围UU-Cli02TGGGCAAGGTACACTTTTAGGTCTTTATGCTCCCCCTTGAGAT614158～170UU-Cli06TTTGAAAAACATGGATTGTGCAATTTGCAGAGGGTGAGTGG564140～145PG5GTTCTTGGTGTTGCATGGATGCAGTTACGAAATGATTGCCAGAAG592262～266C26L9(1265223)CAAAGCTGCTGACGTGAATCAAAGAGACGCTCCATGCAAAAG594467～472UU-Cli14CAGAACGTTTTGTTCTGTTTGGTCTTGCTGCAGTCTTCATCC585265～292C12L1(532572)GTTGTTTGGCTGAGTGGACGTCAACCAGGGGAATTGGCAG623126～136C12L4(906353)GCTGCTGTCTTCTTCATTGGGTTAAAACCTCCCGTCTCCCTG605210～250CliµD11CCAATCCCAAAGAGGATTATACTGTCCTATGGCTGAAGTG58478～98C26L10(1404758)GCTGTCAGGTATCAGCCACAATCAGACCCACGAAAGCTGTAA597211～226C26L4(568923)CAACCCCATGTGGGTGAGACCACCACCACGTGGGACATC636357～432PG4CCCATCTCCTGCCTGATGCCACAGCAGGATGCTGCCTGC644136～170UU-Cli12CGCCAGACTGTATTGTGAGCAGCATGGCTGTTCTTTGAGG619231～265CliμT47ATGTGTGTTTGTGCATGAAGATGAAAGCCTGTTAGTGGAA565183～214CliμD32GAGCCATTTCAGTGAGTGACAGTTTGCAGGAGCGTGTAGAGAAGT606136～158UU-Cli07GCTGCCTGTTACTACCTGAGCCTGGCCATGAAATGAACTCC614277～310C26L1（20390）AGGAGCCTACACTGGGTTTTCTGTAGCTCTGCAATCAGCCT604250～2685A.1021DB11/T1804—2020表A.10 常用验马微星子标的传引物名称位点引物序列（5’～3）品系片段长度（bp）ABTULFWIK本地短尾Z24LG15CACCTTCACGGTGAGTAGCAGTGGAATGGTGTGACTAATGTCA150150150Z928LG18CAGTCCAGGCTGAACATTCAACACCTTCGGCAGTTTTCAC134，94134，126Z1059LG7AACAGGTGACAGAGCACACGGGGAGAGGGCAGGACAATAT150/122150/122Z1265LG6ATATGTGCTGCTCATGATGAGTAACAGACGAAGGGTGAAGGA90~110bp90~110bpZ1637LG8GGCTTTTGGATGAAGGTTGAGCGGAATCACAATGGCAGCAGA143，105133，103Z3725LG3ACTAAATCGCACTTCAGCAGCGGGTGTCCTCACATCAGCTGCA262，256，248248Z3782LG19AATTCTGGGGGGTAATTCTGGCAAGGGGGCTAAACCTTCAACTG200，9017012090Z4299LG5AGGAATGCGCTATGGGACGACACATCTGCCACTGAACCGG370，260，230260，2302860300，260，190Z5223LG15AACAGAGCCGATCTGCCACCAGCACAGCGGAGGAAATAAAGC1781178，150Z9384LG19CCGACTGGAGAAGACCTGAGAGCATAATCAGACAACCGGG134，177，190，134，177，190134，1790134，1790134，177，190，134，177，190PCRPCRPCR总反应体积为15μL,其中含10×PCRbuffer:1.5μL，上下游引物(100pmol/μL)各1μL，4×dNTP100μmol/L:1μL,Taq酶1U:1μL,50ng～100ngDNA:1μL(ddH2O):8.5μL。PCR95℃预变性，4min；94，30s（PCR，30s；35；727min4PCRPCR产物经1.5%的琼脂糖凝胶电泳以及凝胶成像系统拍照。STR扩增产物经过琼脂糖凝胶电泳检测确保扩增出目的片断后，选择分别以FAM、HEX、TAMRA标记的三个位点的扩增产物，以1：3：5体积比混合，取1μL上样进行STR扫描。22DB11/T1804—2020STR扫描结果可出现两种波形：一种为纯合基因型，只有一个主波；另一种为杂合基因型，有两个主波。a,b,c,d等。