农药产品中高毒剧毒农药初筛定性方法研究

农药产品中高毒剧毒农药初筛定性方法研究第1页/共71页前言《农药管理条例》规定，高毒剧毒农药不得用于蔬菜、瓜果。近年来，随着高毒剧毒农药在蔬菜、瓜果上的禁用，替代农药已得到了应用，但一些品种在防治速效性方面仍比不上高毒剧毒农药，一些企业为追求自身效益、提高农药防治效果，在农药产品中随意添加高毒剧毒农药，致使蔬菜、瓜果农残超标，特别是在一些生长期较短的蔬菜上使用后，极易导致急性中毒，危害消费者生命安全。为此，近几年农业部安排各省进行的农药产品质量监督抽查，除要求检测有效成分外，都要求检测非法添加的高毒剧毒农药。第2页/共71页前言目前，我国农业生产中使用的高毒剧毒化学农药有水胺硫磷、苯线磷、地虫硫磷、甲拌磷、甲基硫环磷、甲基异柳磷、克百威、磷化钙、磷化铝、磷化镁、磷化锌、硫线磷、灭多威、灭线磷、杀扑磷、涕灭威、氧乐果、蝇毒磷、治螟磷、溴甲烷、特丁硫磷共21种，其中，磷化钙、磷化铝、磷化镁、磷化锌、溴甲烷5种农药主要用于熏杀各种仓库害虫，不能添加到农药产品中用于大田作物防治。为解决各省药检所在完成农业部抽查任务中的高毒剧毒农药快速定性技术难题，部药检所分析室委托山东药检所开展了农药产品中16种高毒剧毒农药初筛定性方法研究。第3页/共71页前言我们综合考虑全国各省药检所仪器设备配置及检测人员技术水平情况，摸索了一种便于推广且经济实用的农药产品中水胺硫磷、苯线磷、地虫硫磷、甲拌磷、甲基硫环磷、甲基异柳磷、克百威、硫线磷、灭多威、灭线磷、杀扑磷、涕灭威、氧乐果、蝇毒磷、治螟磷、特丁硫磷这16种高毒剧毒农药的初筛定性方法。其主要内容是先用气谱法和液谱法进行初筛，再用气谱双柱或气质联用定性或用液谱二极管阵列检测器光谱进行定性，最后参照相应的国标、行标、企标进行进一步的定性和定量。第4页/共71页实验部分（一）一、气相色谱法1.仪器Agilent7890A气相色谱仪，使用HP-530m×0.32mm×0.25μm毛细管柱，FID检测器；Agilent6890N气相色谱仪，使用HP-170130m×0.53mm×1.0μm毛细管柱，FID检测器；第5页/共71页实验部分（二）2.试剂和农药

溶剂：丙酮。农药标样：共12种，苯线磷、地虫硫磷、甲拌磷、甲基硫环磷、甲基异柳磷、硫线磷、特丁硫磷、灭线磷、杀扑磷、水胺硫磷、蝇毒磷、治螟磷。农药样品：15%哒螨灵乳油；

20%甲氰菊酯乳油；

40%机油·杀扑磷乳油；

20%丁硫·吡虫啉乳油。第6页/共71页实验部分（三）3.气相色谱操作条件柱温：起始温80℃，停1min，20℃/min升至170℃，停0min，5℃/min升至220℃，停0min，40℃/min升至250℃，停30min；气化室温度：250℃；检测器温度：260℃；载气（高纯氮气）线速度：35cm/s～40cm/s；载气（高纯氮气）流量：1.5mL/min～1.8mL/min(0.32mm内径色谱柱)或6.0mL/min～7.0mL/min(0.53mm内径色谱柱)；氢气流量：30mL/min；空气流量：300mL/min；补充气流量：30mL/min；分流比：30:1；进样量：1μL。第7页/共71页实验部分（四）4.测定步骤（1）标样溶液的配制：分别称取苯线磷、地虫硫磷、甲拌磷、甲基硫环磷、甲基异柳磷、硫线磷、特丁硫磷、灭线磷、杀扑磷、水胺硫磷、蝇毒磷、治螟磷共12种农药标样各0.05g（精确至0.0002g）于10mL容量瓶中，用丙酮溶解并稀释至刻度，摇匀。第8页/共71页实验部分（五）（2）试样溶液的配制：

