第五章紫外分光光度法

5-5紫外可见分光光度计一紫外可见分光光度计的基本构造（一）光源提供能量激发被测物质分子，使之产生电子光谱谱带。强度不随波长变化。光源单色器吸收池检测器信号指示系统五部分组成1功能2要求在广泛的光谱区内发射足够强度的连续光谱。具有较强的强度，稳定性好3紫外光源氢灯160~375nm产生连续光谱氘灯强度比氢灯大3~5倍氙灯汞灯荧光分光光度法4可见光源钨灯卤钨灯（二）单色器是从光源辐射的复合光中分出单色光的光学装置。能够产生光谱纯度高且波长在紫外可见区域内任意可调。强度大，稳定，寿命长功能①入射狭缝：光源的光由此进入单色器；②准光装置：透镜或返射镜使入射光成为平行光束；③色散元件：将复合光分解成单色光；棱镜或光栅；④聚焦装置：透镜或凹面反射镜，将分光后所得单色光聚焦至出射狭缝；⑤出射狭缝。利用光电效应将透过吸收池的光信号变成可测的电信号，常用的有光电池、光电管或光电倍增管。（五）

结果显示记录系统检流计、数字显示、微机进行仪器自动控制和结果处理（三）吸收池紫外石英可见玻璃（四）检测器二仪器类型1单光束分光光度计光源单色器检测器结构简单，操作方便，维修容易。适用于常规分析。国产有722型，751型，724型，英国SP500型以及BackmanDU-8型等均属于这类光度计。2双光束分光光度计国产710型，730型和740型等。吸收池光源光电倍増管单色器参比池样品池M2M3M4M1单波长双光束分光光度计原理图M1M2M3M4

反射镜I0IRIS试样参比3双波长分光光度计光源单色器单色器检测器吸收池切光器12双波长分光光度计光路示意图A=A2A15-6紫外吸收光谱的应用一定性分析1实验值与吸收光谱曲线进行比较2用经验规则计算最大吸收波长，然后与实验值比较仪器紫外-可见分光光度计二结构分析1判别顺反异构体(max,max)反式>(max,max)顺式2判别互变异构体共轭体系的大于非共轭体系max,max大于非共轭体系。反式：max：295.5nm

max:29000

顺式：max：280nm

max:105003构象的判别酮式烯醇式204nm243nm直立键的max大于平伏键的max三定量分析依据朗伯比尔定律：A=bc1单组分测定2多组分测定组分x和y互不干扰x12AyA=A1+A2+A312Axy组分y干扰组分x12Axy组分x和y互相干扰3双波长法当a和b两组分共存时，测定组分b的含量，组分a干扰。2baA/nm先确定b组分的最大吸收波长2，再求1。在1和2处a组分吸收相等。ΔA=A2-A11:A1=1bc2:A2=2bcΔA=A2–A1=(2-1)bc=(A2a+A2b)-(A1a+A1b)ΔA13ΔA=A2b-A1b=(2b-1b)cb特点：A1a=A2a

1没有参比池，可以消除操作过程中的误差。2可以消除背景，测定混浊及高浓度的样品。3消除了吸收池带来的误差。一阶导数信号与试样浓度呈线性关系测定灵敏度依赖于摩尔吸光系数对波长的变化率dε/dλ。吸收曲线的拐点处dε/dλ最大，故其灵敏度最高(见图）。同理可以导出其二阶和三阶导数光谱（略）4导数分光光度法