将所有样本的每个微卫星位点的基因型以ab,bb等形式运用软件的数据文件，计算样品在各微卫星位点上的基因频率、平均观察等位基因数、平均有效等位基因数（Ne）、香隆指数、平均杂合度（H）等。（chi-squaretest）实验雪貂采用群体平均杂合度进行评价，当群体平均杂合度在0.5～0.7时，该群体判为合格，否则判为不合格。封闭群封闭群实验长爪沙鼠、实验鸡、实验鸭、实验鹅、实验鹅、实验小型猪和实验鱼（斑马鱼和剑尾鱼）采用平均杂合度进行评价，当群体平均杂合度在0.5～0.7时，该群体判为合格，否则判为不合格。近交系所有样品检测位点的等位基因都符合品系的特征,按照表A.11～A.13的规定执行，没有新的等位基因出现为合格实验小型猪近交系,否则判为不合格。表A.11 近交五山型近系培过中传量制的卫座及势位基因位点等位基因及频率频率合计CGA片段189199203293频率0.0230.8720.0230.0811.000SW769片段105129频率0.0930.9070.97SW857片段150158频率0.1630.837123DB11/T1804—2020表A.11 近系指型猪交培过中传质控的卫座及优等基（）位点等位基因及频率频率合计S0355片段0.750.138频率1061140.888SW72片段106114频率0.5880.2380.825S0090片段241247频率0.7560.0120.756S0218片段173179181频率0.0120.5470.4190.547SW24片段104频率0.6310.631表A.12 近交广巴小猪培育程遗质控的微星位优等基因位点等位基因及频率频率合计CGA片段271277297频率0.490.2810.2291SW769片段123127频率0.1940.8061SW857片段146154频率0.1460.5730.719S0005片段216226频率0.2230.660.883SW240片段9498104频率0.5310.3330.1150.979S0355片段258260262频率0.0830.4270.4270.854SW72片段110120频率0.6980.0830.781S0090片段241243247249频率0.0320.1170.4890.1170.606S0218片段167173179187频率0.1150.740.1250.0210.854SW24片段102104频率0.750.0210.75表A.13 近交贵小猪育程中传量制微星座及势位位点等位基因及频率频率合计CGA片段271283285305频率0.0110.1360.3640.2950.79524DB11/T1804—2020表A.13近交系贵州小型猪培育过程中遗传质量控制的微卫星座位及优势等位基因（续）位点等位基因及频率频率合计SW769片段105121129133139145频率0.2910.2670.0930.1510.0810.1160.907SW857片段156160166频率0.1670.4520.2020.821S0005片段202204214频率0.5580.2440.1860.988SW240片段96102频率0.2270.1820.409S0355片段252254272274频率0.1830.0980.110.3410.732SW72片段102112118频率0.170.6250.0450.841S0090片段247249253频率0.0450.580.3750.955S0218片段181187195197频率0.1510.1860.0230.50.709SW24片段100104108112频率0.1140.1140.2160.1360.466实验鱼近交系实验鱼（斑马鱼和剑尾鱼）检测结果判定按照表A.14的规定执行。表A.14 近交实鱼测果检测结果判 断处 理与标准参考位点完全一致未发现遗传变异，遗传质量合格有一个位点的分子与标准参考位点不一致可疑增加检测位点数目和增加检测方法后名为同源突变系两个或两个以上位点的标记基因与标准参考位点不一致不合格淘汰，重新引种根据判定结果对实验动物群体出具遗传质量检测报告。25DB11/T1804—2020附 录 B（规范性）实验斑马鱼SNP遗传标记的检测方法DNA基因组DNA提取方法按照NY/T1673的规定执行。PCR按照附录A中A.3.1的方法进行。SNP取10μLPCR产物用25μL的水稀释，并用枪头吹打混匀。然后取1μL为模板，用表B.1中的引物进行PCR扩增和产物测序，最后使用PolyPhred程序软件分析SNP标记的测定结果。SNP选择位于近交系斑马鱼25对染色体、剑尾鱼24对染色体上的10个以上位点，作为遗传检测的SNP标记。SNP分子标记的名称及常用近交系斑马鱼的SNP分子标记的特征符合表B.1的要求。