药物的含量测定方法专家讲座

药品含量测定是指测定药品中所含主成份量，目标:判断药品优劣。定义第四章药品含量测定方法药物的含量测定方法专家讲座第1页

化学分析法

重量分析容量分析含量测定仪器分析法效价测定（生物学法）可见紫外分光高效液相色谱法气相色谱法药物的含量测定方法专家讲座第2页药品含量测定容量分析法三种分析方法光谱分析法色谱分析法特点操作简单、结果准确，耐用性高，但专属性差特点特点简便快速、灵敏度高，有一定准确度，但专属性稍差灵敏度与专属性都高，有一定准确度，但结果需要对照品适合用于准确度与准确度要求较高样品测定适合用于灵敏度要求较高，样本量较大分析项目适合用于专属性和灵敏度要求较高复杂样品药物的含量测定方法专家讲座第3页第一节定量分析方法分类与特点容量分析法定义将已知浓度滴定液，由滴定管滴加到被测药品溶液中，直至滴定液与被测药品反应完全，然后依据滴定液消耗浓度和被消耗体积，按化学计量关系式计算出被测药品含量。亦称滴定法药物的含量测定方法专家讲座第4页特点1.方法简便易行：仪器价廉易得，操作简便快速2.方法耐用性高：影响测定试验条件与环境原因少3.测定结果准确：误差低于0.2%4.方法专属性差：对相近杂质干扰缺乏选择，适合用于主成份含量较高样品(如原料药)分析药物的含量测定方法专家讲座第5页第一节定量分析方法容量分析法相关计算例:用碘量法测定维生素C含量时，《中国药典》要求：每1ml碘滴定液（0.05mol/L）相当于8.806mg维生素C（C2H8O6）T(滴定度):1ml滴定液(mmol/L)相当于被测药品毫克数药物的含量测定方法专家讲座第6页被测药品滴定液药品分子量滴定液浓度滴定度计算药物的含量测定方法专家讲座第7页示例一计算VitC滴定度T碘量法测定VitC含量M(C6H6O6)=176.13，C(I2)=0.05mol/Lm=0.05mol/L11M=176.13药物的含量测定方法专家讲座第8页示例二异烟肼滴定度溴酸钾法测定异烟肼含量[M(C6H7N3O)=137.14]，C溴酸钾=0.01667mol/Lab药物的含量测定方法专家讲座第9页滴定含量计算W测=NFTV取用倍数浓度校正因数滴定度消耗体积例:VitC含量测定:精密称取本品0.1332g,置锥形瓶中,加稀醋酸与新沸过冷蒸馏水混合液(1:10)110ml,加淀粉指示液1ml,用碘滴定液(0.05014mol/L)滴定至蓝色,用去15.02ml,每1ml碘液(0.05mol/L)相当于8.806mgC6H8O6，计算本品是否符合药典要求含量程度。药典要求含C6H8O6不得低于99.0%。浓度校正因数滴定度消耗体积F=实际C要求C药物的含量测定方法专家讲座第10页计算步骤W测=NFTV×———0.050140.05×8.806×10-3×15.02=0.13263(g)VitC百分含量(%)VitC%=W测W样0.132630.1332==99.57%=10.1332样品中VitC含量(W测)药物的含量测定方法专家讲座第11页又例非那西丁含量测定精密称取本品0.3630g加稀盐酸回流1小时后，放冷，用亚硝酸钠滴定液（0.1010mol/L）滴定，用去20.00ml。每1ml亚硝酸钠液（0.1mol/L）相当于17.92mgC10H13O2N，请计算非那西丁含量。药物的含量测定方法专家讲座第12页需做空白试验计算公式W测=NFT（V-V0）例:萘普生含量测定：精密称取本品0.4960g，加甲醇45ml溶解后，再加水15ml与酚酞指示剂3滴，用NaOH滴定液（0.1078mol/L）滴定，同时用空白试验校正，求萘普生百分含量。《中国药典》要求每1mlNaOH滴定液（0.1mol/L）相当于23.03mgC14H14O3。按干燥品计算，含C14H14O3不得少于98.5%。滴结果以下：V=19.85ml，V0=0.10ml，干燥失重=0.40%。药物的含量测定方法专家讲座第13页光谱分析法药典收载紫外可见分光度法原子吸收分光光度法红外分光度法荧光分析法火焰光度法二、光谱分析法

