性病实验室检查

性病实验室检查第一页，共六十五页，2022年，8月28日一、淋球菌实验诊断（一）、涂片染色检查：原理

淋病是由淋球菌感染引起的泌尿生殖道化脓性炎症的一种常见性病。淋球菌为革兰氏染色阴性双球菌，位于脓细胞内，呈肾形成双成对排列。淋病患者的尿道或宫颈脓性分泌物中有大量脓细胞，可通过分泌物涂片革兰氏染色直接镜检查找到典型的细胞内革兰氏阴性双球菌，可作出初步诊断。第二页，共六十五页，2022年，8月28日方法

首先用无菌生理盐水拭子洗尿道口，然后用手由后向前挤出其脓性分泌物，再用棉拭子插入尿道口取材，将分泌物均匀薄层涂布于载玻片上。女性取宫颈或尿道分泌物涂片。凉干作革兰氏染色。

(革兰氏染色法：标本涂片，干燥，火焰固定，依次行结晶紫液初染，碘液媒染，酒精脱色，，复红复染，水洗后凉干，油镜检查)第三页，共六十五页，2022年，8月28日结果：

显微镜下革兰氏染色淋球菌和多形核白细胞均染为红色，但淋球菌色较浓。急性男性患者尿道分泌物中见大量白细胞及细胞内Ｇ－双球菌，即镜检阳性。第四页，共六十五页，2022年，8月28日意义1.直接涂片染色检查简便、快速、低廉、且具有一定的敏感性和特异性。对急性男性尿道炎患者敏感性可>90％；镜检阳性可诊断淋球菌感染，但阴性不能除外诊断，需作培养检查。2.对于女性病人宫颈分泌物中杂菌较多，不易分辨，易造成假阳性，ＷＨＯ不推荐用镜检而用培养法作为女性淋病的诊断依据。3.慢性病人或用药后的病人因症状不典型，不易查到细胞及G－双球菌，故以培养法进行诊断；4.其它部位标本如咽部、眼结膜、直肠肛门等部位标本一般不采用直接镜检而采用培养法确诊。

第五页，共六十五页，2022年，8月28日（二）、培养检查

原理如果标本中有淋球菌，则细菌在适当的培养基（血琼脂培养基及巧克力琼脂培养基）上和适宜的培养条件下能生长繁殖，根据其菌落形态、大小、边缘、颜色及生化反应可以作出细菌的鉴定。

第六页，共六十五页，2022年，8月28日方法1、标本采集：淋球菌非常娇嫩，对环境抵抗力低，ＰＨ值温度、营养物质等均可影响淋球菌的检查结果，如采集不当，就会出现阴性结果。（1）.尿道标本：急性尿道炎有脓性分泌物，可用棉拭子伸入尿道2－4cm，停留数秒钟取分泌物进行检查。无尿道分泌物或分泌物少时，取前列腺液检查。

第七页，共六十五页，2022年，8月28日（2）.宫颈标本：取宫颈分泌物培养时不能消毒，先用无菌棉拭子擦去宫颈表面分泌物，再用另一根棉试子插入宫颈口1－2ｃｍ，轻轻转动，停留20－30秒钟，让拭子充分沾取较多的分泌物（3）.肛门直肠标本：将棉拭子插入肛门1－2ｃｍ，轻轻转动，停留20钞钟取出。如果棉拭子碰到粪便应换一根拭子重取。必要时可用直肠镜取材。（4）.其它部位标本：眼结膜炎者取结膜分泌物，淋菌性咽炎用无菌棉拭子取喉、咽部脓性分泌物，播散性淋球菌感染的病人取静脉血5ｍl进行细菌培养。