表B.1常用实验斑马鱼品系SNP分子标记位点染色体：位点SNPIDABTU引物（5´～3´）dbSNPID01:018595529DS043503-5TCGGCGATTCCTACAATTCTTCGAAAGTCCTGTGTTGAAGGTGss4983890601:049159399DS036502-3GCGGCACATCGTCATATAATGCACAATACTGGAATGACACTGGss4983864002:025012321DS042554AGGAAGTCCATGTTGGCATCTACAGTGTTGAGAAACGGTCAGGss4982492802:027720831DS040180-3TGAACACTGGCACGTACACAAGGGGAATCGTGAACTCGTAACss4983878803:048073042DS032197-8ATTCATTGTAATAGCAGTAATGACGTGCAATGTTTGTTTCAGACCss4983845403:048073049DS032197-7GATCATTGTAATAGCAGTAATGACGTGCAATGTTTGTTTCAGACCss4983845304:003254191DS036864-20TGCTGCTGTTACTGGGTCAGTGACTGCATGATAATGCCAAACss4983868326DB11/T1804—2020表B.1 用验马品系SNP子记点）染色体：位点SNPIDABTU引物（5´～3´）dbSNPID04:003254203DS036864-19GACTGCTGTTACTGGGTCAGTGACTGCATGATAATGCCAAACss4983868205:015736030DS002778-2TCAAACGTGGCAGAAATGAAACCCCATTTGTAGAAGAATCCAGss4983773805:025044903DS009184-1TCTTGCATTAGAGCCTTATCCTGTGTTCTTATGCTCTGTGACTGss4983783906:001111132DS014169-1TGGAGCAGCGATACTCACACAGTTCACTAGGTAAGACTCTTGAAGCss4983792906:024875905DS032220-5CTTCTCTTTAATGTTGGACTGCTGCCTTTAATCCATAGCCTTAGCss4983847007:018909158DS033959CTGACACATACCTGGCACTCGTCTCCTGAGAAGGATTCCACss4981668407:019711091DS023709CTCAGTTGAGAAGGGAGAAACGGCTGTTGGGTTGACTTGCss4980684708:010818674DS023589-1GAAGGAAAGACACCATCACTGAGCTTTAGGCGCAATAACAAGGss4983812608:026974745DS030842-1ATTATCTCGGTTAACGGGAGTGGCAGGGATATTTGACTTGAATGss4983838909:050927124DS048415-2GATTCCCAAATACTGAATCTGCGGATCTGTTCATCGAGGTTCss4983896410:012029287DS027483-3TGCATTTAATAAAGGAATCACTACTCTTAGTCAGTTTACTAACCTTGCTTTss4983827710:012029405DS027483-4TCCATTTAATAAAGGAATCACTACTCTTAGTCAGTTTACTAACCTTGCTTTss4983827811:019554122DS025015-3AGAAAGAGCGTCAAGATGTGTGGCCTAACAGTACCATTCTTGGss4983817311:026314774DS033040CTATCTCGACAACTCTGCTTCCAGTCCAGCAGAAATTGCACss4981581020:031443053DS053166-2GATTAGGACACTCCACCATGAGTGCATGAAGACAGAGCAGAGss4983906721:013840265DS028819-10GAGTCCTTCCTGAAGCACTGAGTGTGAAAGGTTTTACTGTATTTCss4983832921:017891301DS023849-2CATCTGACACAGGAAATAGTATGGCGAATCATATGGGAGTCGTTss4983813822:002853759DS036535-2GTAACTATGAGGCAGTCCGTTCAACTGATCCGTGAGTTGTCCss4983864722:022530591DS020970-1ATAAGCTGCTCATGTCACTCGGGGACAGGGTACAGGTAAGGss4983804427DB11/T1804—2020表B.1 