A.干扰试样溶液的配制

a)称取15%哒螨灵乳油2.0g（精确至0.0002g）于10mL容量瓶中，准确移入2mL上述混合标样溶液，摇匀。

b)称取20%甲氰菊酯乳油1.5g（精确至0.0002g）于10mL容量瓶中，准确移入2mL上述混合标样溶液，摇匀。

B.实际检测试样溶液的配制对于需要检测的未知农药样品，准确称取4.0g（精确至0.0002g）于10mL容量瓶中，用丙酮溶解并稀释至刻度，超声振荡5min，摇匀，然后用0.45μm滤膜过滤。第9页/共71页实验部分（六）5.初筛及定性分析在上述操作条件下，待仪器基线稳定后，在两台气相色谱仪上分别注入标样溶液和试样溶液，根据保留时间进行定性。保留时间：在HP-5色谱柱上:灭线磷8.6min，治螟磷8.84min，硫线磷8.87min，甲拌磷8.94min，特丁硫磷9.3min，地虫硫磷9.4min，甲基硫环磷10.3min，水胺硫磷10.6min，甲基异柳磷10.9min，杀扑磷11.3min，苯线磷11.5min，蝇毒磷19.5min。色谱图见图1～图5。第10页/共71页混合标样色谱图

(HP-5)（图1）第11页/共71页15%哒螨灵乳油+混合标样色谱图

(HP-5)（图2）第12页/共71页20%甲氰菊酯乳油+混合标样色谱图

(HP-5)（图3）第13页/共71页实测40%机油·杀扑磷乳油气相色谱图

（HP-5）（图4）第14页/共71页实测20%丁硫·吡虫啉乳油气相色谱图

（HP-5）（图5）第15页/共71页实验部分（七）在HP-1701色谱柱上:灭线磷12.8min，硫线磷13.1min，治螟磷13.7min，甲拌磷13.9min，特丁硫磷14.9min，地虫硫磷16.0min，甲基异柳磷19.5min，水胺硫磷20.2min，苯线磷22.4min，杀扑磷23.2min，甲基硫环磷24.2min，蝇毒磷55.0min。色谱图见图6～图10。第16页/共71页混合标样色谱图

(HP-1701)（图6）第17页/共71页15%哒螨灵乳油+混合标样色谱图

(HP-1701)（图7）第18页/共71页20%甲氰菊酯乳油+混合标样色谱图

(HP-1701)（图8）第19页/共71页实测40%机油·杀扑磷乳油气相色谱图

（HP-1701）（图9）第20页/共71页实测20%丁硫·吡虫啉乳油气相色谱图

（HP-1701）（图10）第21页/共71页实验部分（八）二、液相色谱法1.仪器液相色谱仪：Waters2695，二极管阵列检测器；色谱柱：HypersilC18250mm×4.6(i.d.)mm5μm。第22页/共71页实验部分（九）2.试剂和农药甲醇：色谱纯；水：新蒸二次蒸馏水；农药标样：共13种，氧乐果、灭多威、涕灭威、克百威、水胺硫磷、杀扑磷、灭线磷、苯线磷、甲基异柳磷、地虫硫磷、蝇毒磷、甲拌磷、特丁硫磷。农药样品：5%啶虫脒乳油；

5%吡虫啉乳油；

40%毒死蜱乳油；

20%丁硫·吡虫啉乳油；

3%啶虫脒可湿性粉剂。

第23页/共71页实验部分（十）3.液相色谱条件柱温：30℃；检测波长：220nm；进样量：10μL；流动相：甲醇+水，采用梯度洗脱，见表1。第24页/共71页实验部分（十一）表1流动相梯度洗脱程序

序号时间(min)流量(mL/min)甲醇比例(%)水比例(%)101.020.080.023.01.020.080.035.01.040.060.0410.01.240.060.0516.01.270.030.0640.01.270.030.0742.01.020.080.0第25页/共71页实验部分（十二）4.测定步骤（1）标样溶液的配制：称取氧乐果、灭多威、涕灭威、克百威、水胺硫磷、杀扑磷、灭线磷、苯线磷、甲基异柳磷、地虫硫磷、蝇毒磷、甲拌磷、特丁硫磷共13种农药标样各0.05g（精确至0.0002g）于50mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀。