第八页，共六十五页，2022年，8月28日2、培养基：国外常用的有Ｔhａｙｅｒ－Ｍａｒｔｉｎ（Ｔ－Ｍ）培养基、Ｎｅw

YｏｒkＣｉｔｙ（Ｎ．Ｙ．Ｃ）培养基、Ｍａｒｔｉｎ－Ｌｅｗｉｓ（Ｗ－Ｌ）培养基。国内的有桂敏培养基,巧克力琼脂培养基。均应为选择性培养基,在培养基中加入抗生素(如多粘菌素,万古霉素、制霉菌素等)抑制杂菌生长,同时加入促淋球菌生长的增菌剂(如氨基酸、维生素、嘌呤等)。

第九页，共六十五页，2022年，8月28日3、培养条件：淋球菌培养条件高，温度、湿度、ＰＨ值等均可影响淋球菌生长，繁殖。最适生长条件：

35℃～36℃，含5%～10%CO2，湿润（70%湿度）的环境。使用CO2培养箱最佳,若无可用虹缸培养。

第十页，共六十五页，2022年，8月28日结果：淋球菌在平皿培养基上培养24－48小时后，形成直径0.5-1mm左右的圆形,半透明或灰白色,表面光滑，湿润，凸起，边缘整齐的菌落，用接种环触之有粘性。菌落形态特征也为细菌鉴定的标准之一。涂片作革兰染色发现有肾形成对的革兰阴性双球菌。第十一页，共六十五页，2022年，8月28日第十二页，共六十五页，2022年，8月28日淋球菌的鉴定特征菌落形态淋球菌样革兰染色革兰阴性双球菌氧化酶试验阳性过氧化物酶试验阳性快速糖发酵试验G+L-M-S-β-内酰胺酶阳性﹙PPNG﹚或阴性第十三页，共六十五页，2022年，8月28日氧化酶实验第十四页，共六十五页，2022年，8月28日意义

1.

培养及鉴定结果阳性可确诊淋球菌感染。分离培养、鉴定淋球菌是诊断淋病的“金标准”，也是目前ＷＨＯ推荐的诊断淋病的方法。2.除男性急性淋病外，男性慢性淋病、女性淋病及其它部位标本如咽部、眼结膜、直肠、肛门淋球菌感染应采用培养法确诊。3.培养的敏感性81~100%。4.培养的优点有：

—

特异性极高（100%）；

—

可发现无症状淋球菌感染患者；

—

可用于进一步作药敏试验；

—

可用于治疗后的判愈试验。第十五页，共六十五页，2022年，8月28日二、支原体实验诊断分离培养：原理

生殖道支原体主要有三种，即解脲支原体(Uu)、人型支原体(Mh)、生殖支原体(Mg)，其中Uu与Mh较常见。支原体肉汤培养基中含有酚红指示剂，并含有尿素、精氨酸或葡萄糖。Uu有尿素酶，分解尿素产生氨，使pH值上升，培养基的颜色由黄变为粉红色。Mh分解精氨酸产生氨，也使培养基变为粉红色。而Mg分解葡萄糖，产生乳酸，使SP-4肉汤培养基由粉红变为黄色，可初步判定有支原体生长，再将液体培养物转种到固体培养基，在合适的条件下，形成具特征性油煎蛋样集落。但Mg较Mh、Uu培养不易生长。第十六页，共六十五页，2022年，8月28日方法1、标本采集：男性用无菌棉拭子插入尿道2—4cm，轻轻转动取出分泌物，或取前列腺液；女性先用无菌的脱脂棉擦去阴道内粘液，用无菌棉拭子插入宫颈内1—2cm处旋转取材；或无菌试管收集清晨首次中段尿离心沉渣。标本采集后立即接种培养，不能立即培养的要放入运送培养基或保存液中。第十七页，共六十五页，2022年，8月28日2、将标本分别洗人Uu、Mh、Mg（SP-4）液体培养基，置37℃温箱培养，每日观察。Uu培养1—2天，Mh培养2—3天，Mg培养约35—140天颜色才会变化。3、培养基发生颜色变化后取0.2ml转种到固体培养基，在固体培养基上，Uu培养3—5天，Mh培养4—5天，Dienes染色，低倍显微镜下观察。第十八页，共六十五页，2022年，8月28日结果1、液体培养基培养：Uu、Mh液体培养基颜色由黄色变红，透明无混浊，则可初步判断Uu或Mh生长；若颜色无改变，则为阴性。2、固体培养基培养：固体培养基培养后，经Dienes染色，低倍显微镜下观察，见具特征性油煎蛋样集落，可初步确诊，必要时行PCR鉴定。