药物的含量测定方法专家讲座第14页紫外可见分光度法基于物质对紫外区(200~400nm)和可见光区(400~760nm)单色光辐射建立起来光谱分析法朗伯-比尔定律基础药物的含量测定方法专家讲座第15页紫外可见分光度法方法特点与适用范围1.简便易行：本法使用仪器价格比较低廉，操作简单，易于普及2.灵敏度高：适合用于低浓度试样分析3.准确度较高：本法误差在2%~5%之间，适合用于对测定结果准确度要求较高样品4.专属性较差：本法通常不受普通杂质干扰，但对结构相近相关物质缺乏选择性。本法比较少应用于原料药含量测定，可用于制剂含量测定，更多应用于生物制剂定量检验本法紫外区须选取石英比色皿，比色皿普通为1cm，吸光度在0.3~0.7之间为宜，选取最大吸收光波长。药物的含量测定方法专家讲座第16页紫外可见分光度法含量测定方法3种方法对照品比较法吸收系数法计算光度法(少用)药物的含量测定方法专家讲座第17页紫外可见分光度法含量测定方法1.对照品比较法分别配制供试品溶液和对照品溶液,所用溶剂量二者相同,在要求波长下测定吸光度.按下式计算结果药物的含量测定方法专家讲座第18页紫外可见分光度法含量测定方法2.吸收系数法吸收系数法:引入吸光系数含量计算方法含量%=—————1%1cmE1%1cmE（）供（）标药典记载药物的含量测定方法专家讲座第19页[例]

已知VitB12在361nm处百分吸收系数为207，现测得其水溶液吸收度为0.414，吸收池厚度为1cm，求其浓度。解：C=AL1%1cmE=————=0.00200()0.414207×1g/100ml单位?药物的含量测定方法专家讲座第20页[例]精密称取VitB12供试品25.0mg，加水溶解并稀释制成1000mL，于1cm厚吸收池中，在361nm处测得吸收度为0.507，已知其百分吸收系数为207，求其百分含量。解：C=m/V=25×10-3/1000（g/ml）=（g/100ml）2.5×10-3

1%1cmE()供=A/CLVitB12%=————1%1cmE1%1cmE（）供（）标=202.8/207=97.97%=0.507/(2.5×10-3×1)用A算出（）供，再用其与已知（）标比值1%1cmE1%1cmE=202.8药物的含量测定方法专家讲座第21页[例]用UV法测定对乙酰氨基酚含量：精密称取本品0.0410g，置250ml量瓶中，加0.4%NaOH溶液50ml,溶解后,加水于刻度,摇匀。精密量取5ml,置100ml量瓶中,加0.4%NaOH溶液10ml,溶解后,加水至刻度,摇匀。在257nm处测得吸收度为0.580，按其百分吸收系数715计算，求其百分含量。解：C=m/V=（g/100ml）8.2×10-4

1%1cmE()供=A/CLVitB12%=————1%1cmE1%1cmE（）供（）标=707.3/715=98.93%=0.580/8.2×10-4=707.3药物的含量测定方法专家讲座第22页特点：灵敏度高，可达10-10～10-12g/ml要求低浓度下测定须做空白测定荧光弱药品可衍生化后测定(二)荧光分析法药物的含量测定方法专家讲座第23页(三)色谱分析法1.HPLC1.1内标法

As：内标物质峰面积或者峰高AR:对照品峰面积或者峰高Cs:内标物质浓度CR：对照品浓度两步:(1)测f;(2)测含量(1)测f(用标准品与内标物)药物的含量测定方法专家讲座第24页As’：内标物质峰面积或者峰高Ax:供试品峰面积或者峰高Cs’:内标物质浓度f：校正因子(2)测含量(用样品与内标物)药物的含量测定方法专家讲座第25页示例一炔诺酮含量测定

照高效液相色谱法(附录ⅤD测定)色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水(65:35)为流动相，检测波长为244nm。理论塔板数按炔诺酮峰计算不低于1500，炔诺酮峰与内标物质峰分离度及主成份峰后一杂质峰与主成份峰分离度均应符合要求。内标溶液制备取黄体酮约25mg，精密称定，置25ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度。药物的含量测定方法专家讲座第26页测定法