第26页/共71页实验部分（十三）（2）试样溶液的配制

A.干扰试样溶液的配制

a)称取5%啶虫脒乳油2.0g（精确至0.0002g）于50mL容量瓶中，准确移入10mL上述混合标样溶液，摇匀。

b)称取5%吡虫啉乳油2.0g（精确至0.0002g）于50mL容量瓶中，准确移入10mL上述混合标样溶液，摇匀。

c)称取40%毒死蜱乳油0.25g（精确至0.0002g）于50mL容量瓶中，准确移入10mL上述混合标样溶液，摇匀。第27页/共71页实验部分（十四）B.实际检测试样溶液的配制对于需要检测的未知农药样品，准确称取4.0g（精确至0.0002g）于50mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，超声振荡5min，摇匀，然后用0.45μm滤膜过滤。第28页/共71页实验部分（十五）5.初筛及定性分析在上述操作条件下，待仪器基线稳定后，注入标样溶液和试样溶液，根据保留时间进行初筛，用紫外吸收光谱进行定性。保留时间：氧乐果4.3min、灭多威6.3min、涕灭威12.6min、克百威19.4min、水胺硫磷26.5min、杀扑磷26.9min、灭线磷30.7min、苯线磷31.7min、甲基异柳磷32.3min、地虫硫磷33.3min、蝇毒磷34.3min、甲拌磷34.7min、特丁硫磷42.9min，色谱图见图11～图17。第29页/共71页标样色谱图（图11）

第30页/共71页5%啶虫脒乳油+混合标样液相色谱图(图12)

第31页/共71页5%吡虫啉乳油+混合标样液相色谱图

（图13）

第32页/共71页40%毒死蜱乳油+混合标样液相色谱图（图14）

第33页/共71页实际检测液相色谱图（20%丁硫·吡虫啉乳油）（图15）第34页/共71页实际检测液相色谱图（5%啶虫脒乳油）（图16）

第35页/共71页实际检测液相色谱图（3%啶虫脒可湿性粉剂）

（图17）

第36页/共71页实验部分（十六）三、气质联用色谱法1.仪器气质联用仪：日本岛津GC-MS2010；色谱柱：HP-5MS30m×0.25mm×0.25μm毛细管柱2.试剂与农药同气相色谱法第37页/共71页实验部分（十七）3.气质操作条件A.气相色谱操作条件柱温：起始温80℃，停1min，20℃/min升至170℃，停0min，5℃/min升至220℃，停0min，40℃/min升至250℃，停15min；载气（高纯氦气）流量：1.44mL/min；气化室温度：220℃；分流比：10：1；进样量：1μL第38页/共71页实验部分（十八）B.质谱操作条件离子源：EI源；电离电压：70ev；离子源温度：200℃；接口温度：250℃。4.测定步骤溶液配制同气相色谱部分。第39页/共71页实验部分（十九）5.定性分析在上述操作条件下，待仪器基线稳定后，注入标样溶液和试样溶液。保留时间：灭线磷7.7min，治螟磷8.0min，硫线磷8.1min，甲拌磷8.2min，特丁硫磷8.5min，地虫硫磷8.6min，甲基硫环磷9.5min，水胺硫磷9.6min，甲基异柳磷9.8min，杀扑磷10.2min，苯线磷10.4min，蝇毒磷17.3min。色谱图见图18～图22。第40页/共71页标样总离子流图（图18）

第41页/共71页15%哒螨灵乳油+混合标样总离子流图

（图19）

第42页/共71页20%甲氰菊酯乳油+混合标样总离子流图

（图20）

第43页/共71页实际检测样品总离子流图（40%机油·杀扑磷乳油）

（图21）

第44页/共71页实际检测样品总离子流图（20%丁硫·吡虫啉乳油）

（图22）

第45页/共71页实验部分（十九）

将试样与标样的保留时间对比，再利用标准谱库检索进行定性确认，一般与目标化合物的匹配率应大于96%。如制剂中有干扰，也可通过SIM方式，利用选择离子进行定性确认，各个农药品种的具体选择离子见表2。

第46页/共71页表2选择离子汇总表农药名称选择离子灭线磷158168200242治螟磷202238266硫线磷213270甲拌磷260231121153特丁硫磷153231288地虫硫磷137174202甲基硫环磷148230304水胺硫磷136230289甲基异柳磷121199241杀扑磷145157302苯线磷154288217蝇毒磷225364334第47页/共71页检测农药产品中添加的高毒剧毒农药分析步骤

（一）一、初筛对于需要检测是否非法添加了上述16种高毒剧毒农药的杀虫剂样品，可在以上所述条件下分别用气相色谱法和液相色谱法进行初筛，使用气相色谱法时可以选用其中一种色谱柱。方法是：将试样色谱峰的保留时间与标样色谱峰的保留时间进行比较，保留时间一致者可初步认定含有该种高毒剧毒农药成分。第48页/共71页检测农药产品中添加的高毒剧毒农药分析步骤