第十九页，共六十五页，2022年，8月28日意义1、支原体可正常寄居在人体腔道的黏膜上，在机体免疫力低下或黏膜受损的情况下，寄居的支原休可发展成致病原，通过与宿主细胞膜问的相互作用，释放有毒的代谢产物或向宿主细胞吸取自身需要的营养成分，从而引起细胞膜损伤，与非淋菌性尿道炎(NGU)的发生密切相关，引起前列腺炎、附睾炎、不育症及妇女泌尿生殖道炎症。

第二十页，共六十五页，2022年，8月28日2、支原体的分离培养是确诊支原体感染的“金标准”，使液体培养基颜色改变的影响因素较多，单独的液体培养阳性不能确诊，还应行固体培养基培养鉴定。但Mg生长缓慢，分离培养的难度较大，用分离培养方法检测Mg，在临床实际应用中尚有一定难度，目前主要应用DNA探针及PCR检测Mg。3、34%的正常男性尿道及40%—80%已婚妇女宫颈可查出Uu，故Uu阳性者，应结合临床综合判定。若支原体阳性，临床又有泌尿生殖道炎症，在其他病原体检查阴性的情况下，可考虑支原体的感染。第二十一页，共六十五页，2022年，8月28日三、沙眼衣原体实验诊断

第二十二页，共六十五页，2022年，8月28日沙眼衣原体感染的致病谱

第二十三页，共六十五页，2022年，8月28日男性尿道炎的诊断标准

尿道分泌物或尿道拭子涂片检查:至少在5个1000X视野中，每个视野的多形核白细胞(PMN)≥5个清晨首次尿沉渣涂片检查:至少在5个400X视野中，每个视野的PMN≥15个

第二十四页，共六十五页，2022年，8月28日诊断沙眼衣原体感染常用的实验室方法①细胞培养法；②抗原检测试验,包括直接免疫荧光法和快速抗原检测。

第二十五页，共六十五页，2022年，8月28日(一)细胞培养法

优点

此法是目前检测沙眼衣原体感染“金标准”

敏感性80％～90％,特异性100％可用于判愈可用于确诊缺点费时（需3～5天），费力，技术要求高不宜作为临床常规检查不宜用于大规模的筛查和流行病学调查第二十六页，共六十五页，2022年，8月28日（二）、直接免疫荧光法原理用荧光素标记的对沙眼衣原体单克降抗体与标本中的沙眼衣原体的抗原结合，单克降抗体标有荧光素，在荧光显微镜下阳性者可见到亮绿的原休和网状休。第二十七页，共六十五页，2022年，8月28日直接免疫荧光法原理针对衣原体的单克隆抗体与相应的抗原结合，单克隆抗体标有荧光素，在荧光显微镜下，阳性者可见到亮苹果绿的原体和始体第二十八页，共六十五页，2022年，8月28日方法1、男性用无菌棉拭子插入尿道2—4cm，女性先用无菌的棉签擦去宫颈口粘液，用无菌棉拭子插入宫颈内1—2cm，旋转取带上皮细胞的标本，涂于玻片上，空气干燥、丙酮固定；2、加荧光素标记的单克隆抗体；3、荧光显微镜观察。第二十九页，共六十五页，2022年，8月28日结果阳性标本可见到沙眼衣原体原体，为单个、针尖样大小、发出亮绿色荧光的颗粒。对于泌尿生殖道标本，如果每片中原体数≥10个，结果为阳性第三十页，共六十五页，2022年，8月28日意义1、沙眼衣原体为细胞内寄生物致病性微生物，引起泌尿生殖道感染，如尿道炎、宫颈炎和盆腔炎等，若阳性则可诊断NGU。2、直接免疫荧光法检测沙眼衣原体操作简便、快速，特异性好（83-99%），但敏感性欠佳（70-95%），且受人为因素影响大，故阴性不能排除衣原体感染。