取本品约25mg，精密称定，置25ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取此溶液2ml与内标溶液3ml，置10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，取20μl注入液相色谱仪，统计色谱仪，统计色谱图；另取炔诺酮对照品适量，精密称定，同法测定。按内标法以峰面积计算，即得。药物的含量测定方法专家讲座第27页例HPLC法测定磺胺嘧啶含量对照品+内标溶液配制：精密称取对照品50.0mg，置50ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度,摇匀。精密量取5ml,置25ml量瓶中,精密加内标溶液(0.20mg/ml)5ml,加流动相至刻度,摇匀。供试品+内标溶液配制：精密称取本品50.5mg，照上法配制。取上述两种溶液各10μl进样，测得对照品和内标峰分别为1350和1040，供试品峰和内标峰分别为1313和1013。求SD含量。解：因为对照品和供试品稀释倍数相同，所以直接按质量代替浓度计算As/CsAr/mr=f=As/CsAx/mx1040/0.201350/50.0=f=1013/0.201313/mx解之,得:mx=49.924(mg)SD%=49.924/50.5=98.86%药物的含量测定方法专家讲座第28页2.外标法药物的含量测定方法专家讲座第29页(二)GC内标法药物的含量测定方法专家讲座第30页第二节定量分析样品前处理方法不经有机破坏经有机破坏直接测定配位滴定法氧化还原滴定法水解后测定酸水解碱水解经还原分解后测定湿法破坏——凯氏定氮法干法破坏高温灼烧法氧瓶燃烧法药物的含量测定方法专家讲座第31页第二节定量分析样品前处理方法(一)、直接测定法葡萄糖酸钙EDTA配位滴定富马酸亚铁邻二氮菲-硫酸铈滴定葡萄酸锑钠间接碘量法(二)、经水解后测定法适用范围：金属原子不直接于碳原子相连或一些C-M键结合不牢靠有机金属药品。药物的含量测定方法专家讲座第32页第二节定量分析样品前处理方法1、碱水解法三氯叔丁醇银量法返滴定2、酸水解法适用范围：含卤素有机药品结构中卤素原子结合不牢靠药品。EDTA配位滴定药物的含量测定方法专家讲座第33页第二节定量分析样品前处理方法(三)、经还原分解后测定法适用范围：碘原子直接与芳环连接含碘有机化合物。泛影酸3NaI药物的含量测定方法专家讲座第34页第二节定量分析样品前处理方法三、经有机破坏分析方法

含氮、硫、硫柳汞、氯化钠生物制品、含氮有机合成药品测定前处理和生物制品中金属元素测定时生物基质去除。H2SO4-HNO3H2SO4-HClO4H2SO4-H2SO4HNO3-KMnO4分解剂/消化剂辅助分解剂——凯氏定氮法测定含有氨基和酰胺结构药品结构(一)湿法破坏药物的含量测定方法专家讲座第35页第二节定量分析样品前处理方法原理将含氮药品与硫酸在凯氏烧瓶中共热，药品分子中有机结构被“消化”成CO2和H2O，有机结合氮转化为无机氮，与过量硫酸结合为硫酸氢铵和硫酸铵，经碱化后释放出氨气，随水蒸气馏出，用硼酸溶液或定量酸滴定液吸收后，再用酸或碱滴定液滴定。常量法——含氮量25～30mg半微量法——含氮量

1.0～2.0mg药物的含量测定方法专家讲座第36页第二节定量分析样品前处理方法凯氏烧瓶K2SO4(提升消解温度)CuSO4(加紧消解速度)硫酸碱液硼酸(吸收液)甲基红-溴甲酚绿指示剂硫酸滴定空白校正先用强酸水解再用含碱硫代硫酸钠中和最终用碱释放出氨气，并蒸馏出之药物的含量测定方法专家讲座第37页(二)干法破坏1.高温灼烧法用于含卤素、含磷药品和药品中砷盐检验。常加入无水碳酸钠、硝酸镁、氢氧化钙、氧化锌等辅助灰化。2.氧瓶燃烧法第二节定量分析样品前处理方法系指将含有待测元素有机药品置于充满氧气密闭密闭燃烧瓶中充分燃烧，使有机结构部分彻底分解为CO2和H2O，待测元素依据电负性不一样转化为不一样价态氧化物，被吸收于适当吸收液中，再依据其性质和存在方式选择方法进行分析。药物的含量测定方法专家讲座第38页第二节定量分析样品前处理方法燃烧时待测物转化成不一样价态无机物以供测定滤纸包装样品药物的含量测定方法专家讲座第39页第三节药品分析方法验证药品制剂人体生物利用度和生物等效性试验指导标准药品稳定性试验指导标准缓释、控释制剂指导标准微囊、微球与脂质体制剂指导标准细菌内毒素检验法应用指导标准目标：

证实所采取分析方法适合于对应检测要求效能指标：

评价分析方法尺度

效能指标包含:

精密度,准确度,检测限,定量限,选择性,线性与范围,耐用性药物的含量测定方法专家讲座第40页第三节药品分析方法验证一、准确度（accuracy）

系指用该方法测定结果与真实值或参考值靠近程度。(一)含量测定方法回收率(Recovery)回收试验加样回收试验3×3，最少9个测定结果药物的含量测定方法专家讲座第41页第三节药品分析方法验证二、精密度(Precision)

系指在要求测试条件下，同一个均匀供试品，经屡次取样测定所得结果之靠近程度。表示：偏差(d)、标准偏差(s),、相对标准偏差(RSD)重复性:

同一试验室,同一人屡次测定精密度中间精密度:

同一试验室，不一样人，不一样仪器测定精密度

重现性:

不一样试验室，不一样人测定精密度药物的含量测定方法专家讲座第42页第三节药品分析方法验证三、专属性(Specificity)指有其它