酶联免疫快速检测

酶联免疫快速检测方法在食品分析中的应用杨晓琪摘要:免疫学技术通过抗原和抗体的特异性结合反应，再辅以免疫放大技术来分析鉴别要检测的物质。免疫方法的优点是样品在进行现场检，可采用免疫技术进行筛选。由于免疫学方法具有高灵敏、高特异性、快速等优点，所以近年来，该方法在食品安全检测上也应用广泛，本文主要从酶联免疫吸附法（ELISA）、化学发光法、胶体金试纸条这几种方法在食品安全检测中的应用进行介绍。关键词：免疫检测方法;ELISA;总蛋白含量检测中图分类号：S435.622+1中国食品安全检测现状近年来，食品安全越来越受到人们的关注,已逐步成为全球公共卫生的关键问题和国际贸易中敏感的问题。近年来发生的“苏丹红”事件、“瘦肉精”事件、“问题奶”事件以及“多宝鱼”事件无不是这个问题的有力证明。将现代检测技术引入食品安全监测体系积极开展食品有害残留的检测和控制研究,对保证食品安全、维护公共卫生安全、保护人民群众身体康都有重要的意义。目前应用于食品安全的现代检测技术主要可归纳为仪器分析方法、现代分子生物学方法、免疫学方法。这些检测技术广泛应用于食品安全监测的各个领域,如动物源性食品污染中的克伦特罗（瘦肉精）的检测、氯霉素的检测;植物源性食品污染中有机磷类和氨基甲酸酯类农药的残留检测，以及重要有机污染物二口恶英、甲醛的检测等。随着生活水平的不断提高，现在人们不只是关注食品的口味和营养，而对食品的品质与安全更加重视。但近年来食品安全事故层出不穷，对食品安全检测方法的要求越来越高。对于兽药与农药残留等国标中大部分采用高效液相或气相，这种方法准确，但速度慢，且仪器的依赖程度大，不宜进行现场的检测。而免疫学方法克服了这些缺点，其将成为食品安全检测要方法的重要。2酶联免疫吸附法（ELISA）酶联免疫吸附（enzymelinkedimmunosorbentassay，ELISA）技术自20世纪70年代出现以来，就因其特异性高、敏感性强、简单迅速，不需要昂贵仪器设备，特适合于对大量样本的筛检工作等优点，成为食品安全检验中最为广泛应用的方法之一。它是将抗原或抗体结合到某种固相载体表面，把受检标本（测定其中的抗体或抗原）和酶标抗原或抗体与固相载体表面的抗体或抗原反应，加入底物显色后，根据颜色反应的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化频率很高，故可极大地放大反应效果，从而使测定方法达到很高的敏感度。ELISA在食品中真菌类毒素的检测发挥了重要作用，在安全的急性中毒作出了贡献，1999年陈福生⑴等在黄曲霉毒素B的免疫检测抗体的产生及应用中就建立了霉毒素1B1的ELISA的检测方法。南昌大学赖卫华博士⑵运用ELISA方法对OTA进行了研究，结果发现，赭曲霉毒素A无毒体系胶体金试纸条的检测限和检测时间与传统的胶体金试纸条相同，适合于赭曲霉毒素A现场筛查之用。基因工程和蛋白质工程的发展为生物酶标分析技术提供了新的技术思路和方法，弥补了其缺陷和技术局限，使其具有更广泛的检测范围、更高灵敏度与特异性和更精确的定量能力，从而使ELISA技术以新的形式应用于食品检测领域。食品安全检测的发展方向是快速、灵敏、简便。ELISA分析与其它方法相比，有以下优势：①高特异性；②高灵敏性，检测范围在ng和pg水平;③准确度高、重现性好;④一次性可处理大量样品，适宜于用定性试验进行筛选；⑤易于推广到基层。ELISA分析也存在着一些缺陷，比如：①不能同时分析多种成分；②对试剂的选择性高；③对结构类似的化合物有一定程度的交叉反应。