不同预张力下乙醇的血管活性差异及其机制研究课件

不同预张力下乙醇的血管活性差异及其机制研究

指导老师：夏强教授

钱令波高琴钱韵罗芳军冯磊魏吉清吴笑张昕霞卓婷婷郑群

0301）BACKGROUND酒作为一种世界性的饮料，以其独特的方式浸润着社会。但长期过量饮酒会对健康带来严重影响。早在1985年，世界卫生组织（WHO）就把过量饮酒带来的问题确定为全球性的公共卫生健康问题。醉酒与脂肪肝、肝硬化、胃炎、胃溃疡、冠心病和中枢神经系统功能障碍等疾病的发生均有密切关系。近年来，随着心血管系统疾病发病率的逐渐增高，研究乙醇对心血管系统的影响已越来越受到人们的关注。BACKGROUND乙醇对心血管系统功能的影响十分明显，大量研究称，长期大量饮酒可引起高血压、心绞痛、脑卒中，可产生酒精性心肌病和心律失常

。但新近研究表明，给药途径和剂量不同的乙醇对心血管的效应也有所不同。研究表明，不同浓度乙醇对内皮细胞NO、内皮素等物质的分泌量存在影响，因此，血管内皮存在与否可能会影响乙醇的血管活性作用。同时还观察到，乙醇可引起机体许多组织细胞钠离子通道、钾离子通道、钙离子通道和静息及动作电位的改变。因此，乙醇的血管效应也可能通过影响血管平滑肌细胞离子通道的活性而介导。有人还发现，饮酒时情绪激动容易醉酒，由此我们猜测，不同预张力下血管对乙醇的反应性存在差异；在高血压情况下或临床应用降压药物时，可能会影响乙醇对血管的作用。OBJECTIVE研究不同浓度乙醇对离体大鼠胸主动脉环的作用：收缩or舒张？

观察不同预张力对乙醇血管活性的影响探讨乙醇对血管的作用是否由钙通道介导：电压依赖性钙通道？受体操纵性钙通道？Ryanodine

受体？IP3受体？SD大鼠organbath系统METHODSMETHODS胸主动脉环的制备取大鼠胸主动脉→

置于冰K-H液→去除周围结缔组织→剪成约3、4mm宽的8段血管环

→置于含K-H液的浴槽内→将血管环张力调至预张力（3,1,1.5,2,2.5,3,3.5,4g）

→平衡60min。一、乙醇对PE及KCl预收缩的主动脉环张力的影响METHODS

实验分组乙醇对PE及KCl预收缩的内皮完整主动脉环张力的影响乙醇对PE及KCl预收缩的去内皮主动脉环张力的影响间隔5min累积加入乙醇（0.1‰～3‰）测定不同浓度乙醇灌流时血管环的平均张力

加入KCl（610-2mol/L）

加入PE（10-6mol/L）去内皮内皮完整待收缩稳定洗脱待收缩稳定间隔5min累积加入乙醇（0.1‰～3‰）METHODS二、乙醇对CaCl2量效曲线的影响胸主动脉环的制备使用去内皮胸主动脉环，预张力均设为3g（最适预张力），其余如前述标本的预处理如前述实验分组换成无钙K-H溶液→加入3‰（最大效应浓度）乙醇→孵育30min→再换无钙K-H溶液→加入终浓度0.06mol/LKCl溶液或终浓度10-6mol/L的苯肾上腺素（PE）诱发血管收缩达稳定后→每隔5min累积加入CaCl2（0.25～5mmol/L）→观察血管环张力的变化。（见下图）无钙K-H液灌流

METHODSKCl对照KCl+乙醇

PE对照

PE+乙醇30min后待收缩稳定加入KCl（0.06mol/L）再换无钙K-H液间隔5min累积加入CaCl2（0.25-5mmol/L）观察血管环张力变化无钙K-H液灌流

无钙K-H液灌流

无钙K-H液灌流

再换无钙K-H液再换无钙K-H液再换无钙K-H液加入KCl（0.06mol/L）加入PE（10-6mol/L）加入PE（10-6mol/L）加入终浓度3‰乙醇

孵育30min加入终浓度3‰乙醇30min后孵育30min待收缩稳定待收缩稳定待收缩稳定间隔5min累积加入CaCl2（0.25-5mmol/L）

间隔5min累积加入CaCl2（0.25-5mmol/L）

间隔5min累积加入CaCl2（0.25-5mmol/L）观察血管环张力变化观察血管环张力变化观察血管环张力变化METHODS实验分组（见下图）

（1）Ver组：在去内皮的血管实验中，加入10-6mol/L的L型钙通道阻断剂维拉帕米（Ver），孵育30min后，洗脱，加入PE（10-6mol/L）待收缩稳定后，再观察血管环张力的变化20min。（2）Ver+乙醇组：在去内皮的血管实验中，加入10-6mol/L的Ver，孵育30min后，洗脱，加入PE（10-6mol/L）待收缩稳定后，再加入终浓度3‰乙醇，共孵育20min，观察血管环张力的变化。（3）Ver+RR+乙醇组：在去内皮的血管实验中，加入10-6mol/L的Ver，5min后，加入10-5mol/L的ryanodine受体阻断剂钌红（rutheniumred,RR），共孵育25min后，洗脱，加入PE（10-6mol/L）待收缩稳定后，再加入终浓度3‰乙醇共孵育20min，观察血管环张力的变化。（4）Ver+HP+乙醇组：在去内皮的血管实验中，加入10-6mol/L的Ver，5min后，加入50mg/L的IP3受体阻断剂肝素（heparin,HP），共孵育25

min后，洗脱，加入PE（10-6mol/L）待收缩稳定后，再加入终浓度3‰乙醇共孵育20min，观察血管环张力的变化。METHODSVer(10-6mol/L)30minVer组Ver+乙醇组

