走进分子生物学实验室

走进分子生物学实验室

——分子生物学实验室常用设备和仪器介绍孙文宋田源培养箱常用培养箱一般为隔水式恒温培养箱细菌——37℃霉菌——28℃使用时注意培养箱的水位，水位过低会引起温度变化幅度加大，不能控温冰箱4℃适合储存某些溶液、试剂、药品等。-20℃适用于酶、血清、配好的抗生素和DNA、蛋白质样品等。-80℃适合某些长期低温保存的样品、大肠杆菌菌种、纯化的样品、特殊的低温处理感受态等的保存。0-10℃的层析冷柜适合低温条件下的电泳、层析、透析等实验。摇床分为恒温式和常温式用于大肠杆菌，酵母菌等生物工程菌种的振荡培养及蛋白的诱导表达，培养通常为37℃和28℃烘箱用于灭菌和洗涤后的物品烘干有些塑料用具只能在42-45℃的烤箱中进行烘干；用于RNA方面的实验用具，需要在250℃烤箱中烘干。高压蒸汽灭菌锅/箱主要用于能耐高温的物品，如培养基、金属器械、玻璃、搪瓷、敷料、橡胶及一些药物的灭菌。压力升至103.4kPa，温度达121.3℃，维持15~20分钟，可达到灭菌目的。电子天平按照最大称量的不同分为超微量（2-5g），微量（3-50g），半微量（20-100g）等规格使用前需要检查是否水平称量时需要称量纸，决不允许直接称量称量腐蚀性和吸湿性物质时需要用烧杯称量pH计玻璃电极平常不用时应浸泡在蒸馏水中。甘汞电极在初次使用前，应浸泡在饱和氯化钾溶液内，不要与玻璃电极同泡在蒸馏水中。不使用时也浸泡在饱和氯化钾溶液中。磁力搅拌器在配置试剂过程中，有些试剂较难溶解，这时需要借助磁力搅拌器。磁力搅拌器可以加速溶解固体内容物。磁力搅拌器一般带加热功能。电炉和微波炉生物安全柜和超净工作台PCR仪、PCR反应及结果检测聚合酶链式反应高温变性低温退火中温延伸基于聚合酶制造的PCR仪实际就是一个温控设备，能在变性温度，复性温度，延伸温度之间很好地进行控制。优点特异性强灵敏度高简便、快速纯度要求低PCR仪类型普通和梯度PCR仪荧光定量PCR仪原位PCR仪PCR反应体系10×扩增缓冲液10μl4种dNTP混合物（终浓度）各100～250μmol/L引物（终浓度）各5～20μmol/L模板DNA0.1～2μgTaqDNA聚合酶5～10UMg2+（终浓度）1～3mmol/L补加双蒸水100μl

参加PCR反应的物质引物DNA聚合酶dNTP模板链缓冲体系引物设计原则①引物长度：15-30bp②引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。③引物内部不应出现互补序列。④两个引物之间不应存在互补序列⑤引物与非特异扩增区的序列的同源性不要超过70%⑥引物3’端应严格要求配对，引物的5’端可以修饰。循环数一般为25～30次。循环数决定PCR扩增的产量。一般循环数为30个左右，循环数超过30个以后，DNA聚合酶活性逐渐达到饱和，产物的量不再随循环数的增加而增加。结果检测荧光素（溴化乙锭，EB）染色凝胶电泳荧光探针凝胶电泳琼脂糖凝胶电泳（水平）聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）（垂直）蛋白质的凝胶电泳（SDS）凝胶制备和电泳过程制作胶模融化琼脂糖，冷却后加入EB倒模