第三十一页，共六十五页，2022年，8月28日（三）、抗原快速检测原理在两块长方形塑板中夹有检测滤纸条，滤纸条吸附有乳胶颗粒结合的沙眼衣原体单克隆抗体。在塑板的“样本窗”加入从标本中提取的抗原，衣原休抗原与衣原体单抗结合形成复合物，通过毛细作用，渗入“结果窗”，在此结合有针对衣原休抗原的制动抗体，如标本中含衣原体抗原则见细线形成。第三十二页，共六十五页，2022年，8月28日（三）、抗原快速检测

免疫扩散试验（Clearview）原理在两块长方形塑板中衬有检测滤纸条，滤纸条加样窗处吸附有标记沙眼衣原体单克隆抗体的胶金颗粒。在塑板的样本窗加样，发生抗原抗体反应，通过毛细作用，渗入结果窗，此处有衣原体抗原的制动抗体，发生沉淀反应，见细线形成第三十三页，共六十五页，2022年，8月28日方法

以“立明”（ClearviewChlamydia）免疫扩散试验为例：男性用无菌棉拭子插入尿道2—4cm，女性先用无菌的棉签擦去宫颈口粘液，再用无菌棉拭子插入宫颈内1—2cm，旋转取带上皮细胞的标本；

第三十四页，共六十五页，2022年，8月28日将标本置于含0.6ml抗原提取液的塑料管中置80℃水浴中10分钟以释放抗原将拭子沿管壁挤压，弃之加5滴提取液于样本窗,15分钟内观察结果第三十五页，共六十五页，2022年，8月28日男性尿液检查方法第三十六页，共六十五页，2022年，8月28日结果

阳性标本在结果窗见一条细线。另外，无论标本为阳性或阴性，都应在质控窗显示一条细线，表明试剂质量合格，试验步骤正确第三十七页，共六十五页，2022年，8月28日意义

此法诊断沙眼衣原体感染简便、快速，敏感性为87％，特异性为98.8％。临床最常用。缺点是标本中需要足够数量的沙眼衣原体抗原，敏感性不够好，阴性不能排除衣原体感染。

第三十八页，共六十五页，2022年，8月28日四、梅毒实验检查

（一）螺旋体暗视野显微镜检查原理

梅毒螺旋体感染人体后，引起皮肤、粘摸及淋巴结的损害，并可在皮肤、粘摸及淋巴结穿刺液中查到梅毒螺旋体。普通光学显微镜下梅毒螺旋体螺旋体半透明，折光性强，不能看见。用特殊的聚光器代替普通聚光器装置的暗视野显微镜，光线从聚光器边缘斜射到显微镜载玻片上，而视野中无直射光线，如载玻片无标本则一片黑暗；当标本中有螺旋体时，光线经过螺旋体时因折射而发光。用暗视野显微镜检查法不但可以观察有无螺旋体，还可以观察螺旋体的运动形态。

第三十九页，共六十五页，2022年，8月28日方法１、标本采集：选择发病时间短的损害（硬下疳、扁平湿疣、溃疡、脓疮疹、粘膜斑），有痂者去痂，先用无菌棉球或纱布蘸生理盐水，将皮损拭净，轻压皮损至渗液（避免出血）。然后用载玻片印取渗液，立即检查，未破溃者用手术刀刮破皮疹，取渗出液。若从淋巴结取材，以无菌操作法用注射器吸取ml生理盐水，穿刺入淋巴结，再回吸数次，最后将吸取液涂玻片上，立即检查。２、检查：标本置于载玻片上，加一滴生理盐水，盖上盖玻片，在暗室中于暗视野显微镜上油镜观察。螺旋体半透明，折光性强，不仅能看到螺旋体形态，还可观察运动形态。