Ver+RR+乙醇组

Ver+HP+乙醇组PE(10-6mol/L)30min稳定10minRR10-5mol/L5min

稳定10minHP50mg/L5min

稳定10min乙醇（3‰）

20min乙醇（3‰）

20min乙醇（3‰）

20minRESULTS一、乙醇对KCl预收缩的主动脉环张力的影响Fig.1A.Concentration-dependenteffectofethanol(0.1‰-3‰)in6×10−2MKClprecontractedrataorticringswithendotheliumatdifferentrestingtension(1g-4g).DataareexpressedasMean±SD(n=3-5).*P<0.05,vs.Control-3g.RESULTS二、乙醇对PE预收缩的主动脉环张力的影响Fig.2A.Concentration-dependenteffectofethanol(0.1‰-3‰)in10-6MPEprecontractedrataorticringswithendotheliumatdifferentrestingtension(1g-4g).

DataareexpressedasMean±SD(n=3-6).

RESULTSFig.2B.Concentration-dependenteffectofethanol(0.1‰-3‰)in10-6MPEprecontractedrataorticringswithoutendotheliumatdifferentrestingtension(1g-4g).

DataareexpressedasMean±SD(n=3-6).*P<0.05,**P<0.01,vs.Control-3g.RESULTS三、乙醇对CaCl2量效曲线的影响Fig.3A.Effectofethanolat3‰ontheCa2+(2.510-4-510-3M)-inducedcontractionofrataorticrings(theresttensionwas3g)withoutendotheliumpretreatedwith6×10−2MKCl.DataareexpressedasMean±SD(n=5-6).*P<0.05,**P<0.01,vs.Control.RESULTS四、维拉帕米（verapamil,Ver）预处理下乙醇的血管作用Fig.4.Effectofethanolat3‰inrataorticrings(theresttensionwas3g)withoutendotheliumprecontractedwithPE(10-6M)afterverapamil(Ver,10-6M)pretreatment.

DataareexpressedasMean±SD(n=5-6).*P<0.05,**P<0.01,vs.Ver;#P<0.05,vs.Ver+Ethanol.Ver:onlypretreatedwithverapamil;Ver+Ethanol:ethanoltreatmentafterverapamilincubation;Ver+RR+Ethanol:ethanoltreatmentafterverapamilandrutheniumred(RR,10−5M)incubation;Ver+HP+Ethanol:ethanoltreatmentafterverapamilandheparin(HP,50mg/L)incubationCONCLUSION乙醇具有血管活性作用。这种作用具有双重性，并有一定的浓度依赖性。血管内皮存在与否对乙醇的血管效应有影响不同预张力下，乙醇的血管活性存在差异，3g为乙醇发挥舒血管活性的最适预张力促进血管平滑肌细胞膜上电压操纵性钙通道的开放，增加外钙内流和抑制受体依赖性钙通道的开放，减少外钙内流可能是介导乙醇血管活性的一个重要机制乙醇可能通过激活IP3途径引起肌浆网内钙释放增加而使血管收缩，而Ryanodine受体可能不参与乙醇的血管活性作用PERSPECTIVE本次研究，在一定程度上明确了乙醇对血管的作用，并阐明了部分机理，为进一步研究乙醇这一与人类生活和健康息息相关化学物质的心血管生理、药理机制，为指导人们适度饮酒及更多地了解疾病情况下乙醇的效应，为过量酒精引起的临床心血管疾病的防治提供了实验和理论依据由于时间有限，本次研究型实验仅对乙醇血管效应的部分机制作了探讨，今后可进一步考虑从其他离子通道（特别是牵张敏感性离子通道）、内皮因素（NO、内皮素等）等其他角度研究乙醇的血管活性机制，并比较各种因素对乙醇血管活性作用的影响强度及其相互作用，明确乙醇对血管的综合作用REFERENCES马佳佳,马恒,王跃民,李红梅,裴建明.

葛根素对大鼠腹主动脉的舒张作用及其机制.

第四军医大学学报,2003,24(24):3321～2234蒋惠娣,汝海龙,王霄霞,夏强,屠洁.

木犀草素对大鼠主动脉的舒张作用及相关机制研究.

中国药学杂志,2005,40(6):427～430

金红峰，周云连，陈云龙，单绮娴，陆源，夏强.

石斛对大鼠胸主动脉环的舒张作用.

中国中药杂志,2003,28(11):1060～1062张红雨，徐长庆，李鸿珠，李宝馨，张艳桥，张一娜.

白藜芦醇对大鼠离体胸主动脉环的舒张作用.

中国中药杂志,2005,30(16):128