leicasp8激光扫描共聚焦显微镜快速操作手册

：系统的组系统组 光路示意 系统的使开机顺 软件界面简 在显微镜下观察样 共聚焦图 XYZ三维扫描（Z- 时间序列扫描（Timeseriesorxyt波长扫描（xyλ HyD检测 图像的保存及输 关 系统的LeicaSP8可见波长激光或白激 15UVIS,HIVIS或VISIR的光路镀声光调制器 16扫描视场旋转镜（Abbe-Konig旋转红外激光 17在NND位置上的反射光检测器电光调制 紫外激光 19在NND位置上的透射光检测器AOTF或直接调制器 20正方型针STED激光 21Fluorifier盘Setlight二极 22X1出口接口AOBS,及其他选配 23外置检测器用于FRAP的光束增强镜 24色散棱红外激光耦 25分开的荧光光与CS2紫外光路耦合的紫外激 26最多5个光电倍增管或4个HyD检测STED激光耦 *选配组开机顺序（硬件标号请 （1）因为FSU和CSU硬件的电源控制不同，请分别按照如下步骤开机FSU系CSUMccpePower注意：显微镜控制器的开关一般是常开的，在打开“CMcc”按钮后指示灯先按电脑主机上的电源按钮启动电脑，再打开显微镜控制的开关，然后依次打开“aereLere将“LaserEmission”上的激光开关旋至（按绿色的（按绿色的Power按钮，如右图闸Power（4）“Cigtin”下拉菜单中选择需要的（simult“Mise”菜单中选择显微镜型号（esat”选项为快扫功能，可按需要打开或关闭，只有配备了快扫功能的系统才会显示该选项，点击“KMark&Find和Matrix功能不能使用。点击界面最上方“Configuration”按钮进入配置界面→点击左边“LaserConfig”（OFF→ONArgon软件界面简（Aie（Poess工具和文件管理界面切换：Experiments界面下显示当前拍摄和打开的 在显微镜下观察样品按钮进行选择（如下图（在显微镜设置软件LeicaAFHardwareConfigurator（如果是电动载物台，需通过手轮调节上的标注与荧光颜色的对应关系为：I3-共聚焦图像调用已有的设置：选择“Load/Savesinglegainoffset都会自动设置，包含几种最常用际情况对参数进行优化（如后述，并以新的光输出功率、改变分光镜、改变所选PMT、调PMTPMTgain或offset1光镜488激光可选择DD488/552、失85%的激光能量和15%的荧光能量，一般在当现有分光镜当前激光SequentialScan:若的射光谱有，为减少串色，成像时每种要单独激发，或者说，测一种。可用SequentialScan选择扫描模默认模式为xyz扫描，是最常xy扫描和z轴层切（xyz扫描。还可在下拉xyzλ，xyzλt等。设置扫描参（format（seedil线平均（lineaverage、面平均aveage分辨率：默认值为512×512。也可选择更低或更高分辨率。分辨率越速度。可选择双向扫描（BidirectionalX）来达到更高速度，这时可能需要进行相位校准（Phasecorrection。average预览图注意：一旦预览开始，激光开始照射样品，为减少对样品的，应快速操作，尽量减少预览的时间。预览应达到以下目的：○1找到最适合观察的焦平面2使图像亮度动态下图；或者调节手轮或显微镜镜体上的调焦旋钮（见第8页图。图像亮度动态范围可通过调节激光输出功率（9页图、SmartGain参数的调整原则：一般情况下，Gain值的正常范围为500—1000；SmartOffset的调节：可扣除背景噪音，但标本信号也有一定程度的扣除。原则上，在保证图像质量的前提下，DigitalOffset值越接近于0越好；PMTgain800HyDgain值大于100%时荧光亮度还是不够时，可以考虑适当增加激光强度。在做活细胞图像亮度动态范围的判断方法：伪彩GlowOverUnder（GlowOU”和灰度图三档之间切换。在GlowOU模节SmartGain使图像中仅少数像素点呈蓝色，调节SmartOffset来降低图像的背景。荧光图像SmartOffset的默认值为0%，通常应将其调为负值以使图像背景呈绿色。下图中B图亮度及背景值设置均未达最优化值，调节SmartGain和Smart对于HyD检测器，其背景噪声很低，无需通过调节SmartGain来降低背景。对透射光图像，同样可以调节透射光PMT图扫描分辨率的设置原则：“OptimizexyFormat”按钮（如下图，由系统自动设置最佳分辨率。根据Nyquist采样原则，像素点大小（PixelSize）应为物镜侧向分辨率（即xy平面分辨率）的2/5~1/2。物镜分辨率可点击物镜参数表按钮从弹出的界面读XYZ三维扫描（Z-选择Z设置光路参数，方法同前设置Z轴范点击“Live”进行图像预览，调节z轴至层切所需的起点，点击扫描起始设Z此时xyz层切菜单中显示的“z-stepsize（相邻两个光切面的间距和“Nrofsteps（optimied采选择合适的分辨率和扫描线速度，点击”Start”进行xyz图像3D展 umprojection）:将所有Z平面的图像信息选取最正交剖面方式按钮（Orthogonalsection）:分别以XY、YZ、XZ三个方向显示3D立体模式按钮（Openin3Dviewer）:打开3D将所观察到的图像输出成。时间序列扫描（TimeseriesorxytMinimizestopped”或“Frames波长扫描（xyλ波长扫描常用于自发荧光或新发Begin（Width（（选择所用PMT检测器（或HyD检测器。；改、备注信息等，点击“OK”，新数据即被存入系统的数据库。HyD检测器 特别注意：1使用HyD2不要用HyD图像文件的保存及输出图像文件的操作“Acquire”的”Experiment”下显示的所有图像文件名称，默认本次开机后的所有图像都放在一个文件夹下，文件名，可进行多种操作。选择“SaveExperiment”即可将当前文件夹下的所有保存为一个文件，文件保存格式为*.lif原始文件，只能通过LeicaLASAF、LASAFLite或其他专业图图像文件的输出（.tiff或.jpeg，