农产品加工贮藏专题论文

农药残留的酶联免疫分析技术及其展望，对其在检测中存在的问题进行了分析，并对其应用前景进行了展望。关键词：酶联免疫分析法抗体抗原半抗原抗体抗原结合物农药残留TheTechnologyofELISA（Enzyme-LinkedImmunosorbentAssay）anditsrspectiveinTheDetectionofPesticideResidueinFruitsandVegetablesAbstractAsaimportantkindofrapiddetection，ELISAplaysancrucialroleinthepesticideresidueoffruitsandvegetables.ThisarticlesimplyintroducestheessentialofELISAandanalysesitsproblemsintheanalysisindetections,italsomakesaperspectivefortheapplicationofELISA.KeyWords：ELISA;Antibody;Antigen;Haptens;Conjugate;PesticideResidue我国作为世界上最大的蔬菜水果生产国和消费国，仅09年蔬菜的生产就达避免，因此农药残留对人们的健康和环境的污染构成了严重的威胁，能外，还对系统机能构成潜在的危害，甚至会降低机体的免疫功能，表现有致癌、致畸、致突变的作用[1]。对于食品中农药残留的检测，除传统的GC、HPLC、GC—MS、HPLC—MS等方法[2-3]外，免疫学技术的应用也越来越深入，其中应用最广的是以固相载体吸附抗原/抗体为基础的酶联免疫分析法。理，检测成本低便于推广等优点，并且能同时进行大批量样品检测。在美国，有关官方机构，如环境保护署(EPA)、农业部食品安全检验司(FSIS—USDA)和化学会(AOAC)已制定了农药残留免疫学检验商品试剂盒评定和认可的建议准则[6-7]，明确了测定结果的法律效力。特别的，美国化学会AOAC已将分析与气相色谱、液相色谱同列为农药残留的三大支柱技术。1.疫分析法的原理酶联免疫分析法（enzamylinked-immunabsorbedassay）简称ELISA，基本原竞争固相抗体结合位点或固相抗原与未知抗原竞争限定量的标记抗体结。在一定的底物参与下，复合物上的酶催化底物，使其过分光光度计测定，从而确定是否存在未知抗原或含量[3]。2.ELISA在农药残留检测中应用的技术要点ELISA的核心技术是抗原抗体的特异性反应和酶对底物的催化作用。抗原或抗原结合后还要能保持对底物的催化作用。2.1半抗原的设计合成后才能刺激机体产生抗体，而蛋白质就是大分子物质的最佳选择。Friei[8]等认为一个理想的半抗原应包括待测物的特征结构、便于机体对特征结构进行识别的连接臂及其末端可与蛋白载体进行共价连接的功能基团。因出有预期选择性和亲和性的抗体，因此农药分子或合成分子与载体之间必须有4-6个C原子的连接臂，使半抗原突出于载体表面，这样才能容易被机体识别，生免疫反应。而且间隔臂上也不能有特征抗原决定簇。分子的抗体，来对这类农药残留进行测定。蛋白质连接的半抗原的数目对诱发抗体有一定的影响，一般认为20~40个差[9]。1.2.1直接方法合成人工抗原。农药分子半抗原如果有反应功能团,则可根据具体情况用适当的双功能交联试剂与交联方法使半抗原与载体偶联。对于—COOH半抗原,可利用—COOH通（重氮化法或戊二醛法;对于—OH半抗原则可直接与丁二酸酐衍生后再与蛋白质交联;对于—SH半抗原则可通过同源或异源双功能试剂交联;而酮基半抗原则常氧乙酸化。1.2.2衍生方法合成人工抗原如果农药分子中不含有反应功能团,则需先通过衍生过程在农药分子内产生用的衍生方法,目前比较常用的有以下方法,用与半抗原结构相似的但有反应活性商品化学试剂。适当的双功能交联试剂与交联方法使半抗原与载体耦联。Aaaa[7-10]2.2载体的选择(OV对于ELISA中的包被抗原来讲，还要和包被板结合，所以对于蛋白来讲，能和包被板紧密结合，所以选择蛋白分子作为载体既能提高免疫原性[11-12，了实验的可行性。在不同离子强度，PH值下，有机溶剂存在下，都能和半抗原连接，并且在偶联后还能保持可溶性的状态，因此使用较为广泛[7]2.3酶标农药抗原的合成目合适才能发挥最大的免疫原性，数目太多或太少都会使诱发抗体的能力都很用来连接酶与农药，制备酶标农药抗原aaaaaaa[13]2.4抗体的制备白载体相结合的农药半抗原或者合成半抗原可以直接用来进行免疫动等，每间隔一段时间加强免疫一次，一般六个月左右可[]技术和单克隆抗体技术aa[15]。2.4.1多克隆抗体（polyclonalantibody）多克隆抗体的制备比较简单，采用天然抗原（对于农药分子来说直接可以作产成本低、方法简便、来源广泛、易于制备等特点，但而且生产数量也受限制，因此不利于生产大批量商品试剂盒。次免疫的过程中需要加入等量弗氏完全佐剂，增加抗原免疫原性，是动更容易产生抗体。2.4.2杂交瘤技术生产单克隆抗体（monoclonalantibody）由单一纯系细胞合成的抗体称为单克隆抗体，其重链、轻链、独特型完全相异性强，可以避免血清学上的交叉反应。在半抗原载体能分泌特异性抗体的细胞，并测定这些抗体的的效价，无限增值的功能。相对于多克隆抗体制备技术来说，单克隆抗体制备过程复杂，对设备和技术用也较高，但是单克隆抗体具备性质纯、效价高、特异上有很大应用价值。2.4.3重组抗体(recombinationantibody)达，筛选和收集。