动物实验方案设计

动物试验方案设计动物试验指在试验室内，为了获得有关生物学、医学等方面的试验方案设计，期望对你有所参考帮助。一、试验设计的根本要素和原则试验设计就是拟定试验方案，在进展科学争论时，对争论方案作合理的安排，以削减随机误差的影响。承受适当的争论试验次数，从而实现争论的目的。争论设计包括专业设计与统计设计两个局部。统计设计主要是依据争论目的，从争论的现况条件动身，规定争论因素、选择效应指标、确定争论对象的引入方式方法和规模，拟实施的方法、方案，及数据收集、分析的模式，直至结果的解释，进展系统的安排，使其消耗最少的人力物力和时间，而获得牢靠的信息与结论。试验设计的根本要素试验设计的根本要素为：试验单位、处理因素和试验效应。大多数状况下，试验单位等同于试验对象、受试对象，在动物试验中的动物即为试验单位。受试对象产生试验效应的因素，照试验动物的雌雄、体重等因素。突果的最终表达，其根本要求客观性、特异性、灵敏性和准确性。试验效应：处理因素作用于试验动物后，消灭试验效应，一“痊愈”“显效”“好转”“无效”，“存活”“死亡”等。计量指标指可测量(含间接测量)的指标，如很多检查和检验指标。在对指标进展观看时应留意：①试验效应的观看应避开偏性。争论者的心理往往偏于阳性结果，为了消退或削减测量偏差，设计时常承受盲法。如剂量反响曲线。做试验应选择一个适宜的试验剂量。试验设计的根本原则试验设计的三大原则即为重复(replication)、随机化(randomization)和比照(control)，这是药理试验设计的根本要求。其目的是排解非处理因素的作用，掌握随机误差，避开系统误差，提高试验效率。必定，将试验结果错误推广，同一试验条件下、同一观测指标的屡次测量会有变异，屡次测量才能描述变异，估量随机误差。试验单位足位数称为样本含量(样本量)。重复原则的应用就是样本含量的估量。首先要考虑试验要有足够的例数，能准确重复再现，同时尽可能排解对试验的干扰，它包括：①动物方面，如品种、品系、体重、年龄、性别、饲料及饲养环境等；②仪器方面：准确性、稳定性、电压稳定性及操作娴熟程度等；③药物方面：性能、批号、纯度、剂量和注射速度等。此外还有室温、气压、季节等物理因素，甚至试验是表或小计算机上的随机数字键。在试验分组时，每个受试对象均有一样的概率或时机被安排到“随便”和“非选择性”。随机化的意义是保证各种非处理因素在各客观因素可能导致的偏性，削减系统误差，提高争论结果的效度。随象都属于同一个总体。比照原则：确定试验组时，同时设立比照组，即不施加处理因素的试验组，只暴露于非处理因素。比照组除没有处理因素外，其试验组尽量一样。常用的比照形式，分为空白比照(blankcontrol)、试验比照(experimentalcontrol)、标准比照(standardcontrol)、相互比照(mutualcontrol)、潜在比照(potentialcontrol)。空白比照即对比照组不施加干预，比照组的处理因素为“空白”；试验比照即比照组组的干预承受现有“标准”方法或常规方法，主要用于临床试验，目前疗效确定的药物作为比照药；相互比照则不特地设立比照组，不用特地设立比照组，以过去的争论结果为比照(历史比照)。另外，或比照较少是错误的和不妥当的。二、抽样和分组抽样和分组必需严格遵守随机原则，主要因素要均衡全都，但拿取动物，先取到的为第一组，依次递推，则反响活泼灵敏不易抓到的动物势必集中到最终几组，各组的条件就有了偏性误差。为此，下面介绍几种主要的分组试验设计方法。完全随机设计完全随机设计(pletelyrandomdesign本量可相等，也可不相等，但是样本相等时统计分析效率较高。112A、B1212……1212物编号下。61920124-1)。将随机数字从小到大挨次排列后得序号R，并规定R=1～6者为AR：7～12B4-112〔承受随机数字表〕2151、2……1515动物编号下。将随机数字从小到大挨次排列后得序号R。(3)规定R=1～5者为AR=6～10BR=11～15C(451718154-2)。4-2150602，但前面已经消灭过，故舍去。随机分组应留意：(1)随机数的位数不应小于N(2)随机数假设有重号数字应舍弃：(3)假设科研上需要各组例数不等可利用序号(R)调整各组例数。2A6B5C4R=1～6AR=7～11BR＝12～15C统计假设检验方法：计量资料：t计数资料：卡方检验等。完全随机设计的优缺点：设计及统计分析简洁。但是，试验效率不高，只能分析单因素。配对试验设计将受试对象按某些特征或条件配成对子，然后分别把每对中的同处理，连续试验假设干对，观看对子间的差异有无意义。配对设计的特征或条件：动物试验常以种属、品系、性别一样，年龄、体重相近的两只动物配成对子；临床疗效观看常将病种、病型、族别、性别一样，年2～3进展配对设计时应留意不要“配对过头”。例如，争论高血压与钠盐病例与比照在钠盐摄入量上的差异；试验者必需在整个争论过程中，的；记录试验数据应保持每对的一一对应关系，不能错乱或缺失。计算每对试验数据的差值时，挨次应当全都。2010到试验组与比照组中去。1.11.22.12.2……10.110.2，然后再在随机数字表上任意指定行列及查找方向，将随机数字依次抄写在“对子号”下。事先规定，遇单数定为ABBA4631324～3)4-320常用统计假设检验方法twilcoxon计数资料：卡方检验、全都性检验等。