微生物纯培养的分离方法

关于微生物纯培养的分离方法第1页，共27页，2023年，2月20日，星期四微生物纯种分离将多种混杂微生物，经某种技术或方法分离成纯种的过程纯培养（pureculture）将在实验室条件下从一个细胞或一种细胞群繁殖得到的后代称为纯培养。第2页，共27页，2023年，2月20日，星期四微生物样品多种混杂某种方法分散成单个微生物平板培养单菌落每个菌落为纯种（纯培养）单菌落转接培养纯种（纯培养）微生物纯种分离的原理和方法第3页，共27页，2023年，2月20日，星期四单个微生物在适宜的固体培养基表面或内部生长、繁殖到一定程度可以形成肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞群体，称为菌落。菌落第4页，共27页，2023年，2月20日，星期四一个菌落是一个纯种，也是一个纯培养；单个微生物只在固体培养基上形成菌落；在液体培养基中不会形成菌落第5页，共27页，2023年，2月20日，星期四同一细菌在不同的培养平板上形成不同的特征菌落第6页，共27页，2023年，2月20日，星期四分区划线法（蛇形线法）操作图第一区划线第二区划线第三区划线一、划线法第7页，共27页，2023年，2月20日，星期四分区划线法适用范围：

适用于浓度较大的样品第8页，共27页，2023年，2月20日，星期四连续划线法操作图连续划线法适用范围：适用于浓度较小的样品第9页，共27页，2023年，2月20日，星期四二、稀释平板法从土壤中分离纯微生物104/ml103/ml102/ml101/ml第10页，共27页，2023年，2月20日，星期四1、稀释倾注分离法第11页，共27页，2023年，2月20日，星期四涂布平板法稀释倒平板法2、稀释涂布分离法第12页，共27页，2023年，2月20日，星期四采用显微分离法从混杂群体中直接分离单个细胞或单个个体进行培养以得到纯培养，称为单细胞（单孢子）分离法。第13页，共27页，2023年，2月20日，星期四个体较小的微生物需采用显微操作仪分离难度与细胞或个体的大小成反比营养琼脂平板上不能形成菌落较大的微生物可使用毛细管提取三、单细胞挑取法五、小滴分离法第14页，共27页，2023年，2月20日，星期四Eachcolonywasexaminedmicroscopically第15页，共27页，2023年，2月20日，星期四四、选择培养基分离法创造适于目的微生物生长条件原理促使目的微生物快速生长呈优势菌抑制非目的微生物生长从混杂微生物中分离目的微生物第16页，共27页，2023年，2月20日，星期四1、利用选择培养基进行直接分离选择培养基只允许特定微生物生长，而同时抑制或阻止其他微生物生长的培养基第17页，共27页，2023年，2月20日，星期四土壤目的菌优势非目的菌选择培养基直接分离单细胞选择培养基平板（含牛奶或酪蛋白唯一C、N源）37℃培养目的菌落菌落周围有透明蛋白水解圈1、利用选择培养基进行直接分离例一：分离筛选蛋白酶产生细菌第18页，共27页，2023年，2月20日，星期四含牛奶选择培养基目的菌生长平板营养选择因子：牛奶或酪蛋白只允许分解利用蛋白质的目的菌生长，淘汰非目的菌长出的目的菌并不一定是同种细菌，但皆产蛋白酶例一：分离筛选蛋白酶产生细菌第19页，共27页，2023年，2月20日，星期四例二：分离筛选产高温淀粉酶（65℃）细菌单细胞选择培养基平板（淀粉为唯一C源）65℃培养淀粉水解透明圈目的菌菌落选择因子：营养选择因子淀粉环境选择因子65℃高温第20页，共27页，2023年，2月20日，星期四人为创造一些条件只让所需的微生物生长，在这些条件下，所需要的微生物能有效地与其他微生物进行竞争，在生长能力方面远远超过其他微生物。2、富集培养法富集培养是分离微生物菌种最强有力的技术之一营养选择因子和生理条件选择因子可无穷尽组合，可从自然界选择分离各类特异微生物第21页，共27页，2023年，2月20日，星期四例：从土壤中分离能产生ß－半乳糖苷酶的微生物富集培养选择培养基分离目的菌验证第22页，共27页，2023年，2月20日，星期四1.接种针2.接种环3.接种钩4.接种锄5.接种铲6.接种匙7.接种刀8.接种刀9.剪刀10.钢钩11.镊子12.弹簧接种枪13.接种、枪（日本式）涂布棒弹簧接种枪第23页，共27页，2023年，2月20日，星期四接种环的灭菌接种环烧红接种环稍冷却接种工具第24页，共27页，2023年，2月20日，星期四挑选单个