抗体，对其有6×10-9的亲和力，然而，现在对与黄曲霉毒素来说，有关重组抗道还比较少。就是怎么保持或者改进抗体与待测物结合的能力。[但是还没有相关的文献报道。3.ELISA在水果蔬菜农药残留检测中的应用ELISA试剂盒可用于果蔬农药残留检测，正如本文开始所讲，ELISA具有很者不需检测设备，样品前处理程序简化：液体样品，果理，可直接取样检测；固体食品，如糖果蜜饯等经抽提测)，检验成本低aaaaa[19]，对操作技术要求低，非常适合于现场应用，特别是果蔬之类对新鲜程度要求比较高的农产品和食品。ELISA不仅可用来定性筛选，而且也可以用来定量分析，对很多农药的检测果、蔬菜等还有饮料、啤酒、葡萄酒、鱼、肉、猪油、奶、植物油、植物(昆虫)生长调节剂等农药残留。aaa[20-22]。农药类别 农药名称 抗体类型 测定样本 杀虫剂 甲胺磷 多抗 蔬菜谷物 多菌灵 多抗 果汁、水 杀菌剂 百菌清 多抗、单抗水果 克菌丹 多抗 水果 100μg/㎏噻菌灵 多抗、单抗果汁、蔬菜、肉0.67mg/kg除草剂 异菌咪 多抗 类 生长调节剂 阿拉特津 多抗 啤酒、果汁 0.15-10μ

奶、果汁、玉米马铃薯 0.5-2μg/㎏μg/4.ELISA用于检测存在的问题尽管优点明显，但在应用中ELISA同样存在缺点和问题。ELISA检测系统中的抗农药抗体对于结构非相关的靶抗原(农药)表现极高的特异性，但某些与检交叉反应。如果样品中存在这些物质，将导致定量检测准确度降低，农药在内的结构密切相关的类似物及代谢产物进行多种农药残留的总量检果影响机制尚不明确，影响其特异性和稳定性的因素还不是很清楚，从而使得ELISA在食品农药残留检测中的不确定因素增多且不易控制，难以实现标准化。5.ELISA用于检测的前景展望上文提到在ELISA监测系统中，特异性抗原可能会对具有抗原相关结构的大批量且农药污染又没有规律的样品，可以节省大量的时间和工作量。要解决好上述问题，在以后要努力做到：(1)在设计合成农药半抗原的过程提高农药半抗原筛选效率和命中率；(2)应对ELISA对食品农药残留的结果和理化分析结果进行相关性试验评价，同时将ELISA对食品农药残留快速定性筛选与色谱、质谱准确定量检测结合使用更为方便。总之，目前ELISA应用于食品农药残留免疫检测尚存在一定局限性，也不可能替代传统的色谱分析技术。但ELISA分析技术自身优势和在方法上的不断速检测手段。文献[1]蔡道基．农药环境毒理学研究[M]．北京：中国环境科学出版社．1999．[2]YukYW．Analysisforatrazineinfoaifieldcornmealandcornsusingacommercialyavailableenzymeimmunoassaymicrotiterplate[J]．BullEvitam199174(2)239allalysis[J]．CritRevFoodSciNutr，1992，32：197—229．[5]JohnH，Skerritt．Enzyme—linkedimmunosorbentassayforquantationoforganophosphatepesticides：fenitrothion，chlorpyrifos—myth—ylandpirimiphos—-metylinwheatcrainandflour—-milingfractions[J]．JofAOACInternational1992，75(3)219—228[6]KrotxkyAJ，ZeehB．Immunoassaysforresidueanalysisofagrochemicalsproposedguidelinesforprecision，standardizationandqualitycontrol[J]．PureandApplChem，1995，67：2064—2088．1989，26303—317[9]李俊锁,钱传范.农药残留的免疫分析及其进展[J].农药科学与管理,1999,(增37-43.1518[11]TampsPT．Recentadvancesinmultipleantigenpeptides[J]．JImmunolMeth．199619614—32[12]周思祥，刘福成．农药人工抗原的合成进展．农药，200544(8)：337341[13]MafiapilarM．Developmentofallenzyme—linkedimmunoserbentassayforcarbaryl[J]．JAcFoodChem，1993，41：423—430．[14]NewsomeWH，ShieldsJBA．Radioimmunoassayforbenomylandmethyl2一benzimidazolecarbamateonfoodcrops[J]．JASdcFoodChem，1981，29：220222境科学与技术，2006，29(4)：100—102[16]A.Moghaddam,I.Lobersli,K.Gebhardt,M.Braunagel,O.J.Marvik,J.ImmunolMethods254(2001)169[17]J.Jodlbauer,N.M.Maier,W.Linder,J.Chromatogr.,A945(2002)45. Navarro-Villoslada,J.L.Urraca,M.C. Orellana,Sens.Actuators,B121(2007)67[19]StercenJL，R0bertJA