配对试验设计的优点：配对设计可做到严格掌握非处理因素对因素的差异所引起的偏差，同时还可以削减样本含量。是在自身配对设计根底上进展的双因素设计，可在同一对象身上观看两种处理的效应，并能削减误差，提高检验效率。例如：争论ABAB另一组先给B药后再给A4-4：4-4析因试验设计(factorialdesign)析因设计是一种多因素多水平穿插分组进展全面试验的设计方法，将两个或多个试验因素的各水平进展试验。例如：2222=44-5332=99试验设计。析因设计可以供给三方面的重要信息：各因素不同水平的效应大小；各因素间的4-52×2交互作用；通过比较各种组合，找出最正确组合。假设在一次试验中，当一个因素的水平间的效应随其他因素的水平不同而变化时，因素间存在交互作用，它是各因素效应间不独立的表现。正交试验设计正交设计适用于多因素分析，可算出各因素不同水平对试验的影响，找出最正确组合。现以L4(23)及L9(34)正交设计结合例子简洁(L94932个水平，3443浓度、低浓度)，要分析它们对试验的影响，找出最正确组合，可设计4-6：4-6L4(23)正交设计表中Ca218.6+6.2=14.8，K+18.6+9.7=18.3…。可以看出，Ca2+的差值确定值最大，说明Ca2+对K+Mg2+的影响最小，高浓度好。结论是以低Ca2+，高K+，高Mg2+为最正确组合。但是，这一组合在试验中并未消灭，但正交设计提示这是最正确组合，可安排复试加以验证。2L9(344-7：丙、丁三药影响较小，可列为辅药，最正确组合为甲药大剂量，乙药大34=819三、预试验及筛选预试验在正式试验前应充分重视预试验的重要性，小规模的预试验是使用少量的动物得到预示性的数据或通过预试验将操作和技术固定象、用药剂量和试验条件及检测指标，如温度、刺激强度、养分液组方等，为正式试验做必要的预备，提高试验的重复稳定性和灵敏度。为此，预试验中应留意以下问题：4-7L9(34)正交设计试验稳定性：变异系数越小，说明试验波动越小，试验的重复稳定性越好。变异系数CV=。(D1D2)，测定其反响强度(E1、E2)。计算因变系数，因变系数越小，试验灵敏度越好。因变系数CI=(E2-E1)／(lgD2-lgD1)。筛选筛选是在预试验或既往阅历的根底上，用少量动物对多种药物P<0.1有价值的药物。常见筛选试验有以下几种。解毒药与毒剂的半数致死量(LD504无死亡，说明该药筛选合格(P<0.1)；如有一只动物死亡时，可增加330／4、1／7、2／9、3／12、4／14表示值得进展正式试验，不肯定正式试验必定有良好结果。4-8。〔P<0.1〕一、LD50值测定1．要求和留意事项雌雄各半，20±2g药物及给药途径：以静脉注射、腹腔注射和灌胃为主，最好1ml；0.2ml；腹腔注射应小于1ml。另外，药液pH透压应在生理范围内。7d。试验报告：必需说明试验条件，制定LD50结果，应求出95％可信区间和LD10LD50和LD10LD5、LD95及回归系数。LD50(Bliss测机率单位法、目测图解法、寇氏法(Korlbor)等，对短期内致死药物还可承受序贯法。对于中毒表现和致死缘由的分析应赐予充分重视。2．LD50预试验：依据阅历或文献找出试验动物0100％死亡的剂量，即上下限剂量(Dn、Dm)。对于无毒性参考资料的药物，一般先配44／4，其前一组为2／43／4Dm，0／41／4，则以该组1.5Dm，同法找出DnDm，Dn为正式试验供给依据。4～9依据试验结果计算LD50：LD5095％平均可信限LD50±1.4×(LD84LD16)／其中N”5％～95％致死率间动物数。二、慢性毒性试验动物选择可以觉察药物对生长及各组织器官成熟的影响。慢性毒性试验开头选择的小鼠年龄最好是2～38～10g，350～60g。但是避孕药物的毒性试验则要求60120。剂量选择常用三个剂量组，大动物可用两个剂量组，并严格按要求设动物比照组。高剂量组(LD501／10～1／4LD501／30～1／10具体剂量依据试验目的而定。给药途径最好选择临床试用的给药途径。给药期限3～430d观看指标包括体征、常规血、尿检查、脏器解剖及肉眼观看、生化指标组织学检查(二十几个脏器)，必要时行骨髓检查、酸碱平衡、水和电解质代谢等。由于在慢性毒性试验中，受试药物的给药剂量较低，往往一些观看指标，以利于给药后的比较；在给药期间进展定期指标观看时，1～2有助于探讨受试药物对试验动物有无后续作用，以及损伤可否恢复。结果定论按观看记录的结果定论，但不应无视综合因素及其他因素对结果的影响。三、致癌试验动物选择其选择动物最重要的依据是对诱发肿瘤的易感性，所以应考虑物种、品系、年龄和性别。物种的选择对受试物有特定的靶器官时尤100为近交系的第一代杂交动物。剂量选择此点较难，但格外重要，一般使用三个剂量，其中最高剂量应10％，1／4～1／3，低剂量最好相当于或低于人类实际可能接触的剂量，同时应设计好阴性比照组和阳性比照组。观看指标体征，一般病症，定期称体重，最主要是亲热观看有无肿瘤发结果定论一般以组织学结果判定。四、其他简洁试验1．局部刺激性试验到类似的结果，则会增加从动物外推到人的牢靠性。不变的状况下，不应通过增加厚度来满足增加给药剂量的目的。给药途径：一般应与临床给药途径全都，否则应加以说明。(4暴露时间。(5)观看指标：首先要进展肉眼观看，具体描述动物局部反响，包括红斑、水肿、充血程