第四十页，共六十五页，2022年，8月28日结果

在暗视野显微镜下梅毒螺旋体折光性强，呈螺旋形，较纤细，两端尖细，其长度6-14um.8-14个螺旋，运动缓慢且有规律，方式有旋转、伸缩或蛇行运动，符合通过典型的形态、大小、运动方式，则暗视野检查阳性。第四十一页，共六十五页，2022年，8月28日第四十二页，共六十五页，2022年，8月28日意义1、暗视野显微镜查阳性，临床上可确诊梅毒。特别对一期梅毒硬下疳，肿大淋巴结，二期梅毒皮肤粘膜损的诊断有重要价值，尤其使用于早期梅毒血清学阴性时。但阴性结果不能排除梅毒感染。2、该方法具有快速、方便、可靠的特点，以被WHO确定为性病实验室必备项目之一。3、口腔中含有其他密螺旋体，与梅毒螺旋体不易区别，暗视野显微镜查不推荐于口腔皮损材料。第四十三页，共六十五页，2022年，8月28日（二）、梅毒血清学检查原理

人体感染梅毒螺旋体后可产生多种抗体，一方面，在组织破坏过程中可释放一种具有抗原性的类脂质（心磷脂），能刺激机体产生相应的抗体，为非特异性的，称为反应素。另一方面，机体产生针对梅毒螺旋体的抗体，为特异性的。故梅毒血清学试验包括在体外用心磷脂为抗原检测患者血清中抗心磷脂抗体的非特异性血清学试验（非螺旋体抗原血清学试验）和用死的或活的螺旋体或其成分来检测患者血清中抗螺旋体抗体的特异性血清学试验（螺旋体抗原血清学试验）。

第四十四页，共六十五页，2022年，8月28日方法心磷脂为抗原检测患者血清中抗心磷脂抗体，可定性、定量实验，包括a性病研究实验室试验(venerealdiseaseresearchlaboratory，VDRL)b不加热血清反应素试验(unheatedserumreagintest，USR)c快速血浆反应素环状卡片试验(rapidplasmareagincirclecardtest，RPR)d甲苯胺红不加热血清反应素实验（Toluidineredunheatedserumtest.TRUST）第四十五页，共六十五页，2022年，8月28日第四十六页，共六十五页，2022年，8月28日2、特异性血清学试验

用死的或活的螺旋体或其成分作抗原来检测患者血清中抗螺旋体抗体。包括1梅毒螺旋体荧光抗体吸收试验((fluorescenttreponemalantibodyabsorptiontest，FTA-ABS)2梅毒螺旋体血球凝集试验(treponemapallidumhemagglutinationtest.TPHA)3梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验(treponemapallidumparticleassay，TPPA)第四十七页，共六十五页，2022年，8月28日第四十八页，共六十五页，2022年，8月28日意义：1、非特异性血清学试验阳性可能表示：现症感染、接受或未接受过治疗的近期感染，以及生物学假阳性；2、特异性血清学试验阳性结果表示：现症感染、接受或末接受过治疗的近期感染，既往曾经感染。