（二）二、定性1.对于使用液相色谱法初筛出的高毒剧毒农药成分（如氧乐果、灭多威、涕灭威、克百威、水胺硫磷、杀扑磷、灭线磷、苯线磷、甲基异柳磷、地虫硫磷、蝇毒磷、甲拌磷、特丁硫磷等），使用的二极管阵列检测器可以检测色谱流出物每个瞬间的吸收光谱图，即可以得到三维的时间-色谱信号-吸收光谱图，可以提供组分的光谱定性信息，用于确证组分，因此，可直接采用试样光谱图与标样光谱图比较的方法进行定性，如两者光谱图一致，则认为是该种物质。例如3%啶虫脒可湿性粉剂样品通过初筛确定含有灭多威成分，将试样光谱图与灭多威标样光谱图比较，两者一致，就可确定3%啶虫脒可湿性粉剂样品中含有灭多威成分。第49页/共71页检测农药产品中添加高毒剧毒农药成分分析步骤（三）灭多威标样光谱图3%啶虫脒可湿性粉剂中与灭多威保留时间一致色谱峰的光谱图

第50页/共71页检测农药产品中添加的高毒剧毒农药分析步骤（四）2.对于使用气相色谱法初筛出的高毒剧毒农药成分（如苯线磷、地虫硫磷、甲拌磷、甲基硫环磷、甲基异柳磷、硫线磷、特丁硫磷、灭线磷、杀扑磷、水胺硫磷、蝇毒磷、治螟磷等），优先选用气质联用法进行定性，如果实验室没有气质联用仪，可采用双柱保留时间定性。例如40%机油·杀扑磷乳油样品中在HP-5色谱柱上初筛出含有特丁硫磷成分，在HP-1701色谱柱上进行确认，若还能检出特丁硫磷成分，则认为含有特丁硫磷成分。第51页/共71页检测农药产品中添加的高毒剧毒农药分析步骤（五）实际检测气相色谱图（40%机油·杀扑磷乳油）在HP-5色谱柱上实际检测气相色谱图（40%机油·杀扑磷乳油）在HP-1701色谱柱上第52页/共71页检测农药产品中添加的高毒剧毒农药分析步骤（六）三、定量1.以下农药可参照相应的国标、行标进行定量分析⑴特丁硫磷，参照《GB20677-2006特丁硫磷原药》；⑵灭线磷，参照《GB20681-2006灭线磷原药》；⑶杀扑磷，参照《GB20682-2006杀扑磷原药》；⑷甲拌磷，参照《HG2464.1-1993甲拌磷原药》；⑸氧乐果，参照《HG3306-2000氧乐果原药》；⑹甲基异柳磷，参照《HG2200-1991甲基异柳磷乳油》；⑺水胺硫磷，参照《GB24753-2009水胺硫磷原药》；⑻克百威，参照《HG3621-1999克百威原药》；⑼灭多威，参照《GB24752-2009灭多威原药》第53页/共71页检测农药产品中添加高毒剧毒农药成分分析步骤（七）2.以下农药无国标、行标可参照，可采用企标或查询的定量方法⑴地虫硫磷（查自《农药分析》第四版）⑵硫线磷（查自《农药分析》第四版）⑶治螟磷（查自备案企业标准）⑷苯线磷（查自备案企业标准）⑸涕灭威（查自《农药分析》第四版）⑹蝇毒磷（查自《农药分析》第四版）⑺甲基硫环磷（查自备案企业标准）

第54页/共71页第55页/共71页第56页/共71页第57页/共71页第58页/共71页

抽查结果分析

山东省农药检定所

2011.09第59页/共71页抽查结果分析不同类型农药分析违法行为分析分析基本结论第60页/共71页（一）不同类型农药分析1.单剂产品质量高于混剂产品。2.除草剂产品质量好于杀虫、杀菌剂产品。3.蔬菜大棚用烟剂产品质量较差。第61页/共71页（二）违法行为分析质量违法行为：1.标明的有效成分未检出（但是可能有其他农药成分）未检出农药有效成分的产品大部分是常规农药品种。2.擅自加入其他农药成分。产品中擅自添加其他农药成分，甚至添加高毒农药，主要往菊酯类杀虫剂、有机磷类杀虫剂、菊酯和有机磷混配杀虫剂、吡虫啉、啶虫咪等杀虫剂中添加高毒农药克百威、特丁硫磷、甲拌磷、灭多威、氧乐果等。3.有效成分含量不足。第62页/共71页（