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文档简介

3专题1?基因工程基因工程的概念体外DNA。基因工程DNA分子水平DNA重组技术。(一)基因工程的基本工具限制性核酸内切酶(限制酶)原核生物中分离纯化出来的。DNA特定特定磷酸二酯键专一性。DNA黏性末端平末端。连接酶4DNA连接酶(E·coliDNA连接酶和T4①相同点:都缝合磷酸二酯键。

DNA连接酶)的比较:4②区别:E·coliDNAT噬菌体DNA黏性末端之间444的效率较低。

DNA连接酶能缝合两种末端,但连接平末端的之间DNA:DNA加到已有的核苷酸片段的末DNA两个DNA片段载体。②具有一至多个限制酶切点,供外源DNA片段插入。③具有标记基因,供重组DNA的鉴定和选择。质粒,DNA分子。其它载体:噬菌体的衍生物、动植物病毒(二)基因工程的基本操作程序第一步:目的基因的获取目的基因是指:编码蛋白质的结构基因。直接分离人工合成转录法_化学合成法。PCR技术扩增目的基因原理:DNA双链复制过程:第一步:加热至90~95℃DNA解链;第二步:冷却到引物结合到DNA链70~75℃,DNA。基因表达载体的构建稳定存在遗传至下一代达和发挥作用。目的基因启动子终止子标记基因DNA片段首端,是RNA聚合酶mRNA蛋白质。DNA片段尾端。的细胞抗生素基因。第三步:将目的基因导入受体细胞_是目的基因进入受体细胞内,并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程。常用的转化方法:将目的基因导入植物细胞:采用最多的方法是农杆菌转化法,其次还有基因枪法和粉管通道法等。将目的基因导入动物细胞:最常用的方法是显微注射技术。此方法的受体细胞多是受精卵。将目的基因导入微生物细胞:原核生物作为受体细胞的原因是繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对较少,最常用的原核细胞是大肠杆菌,其转化方法是:先用Ca2+ 处理细胞使其成为感受态细胞再将重组表达载体DNA分子溶于缓冲液中与感受态细混合,在一定的温度下促进感受态细胞吸收DNA分子,完成转化过程。重组细胞导入受体细胞后,筛目的基因的检测和表达首先要检测DNA上是否插入了目的基因,方法是采用DNA分子杂交技术。其次还要检测目的基因是否转录出了用标记的目的基因作探针与mRNA杂交。最后检测抗体。有时还需进行个体生物学水平的鉴定。如。(三)基因工程的应用抗虫、抗病、抗逆转基因植物,利用转基因改良植物的品质。提高动物生长速度、改善畜产品品质、用转基因动物生产药物。把正常的外源基因导入病人体内,使该基因表达产物发挥作用。(四)蛋白质工程的概念蛋白质工程是指以蛋白质分子的结构规律及其生物功能的关系作为基础,通过基因修饰或基因合成,对现有蛋白质进行改造,或制造一种新的蛋白质,以满足人类的生产和生活的需求。(基因工程在原则上只能生产自然界已存在的蛋白质)转录 翻译2细胞工程(一)植物细胞工程理论基础(原理细胞全能性全能性表达的难易程度:受精卵>生殖细胞>干细胞>体细胞;植物细胞>动物细胞植物组织培养技术离体愈伤组织―→试管苗―→植物体。转基因植物植物体细胞杂交新品种的最后一道工序。植物体细胞杂交技术过程:聚乙二醇(PEG)作为诱导剂。克服了远缘杂交不亲和的障碍。(二)动物细胞工程动物细胞培养组织单个细胞基生长和繁殖。动物细胞培养的流程:取动物组织块动物胚胎或幼龄动物的器官或组织)→单个细胞→制细胞悬液原代传代培养。贴附在瓶壁上细胞贴壁。细。动物细胞培养需要满足以下条件无菌抗生素代谢产物。②营养:合成培养基成分:糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等。通常需加入血清、血浆等天然成分。③温度:适宜温度:哺乳动物多是36.5℃+0.5℃;pH:7.2~7.4。④气体环境:95%空气+5%CO。O是细胞代谢所必需的,CO

的主要作用是维持培养液的p2 2 2H。医学研究的各种细胞。动物体细胞核移植技术和克隆动物胚胎细胞核移植(比较容易)体细胞核移植(比较难)。卵母细胞()比较大,容易操作母细胞质多,营养丰富。右图)核移植胚胎移植体细胞核移植技术的应用:①加速家畜遗传改良进程,促进良畜群繁育;②保护濒危物种,增大存活数量;生产珍贵的医用蛋白; 作为异种移植的供体;⑤用于组织器官的移植等。体细胞核移植技术存在的问题:克隆动物存在着健康问题、表现出遗传和生理缺陷等。动物细胞融合细胞杂交两个或多个。动物细胞融合与植物原生质体融合的原理基本相同,诱导动物细胞融合的方法与植的重要手段。动物细胞融合与植物体细胞杂交的比较:比较项目 细胞融合的原理 细胞融合的方法 诱导手段 用法植物体细细胞膜的流动性 去除细胞壁后诱 离心、电刺激、克服了远缘杂交胞杂交 导原生质体融合 振动聚乙二醇的不亲和性获等试剂诱导 杂种植株动物细胞细胞膜的流动性 使细胞分散后诱