第四十九页，共六十五页，2022年，8月28日3、非特异性血清学试验敏感性高，特异性低，可出现假阳性；早期梅毒患者经充分治疗后，滴度逐渐下降，半年到2年大部分非特异性血清学试验阴转。早期未经治疗者到晚期，部分病人中反应素也可以减少或消失。故非特异性血清学试验可作为筛选试验及观察疗效，复发及再感染。第五十页，共六十五页，2022年，8月28日4、特异性血清学试验因其敏感性高，特异性强，可作为证实试验及排除假阳性。在多数情况下，一旦感染了梅毒，特异性血清学试验抗体阳性可保持数年，甚至终生阳性，故定性的特异性血清学试验不作为疗效判定。第五十一页，共六十五页，2022年，8月28日5、非特异性血清学试验生物学假阳性有多种疾病：①急性或慢性传染病：风疹、麻疹、水痘、疟疾、上呼吸道感染、病毒性肝炎，活动性肺结核、麻风，肺炎球菌性肺炎等；②其它疾病：SLE、类风湿性关节炎、风心病、DLE、肝硬化、慢性肾炎、系统性硬化症、自身免疫性溶血性贫血等；③身体状况改变：麻醉剂成瘾、妊娠、年老等。但一般假阳性血清抗体滴度<1：4，可用定量的方法排除或用特异性螺旋体抗原试验进行确诊。第五十二页，共六十五页，2022年，8月28日6、梅毒感染的较早期，机体尚未产生抗体，非特异性血清学试验和特异性血清学试验均可阴性，需追踪观察。

第五十三页，共六十五页，2022年，8月28日试验结果意义RPR+，TPPA-RPR+，TPPA+RPR-，TPPA+RPR-，TPPA-RPR假阳性现症梅毒，治愈的晚期梅毒极早期梅毒，治愈的梅毒排除梅毒感染极早期梅毒梅毒血清学试验的结果解释举例第五十四页，共六十五页，2022年，8月28日●梅毒的复查

梅毒治疗后的随访：第一年每3个月复查一次，以后每年复查一次，连续2~3年。如果在12~24个月内未下降4倍（即2个稀释度）或有提示为梅毒进展的症状和体症，则应做N梅毒的评价，并予相应治疗。

妊娠梅毒：分娩前应每月检查一次RPR，如3个月内血清不下降二个稀释度，应予复治，分娩后按一般梅毒随访。

先天梅毒：经过治疗的梅毒孕妇所生婴儿，出生时如血清反应阳性，应每月检查一次，连续6个月，如血清反应阴转，且未出现先天梅毒的临床症状，则可停止观察。出生时阴性，应于出生后1月、2月、3月及6月复查，至6个月时血清仍为阴性，且无先梅症状，可停止观察。第五十五页，共六十五页，2022年，8月28日五、尖锐湿疣实验诊断

尖锐湿疣的病原体为人乳头瘤病毒(humanpapillomavirus,HPV)感染引起。运用基因克隆及分子杂交已发现HPV有100多个亚型，在尖锐湿疣中鉴定出20多种病毒亚型。外生殖器疣的发生主要与HPV1、2、6、10、11、16、18、31、33、35、42、51型的感染有关。其中6、11两型最常见于肛门及生殖器部位的尖锐湿疣，而16、18、31、33、35则与亚临床感染及生殖器肿有关。尖锐湿疣临床表现典型时，诊断并不困难，但病变早期不典型病例则借助实验室检查诊断。第五十六页，共六十五页，2022年，8月28日1、病理检查：

常规切片，HE染色，病理变化主要表现为：轻度角化过度有角化不全棘层细胞增厚，乳头瘤样增生和/或假上皮瘤样增生。颗粒层和棘层上部可见空泡细胞，多呈灶性。真皮水肿，毛细血管扩张，周围有淋巴细胞浸润。

第五十七页，共六十五页，2022年，8月28日2、醋酸白试验：原理人乳头瘤病毒（HPV）感染的皮损可产生异种蛋白，在5％的醋酸作用下该蛋白被凝固，使组织变白，不明显的疣变得肉眼可见，可用于检测HPV的亚临床感染。第五十八页，共六十五页，2022年，8月28日方法

用棉签蘸5％醋酸溶液涂于可疑皮损处或用浸过醋酸溶液的用纱布敷在皮损上，5分钟（肛周皮损10-15分钟）后肉眼观察。结果

HPV感染部位呈现白