TCACM 1326.14-2019 三七种子超低温保存技术规程

ICS11.120.01C23团 体 标 准T/CACM1326.14—2019三七种子超低温保存技术规程TechnicalcodeofpracticeforcryopreservationofPanaxnotoginseng(Burkill)F.H.Chenseeds2019-10-17发布 2019-10-17实施中 华 中 医 药 学 会 发布T/CACM1326.14—2019T/CACM1326.14—2019II目 次前言 II范围 1规性用件 1术和义 1种采及择 2子收 2子择 2种前理 22水范围 2种保量 3种冷方式 3恢培养 3子冻理 3后子力测 3芽苗 3附录A（规性录）剂的置保方法 4参考献 5T/CACM1326.14—2019T/CACM1326.14—2019鏈鏈鏈鏈前 言本标准是药用植物顽拗性种子超低温保存系列标准之一，该系列标准结构和名称如下：——T/CACM1326.1 ——T/CACM1326.2 ——T/CACM1326.3 ——T/CACM1326.4 ——T/CACM1326.5 ——T/CACM1326.6 ——T/CACM1326.7 ——T/CACM1326.8 ——T/CACM1326.9 ——T/CACM1326.10 …………。本标准按照GB/T1.1—2009《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写》给出的规则起草。本标准由中国医学科学院药用植物研究所海南分所提出。本标准由中华中医药学会归口。符丽。II三七种子超低温保存技术规程范围本标准规定了三七[Panaxnotoginseng(Burkill)F.H.Chen]种子超低温保存过程中的术语和定义、种子的选择、种子前处理、种子保存量、种子冷冻方式、恢复培养等内容。本标准适用于三七种子的液氮超低温长期贮藏。GB/T3543.6GB/T3543.7下列术语和定义适用于本文件。3.1三七 Panaxnotoginseng(Burkill)F.H.Chen（Araliaceae）（PanaxLinn.）（20153.2三七果实Panaxnotoginseng(Burkill)F.H.Chenfruits球状果球，核果熟时红色，内有种子1～3颗。3.3三七种子Panaxnotoginseng(Burkill)F.H.Chenseeds三七的播种材料为完整种子，贮藏特性判断为顽拗性种子。种子黄白色，扁球状。质较软，易切开。3.4种子低保存 seedofcryopreservation将经过前处理的三七种子置于液氮（-196℃）中保存。18月～10挑选发育饱满、均匀、健康的种子，置于4℃冰箱中保存备用（存放时间不超过1个月）。活力检测GB/T3543.7中的TTC)法检测种子生活力。随机抽取30粒种子，水浸h，剥去外层种皮，沿种脊小心将种子分成爿TTC（254TTC溶液的配制和保存方法见附录A的A.1和A.2。待保存的三七种子生活力应≥90％。计算生活力按照公式（1）进行计算：式中：A——生活力；y——有活力的种子数；x——总的种子数。h～1853%～58%降至38%～48%。按照GB/T3543.6（1301（2）2式中：W0M1（g）；M2（g）。三七种子保存量不少于200粒，以便后期的活力检测使用。三七种子超低温保存的冷冻方式为分步冷冻法，即将装有种子和玻璃化保护溶液（PVS2）的5mL冻存管（每管40粒种子）置于4℃冰箱中0.5h，取出立即放入-20℃冰柜中1h，之后迅速投入液氮中保存。PVS2的配置方法见附录A的A.3。液氮中至少冻存24h后，取出1个冻存管，立即放入40℃水浴中快速解冻3min，而后用洗涤液（DS）浸泡3次，每次5min，并用纯净水冲洗干净。DS的配置方法见附录A的A.4。取出20粒解冻后的种子，按照5.1活力检测方法进行超低温保存后的初始生活力检测。当种子生活力≥85％时视为保存成功。将剩下20粒解冻后的三七种子，播种到带有无菌滤纸的带盖发芽盒中，温度25℃～30℃，湿度70％～85％条件下培养。3附 录 A（）TTC1.00g100mL1TTCpH6.5～7.54溶液I：9.08磷酸二氢钾溶于1无菌水中；溶液II：35.81gL按I﹕II=2﹕3PVS2精密量取甘油23.8mL、乙二醇13.6mL、二甲亚砜13.6mL，称取蔗糖13.7g，溶于MS溶液中，定容至100mL，调pH值至5.8，高温高压灭菌，4℃冷藏。注：配置时需戴手套，并在通风厨内操作。DS精密称取蔗糖41.1g溶于MS溶液中，定容至100mL，调pH值至5.8，高温高压灭菌，4℃冷藏。4参考文献M，2015：11-12[2]54卷[M2004(1978)：183ShangChih-bei.PorterP.LowryII.Araliaceae[M]//FloraOfChinaBeijing:ScienceP