除应用植物细胞

制备单克隆抗体融合 导细胞融合

杂交手段外,再加的技术之一灭活的病毒诱导单克隆抗体抗体:一个B度低、特异性差。单克隆抗体的制备过程:分离B淋巴细胞骨髓瘤细胞细胞融合杂交瘤细胞细胞培选择培养细胞注入小培养基体内培养从腹水提取体外培养从培养液提单克隆抗体繁殖专一的抗体。。单克隆抗体的作用:①作为诊断试剂:准确识别各种抗原物质的细微差异,并跟一定抗原发生特异性结合,具有准确、高效、简易、快速的优点。②用于治疗疾病和运载药物:主要用于治疗癌症治疗,可制成“生物导弹”,也有少量用于治疗其它疾病。专题3 胚胎工程(一)动物胚胎发育的基本过程早期胚胎或配子胚胎,还需移植到雌性动物体内生产后代,以满足人类的各种需求。2、动物胚胎发育的基本过程输卵管上段。有丝或略有减小。32全能细胞。分化(全能性仍比较高)。聚集在胚胎一内细胞团囊胚腔三胚层原肠腔。(二)胚胎干细胞1、哺乳动物的胚胎干细胞简称ESEK中分离出来。2、具有胚胎细胞的特性,在形态上表现为体积小,细胞核大,核仁明显;在功能上,具有发育的全能性,可分化为成年动物体内任何一种组织细胞。另外,在体外培养的条件下,可以增殖而不发生分化,可进行冷冻保存,也可进行遗传改造。3、胚胎干细胞的主要用途是:①可用于研究哺乳动物个体发生和发育规律;细胞分化ES细胞分化和细胞凋亡的机理提供了有效的手段;③可以用于治疗人类的某些顽疾,如帕金森综合症、少年糖尿病等;④利用可以被诱导分化形成新的组织细胞的特性,移植ES细胞可使坏死或退化的部位得以修复并恢复正常功能;ES器官移植的问题。(三)胚胎工程的应用(1)卵母细胞的采集和培养:促性腺激素输卵管中冲取卵子,直接屠宰母畜的卵巢人工培养成熟获能的精子受精。获能处理。受精:获能的精子和培养成熟的卵细胞溶液中完成受精过程。(4)胚胎的早期培养:中继续培血清等物质。当胚胎发育到适受体移植或冷冻保存更早的阶段移8~16个细胞)胚胎移植“供体”。(优良品种,作为受常见或存量大的品种。)地位:如转基因、核移植,或体外受精等任何一项胚胎工程技术所生产的胚胎,都必须经过胚胎移植技术才能获得后代,是胚胎工程的最后一道“工序”。力。。②早期胚胎在一定时间内处于游离状态。这就为胚胎的收集提供了可能。③受体对移入子宫的外来胚胎不发生免疫排斥反应。这为胚胎在受体的存活提供了可能。④供体胚胎可与受体子宫建立正常的生理和组织联系,但供体胚胎的遗传特性在孕育过程中不受影响。基本程序主要包括:①对供、受体的选择和处理。选择遗传特性和生产性能优秀的供体,有健康的体质和正常繁殖能力的受体,供体和受体是同一物种。并用激素进行同期发情处理,用促性腺激素对供体母牛做超数排卵处理。②配种或人工授精。。配种或输精后第7(质量桑椹或胚囊胚-196中保存。④对胚胎进行移植。⑤移植后的检查。对受体母牛进行是否妊♘的检查。胚胎分割早期胚胎24胎的技术。相同无性繁殖。桑椹胚或囊胚。(,也可用于胚胎分割。)的恢复和进一步发育。专题4 生物技术的安全性和伦理问题(一)转基因生物的安全性争论:基因生物与食物安全:反方观点:反对“实质性等同”、出现滞后效应、出现新的过敏原、营养成分改变正方观点:有安全性评价、科学家负责的态度、无实例无证据转基因生物与生物安全:对生物多样性的影响反方观点:扩散到种植区之外变成野生种类、成为入侵外来物种、重组出有害的病原体、成为超级杂草、有可能造成“基因污染”正方观点:生命力有限、存在生殖隔离、花粉传播距离有限、花粉存活时间有限转基因生物与环境安全:对生态系统稳定性的影响反方观点:打破物种界限、二次污染、重组出有害的病原微生物、毒蛋白等可能通过食物链进入人体正方观点:不改变生物原有的分类地位、减少农药使用、保护农田土壤环境(二)生物技术的伦理问题克隆人:两种不同观点,多数人持否定态度。否定的理由:克隆人严重违反了人类伦理道德,是克隆技术的滥用;克隆人冲击了现有的婚姻、家庭和两性关系等传统的伦理道德观念;克隆人是在人为的制造在心理上和社会地位上都不健全的人。肯定的理由:技术性问题可以通过胚胎分级、基因诊断和染色体检查等方法解决。