但如果与其它检测手段联合使用，如GC、HPLC，既可增加检测的灵敏度又可降低交叉反应，还可进行更准确的定量。随着McAb技术的成熟,随着新ELISA法的不断出现，随着免疫试剂盒的商业化，ELISA分析在食品安全检测领域中一定会得到进一步的应用和推广。3发光免疫化学发光免疫分析是将灵敏的化学发光或生物发光体系与特异的抗原抗体免疫测定结合于一体的检测技术，化学发光免疫分析包含两个部分，即免疫反应系统和化学发光分析系统。化学发光分析系统是利用化学发光物质经催化剂的催化和氧化剂的氧化，形成一个激发态的中间体，当这种激发态中间体回到稳定的基态时，同时发射出光子（hM），利用发光信号测量仪器测量光量子产额。免疫反应系统是将发光物质（在反应剂激发下生成激发态中间体）直接标记在抗原（化学发光免疫分析）或抗体（免疫化学发光分析）上,或酶作用于发光底物。与ELISA检测方法相比，化学发光更灵敏，更为准确但化学发光需要借助发光仪。胥传来，彭池方等人于2005年运用化学发光方法检测克伦特罗［3残留。检出限可达0.01“g/L,检测范围为0.04〜25.8pg/L。化学发光也用于医学临床的体外诊断，费德红，彭文，颜永乾［4］对于化学发光法检测血清甲胎蛋白的方法学进行了评价。化学发光测定血清甲胎蛋白的灵敏度为1.3ng/mL，化学发光是目前测定血清甲胎蛋白较好的方法,适用于临床对血清甲胎蛋白进行检测，可对原发性肝癌进行明确诊断。据林珍、王栩等在化学发光酶免疫法测定游离三碘甲腺原酸报道［5］，利用化学发光酶免疫法已成功实现临床检测三碘甲腺原氨酸（triiodothy-ronine,T中国原子能研究所的林斯2007年的硕士论文建立了氯霉素的化学发光的检测方法，该方法学灵敏度为0.046ng/ml。王冬梅（2006）利用化学发光的方法测定氯霉素，该法测定吊白块的线性范围和检出限分别为6.0X10-5〜3.0X10-7mol/L和1.0X10-7mol/L。ChenHong等利用化学发光的方法并用鲁米诺作为发光剂检测尿酸，检测限为5.0X108M（1.5pg/l），线性范围是5.0X10到2.5X10M。刘晓宇利用化学发光法测定水和食品中痕量亚硝酸根，检测限达为3.3X10-ng/mL，回收率为99.15%~101.13%。化学发光也有其下游产品，比如化学发光试剂盒。王青，王缦等在促甲状腺素化学发光免疫定量检测试剂盒的研制一文中阐述了试剂盒的制作方法。促甲状腺素化学发光免疫测定试剂盒通过方法学鉴定表明无论是灵敏度、准确性、特异性等技术指标均达到了临床诊断的要求；同时该方法具有操作方便,反应时间短和成本低等优点，具有较广阔的市场应用前景。参考文献［1］陈福生等.黄曲霉毒素B的免疫检测抗体的产生及应用.菌物系1统，1999,18(4):409-414.赖卫华,许杨等.赭曲霉毒素A无毒体系胶体金试纸条的研制及与传统胶体金试纸条的比较.食品科学,2008,29(9)465-468.胥传来,彭池方等.化学发光酶免疫方法检测克伦特罗残留.分析化学，2005,33(5):699-702.费德红,彭文等.化学发光法检测血清甲胎蛋白的方法学评价.检验医学与临床,2008,5(5):269-270.林珍，王栩，等.化学发光酶免疫法测定游离三碘甲腺原氨酸.分析化学2008,36(5):609-613.陶文初，范立英,戴绚丽.用酶联免疫法检测猪肉中莱克多巴胺含量现代农业科技,2008(15):284-285.[4]邓省亮，赖卫华，许杨.胶体金免疫层析法快速检测黄曲霉毒素B1的研究.食品科学，2007,28(2):232-2