用验马品系SNP子记点）染色体：位点SNPIDABTU引物（5´～3´）dbSNPID23:009386243DS022349-1TCGATGAGGACATGAGCTTGGTGACCAAACACCCTTAAATGss4983809923:009386361DS022349-7ATGATGAGGACATGAGCTTGGTGACCAAACACCCTTAAATGss4983810524:017922488DS055282-4AGGAGACGGGCACTGAACACGGATGTTTGTCACCCAAAGss4983913124:017922536DS055282-5AGGAGACGGGCACTGAACACGGATGTTTGTCACCCAAAGss4983913225:033544463DS024735-2AGTCTTGACATCGGTGGTGAGTTGTATTGGTGCTGTGACCss49838169按照表A.14的规定执行。根据判定结果对实验动物群体出具遗传质量检测报告。28DB11/T1804—2020附 录 C（规范性）MHC单倍型实验鸡和实验鸭直接测序检测方法DNA基因组DNA提取方法按照NY/T1673的规定执行。PCRC.1C.2表C.1PCR扩增片段引物引物序列扩增片段退火温度(℃)片段（1）1F5′-CCGTGGGATCCTCAGACC-3′384bp56.41R5′-CGGCACTGCGCCATGGAG-3′片段（2）2F5′-CTGTGTTTCAGGGTCTCACAC-3′442bp56.42R5′-GCAGGACAAGGTCAGGATC-3′表C.2PCR扩增片段引物引物序列扩增片段退火温度(℃)片段1F5′-ATGGAGTTGCTGCCCACCTTGCGCCTG-3′984bp601R5′-TGAAACCCATCAGGCACCATCCCAGGT-3′PCRPCRPCR总反应体积为15μL10×PCRbuffer:1.5μL，上下游引物(100pmol/μL)各1μL,4×dNTP100μmol/L:1μL,Taq酶1U:1μL,50ng～100ng基因组DNA:1μL8.5μL。PCR：954min；94，30sPCR74PCRPCR反应结束后，经琼脂糖凝胶电泳检测，检测合格的PCR产物进行测序。测序结果与标准序列进行比对分析，计算一致率。MHC所有样本序列与参考标准序列比对，一致率达100%，判为合格。29DB11/T1804—2020MHCB2片段（1）CGTGGGATCCTCAGACCCACACCCGCGGCTCACGGCCCCGCTGCGCTCCGTCCCCGCAGAGCTCCATACCCTGCGGTACATCTCTACGGCGATGACGGATCCCGGCCCCGGGCAGCCGTGGTACGTGGACGTGGGGTACGTGGACGGGGAACTCTTCACGCACTACAACAGCACCGCTCGGAGGGCTGTGCCCCGCACCGAGTGGATAGCGGCCAACACGGACCAGCAGTACTGGGACAGAGAGACGCAGATCGCACAGGGCAATGAGCAGATTGACCGCGAGAACCTGGACATACGGCAGCAGCGCCACAACCAGACCGGCGGTGAGCACGGCCGGGGCCGCGGCTCCGTGGGTGTGGGATGGACTCCATGGCGCAGTGCCG片段（2）AAGGCTGAGCTGGGCAGGAGAGGTGAGCAGGGT--------GGGGGGGGGGCCGCAGTGTGGGGCTGGACGTGGGCCGGGGGCTCAGTGTGGGGAGCTCAGCCCGGCCCTCATTGCCACCCGCCT-GCAGAGCGGCCTGAGGTGCGAGTGTGGGGGAAGGAGGCCGACGGGATCCTGACCTTGTCCTGCB5片段（1）CCGTGGGATCCTCAGACCCCCACCCGCGGCTCACGGCCCCGCTGCGCTCCGCCCCCGCAGAGCTCCATACCCTGCGGTACATCCATACGGCGATGACGGATCCCGGCCCCGGGCAGCCGTGGTACGTGGACGTGGGGTATGTGGACGGGGAACTCTTCGTGCACTACAACAGCACCGCGCGGAGGTACGTGCCCCGCACCGAGTGGATGGCGGCCAAGGCGGACCAGCAGTACTGGGATGAACAGACGCAGATCGCACAGGGCAATGAGCGGAGTGTGAAAGTGAGCCTGGACACACTGCAGGAACGATACAACCAGACCGGCGGTGAGCACGGCCGGGGCCGCGGCTCCGTGGGTGTGGGATGGGCTCCATGGCGCAGTGCCG片段（2）CTGTGTTTCAGGGTCTCACACGGCGCAGTGGATGTACGGCTGTGACATCCTCGAGGACGGCACCATCCGGGGGTATCATCAGGAGGCCTACGATGGGAGAGACTTCATTGCCTTCGACAAAGGCACGATGACG