不成熟的技术也只有通过实践才能使之成熟。中国政府的态度:禁止生殖性克隆,不反对治疗性克隆。四不原则:不赞成、不允许、不支持、不接受任何生殖性克隆人的实验。试管婴儿:两种目的试管婴儿的区别两种。不同观点,多数人持认可态度。否定的理由:把试管婴儿当作人体零配件工厂,是对生命的不尊重;早期生命也有活下去的权利,抛弃或杀死多余胚胎,无异于“谋杀”。肯定的理由:解决了不育问题,提供骨髓中造血干细胞救治患者最好、最快捷的方法,提供骨髓造血干细胞并不会对试管婴儿造成损伤。基因身份证:否定的理由:个人基因资讯的泄漏造成基因歧视,势必造成遗传学失业大军、造成个人婚姻困难、人际关系疏远等严重后果。肯定的理由:通过基因检测可以及早采取预防措施,适时进行治疗,达到挽救患者生命的目的。(三)生物武器(2)。危害时间长等。禁止生物武器公约及中国政府的态度专题5 生态工程一、生态工程的基本原理项目理论基础意义实例 物质循环可避免环境污染及其对系统稳定和发展无废弃物农业 生态系统的稳定性生物多样性程度高,可提高系统的抵抗力稳定性“三北”防护林建设中的单纯林问题,珊礁生态系统的生物多样性问题 生物与环境的协调与平衡可避免系统的失衡和破坏太湖富营养化问题 社会、经济、自然复合系统统一协调各种关系,保障系统的平衡与稳定林业建设中自然系统与社会、经济系统的关系问题 系统的结构决定功能原理:分布式优于集中式和环式改变和优化系统的结构以改善功能桑基鱼塘系统整体性保持很高的系统生产力珊瑚礁藻类和珊瑚虫的关系 9 原理:整体大于部分二生态工程的实例和发展前景1生态工程的实例分析类型主要原理注意问题 农村综合发展型生态工程物质循环再生原理、整体性原理、物种多样性原理①核心:沼气工程②优点:农林牧副渔全面发展;开发可更新资源,减少环境污染小流域综合治理生态工程整体性原理、协调与平衡原理、工程学原理①“综合”表现在同时考虑到生态效益和经济效益②不同气候带、不同自然条件和不同经济发展水平的地区,生态工程模式应各具特色 大区域生态系统恢复工程物种多样性原理、协调与平衡原理整体性原理工程建设中应注意的问题①考虑树种生态适应性问题种植适宜品种②考虑树种多样性,保证防护林体系稳定③不同地区应根据当地情况采取不同策略湿地生态恢复工程协调与平衡原理、整体性原理①主要措施:退耕还林②主要困难:解决迁出湖区居民的生计问题 矿区废弃地的生态恢复工程系统学和工程学原理①种植耐旱的灌木、草和树②确定合理载牧量③改良表土城市环境生态工程协调与平衡原理、整体性原理①解决大气污染措施:禁止使用有铅汽油②水污染:减少或禁止污水排放,进行污水净化一生态工程的概念 生态工程是指应用生态系统中物种共生与物质循环再生原理、结构与功能相协调原则,结合系统分析的最优化方法而设计的促进物质被分层多级利用的生产工艺系统。二、生态工程的基本原理生态工程的设计所依据的是生态学和工程学原理1、生态学原理(1)物种共生原理:自然界任何一种生物都不能离开其他生物而单独生存和繁衍,存在着共生、竞争等关系,这构成了生态系统的自我调节和反馈机制。 10 (2)生态位原理:生态系统中各种生物都占有一定的生态位,依据此原理,可构建一个具有多层次、多种群的稳定而高效的生态系统。食物链原理:食物/食物网是实现生态系统中物质循环、能量流动和信息传递的基础,物种间的食物关系是生态工程设计的重要因素。(4)物种多样性原理:生态系统中生物多样性越高抵抗力稳定性越陷越高,生态系统就越稳定(如“三北防护林虫害珊瑚礁区的生机)2、工程学原理(1)物质循环再生原理:物质能在生态系统中循环往复,分层分级利用。我国古代的“无废弃物农业”——利用收集到的一切可能的有机物质转变为有机肥料,改善了土壤结构,培育了土壤微生物,实现NK等元素的循环利用。(2)协调与平衡原理:要处理好生物与环境的协调与平衡,生态系统中的生物数量不能超过环境承载力(环境容纳量)的限度。太湖等水体富营养化,导致水葫芦和藻类疯长现象;西北衰败的杨树和繁茂的当地树种间

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