安徽医科大学研究生细胞培养技术考试重点

......word.zl...word.zl.名词解释：群体倍增时间：细胞指数增长期时，细胞群倍增所需的时间。是由于表示群体细胞指数生长期细胞分裂活动的程度，是推断细胞生长是否旺盛的重要指标。接触抑制〔contactinhibition密度抑制〔densityinhibition空间消逝所引起的细胞增殖的抑制现象。肿瘤干细胞(tumorstemcells，TSC)表现为一种特别类型的干细胞，具备高度增殖力量与自我更力量，也具备多向分化的潜能。TSC增殖过程中，通过不均一分裂，一个TSC分裂形成一个的TSC和另一个可最终分化为包括肿瘤细胞在的各种细胞的子细胞，其结果是维持TSC细胞集合(Confluent)：指细胞增殖生长相互连接成片占据全部底物面积现象。饱和密度(Saturationdensity可到达的最大细胞数。二倍体细胞系或株(Diploidcelllineorstrain)：具有二倍体染色体数的细胞系或株。8.二倍体(Diploid)：指双倍数的染色体数或具有此数的细胞系。组织工程：是应用生命科学和工程学的及方法，在正确生疏正常及病理两种状态下伤后的功能和形态的生物替代物的一门兴学科。细胞融合(Cellfusion)：指两个独立的细胞借媒介物(PEG等)融合成杂种细胞的过程。细胞富集：当细胞别离纯化并不完全彻底，培育物中能到达以某种细胞为主〔占绝大多数〕的程度。三维培育：把细胞悬液接种在肯定立体形态的支架上，使细胞生长在三维环境中的培育方法。平衡盐溶液〔balancedsaltsolution,BSS等渗性以及培育液的养分供给特点于一体。兼具缓冲和调整溶液的酸碱度、维持渗透压、同时供给细胞生存所需的能量和无机离子成分的作用。生长基质〔growthsubstratum胞粘附和贴壁的物质。去分化〔dedifferentiation16.消化液：在原代细胞培育和细胞传代时，都要用消化液，最常用的是胰蛋白酶和二乙烯四乙酸二钠〔EDTA中，使用消化液从组织块中别离〔散〕出单个的细胞；在进展细胞传代时，消化液使细胞脱离生长外表并离散成单个细胞。消毒 disinfection 杀死物体上病原微生物的方法。灭菌 sterilization杀灭物体上全部微生物的方法，包括病原微生物和非病原微生物、生殖体和芽胞。转化细胞系：指细胞发生了不行逆转的遗传转变而引起恒定的表型转变的细胞系。杂交瘤技术：又称单克隆抗体制备技术，是指建立杂交瘤细胞系的技术，通常指B淋巴细胞杂交瘤技术，马上骨髓瘤细胞与B淋巴细胞融合，以建立可以分泌单一性抗体的杂交瘤细胞系的技术。指由一个B淋巴细胞克隆所产生的，只识别一种抗原打算簇的均质抗体。干细胞：是指具有无限或较长期的自我更力量、多种分化潜能和高度增殖力量的细胞。全能干细胞，如ES细胞。全能干细胞可以分化成人体的各种细胞，这些细胞构成人体的各种组织和器官。 成体干细胞：在胎儿、儿童和成人组织中存在的具有自我更、多向分化潜能和增殖特性的多能干细胞，统称为“成体干细胞〞。融合剂：两个或两个以上的细胞融合过程中，能促使细胞融合并使细胞融合的频率显著增大的物质，如仙台病毒，PEG克隆化：专指一般DNA在与载体DNA分子重组后，重组DNA分子由载体导入宿主细胞，依靠载体的复制力量在宿主细胞中进展扩增，形成一个无性生殖系的过程。细菌污染：包括全部混入培育环境中对细胞生存有害的成分和造成细胞不纯的异物〔真菌、细菌、病毒和支原体PH发生转变等现象，污染。iPS需要用人胚胎或卵母细胞，就能制造干细胞。克隆：指通过肯定方法获得由单个细胞无性生殖形成的细胞集落。简答题：简述细胞培育污染的种类及污染的预防措施1〕物理污染：温度、放射线、震惊、辐射等；〔2〕化学污染：水、血清、容器、孵箱等的有毒物质的残留；〔3〕生物污染〔支原体污染型的细胞都可能侵入培育环境引起污染。1〕良好的规章制度：只有相关人员才可进入细胞培育区，细胞培育区必需和其他区域分开，细胞培育区应布局合理；〔2〕良好的无菌操作：全部玻璃器皿和培育液与试剂的配制应严格无菌，吸入或吸出液体时防止倾倒，不要触碰细胞培育瓶的瓶口，清洁区和污染区的材料应单独处理；〔3CO2孵箱、生物平安柜等，准时清理废弃物；〔4〕合理利用抗生素〔5〕建立细胞库：消退了隐蔽污染的潜在危害〔6〕细胞污染的检测试述细胞培育的根本概念、原理、优缺点及实际意义1〕概念：细胞〔组织〕培育是指从生物体取出细胞〔组织菌、适当温度和肯定养分条件下，使之生存、生长并维持其构造和功能的方法。2)，这种培育失去了原有组织类型及某些生化特征，但它们可以增殖，特性化，获得遗传背景一样的群体，可以保存。3〕实际意义：组织〔细胞〕培育对医学、生命科学的意义①培②细胞培育技术已经成为商品化生物技术产品的核心。如目前可供给的产品，病：刺激因子等；多肽生长因子：表皮生长因子和神经生长因子等；酶类溶酶原激活剂；激素：EPO和促黄体生成素等；杀虫剂：杆状病毒；肿瘤特异抗原；癌胚抗原；通过杂交瘤生产的各种单克隆抗体；细胞本身〔如干细胞皮肤重植等。4〕组织〔细胞〕培育的局限性：细胞〔组织〕培育，包括器官培育终归是离体培育，缺少评估都必需考虑这些。简述细胞培育过程中如何进展微生物污染防治1〕把好每一个关口，尽可能制止任何有污染的物品进入培育操作环节；2〕抗生素：一般用常用量的5~10倍作冲击疗法。用药24~48h后，再换常规培育液。3〕加温处理：依据支原体对热敏感的特点，将受支原体污染的细 胞放置在41℃作用5~10h，最长不超过18h后，以杀灭支原体。4〕动物体接种：将支原体污染的细胞接种在同种动物的皮下或腹腔，借动物体的免疫系统消灭支原体。待肯定时间后取出细胞，做原代培育再进展生殖。试述目前体外细胞培育中广泛使用最多的自然培育基类型及其作用水解乳蛋白等。1〕血清：①血清中含有根本的养分物质②血清中含有激素与生长调整因子③血清中含有促进细胞粘附和铺展的因子④血清中含有结合蛋白⑤血清中含有抗机械损害的非特异性保护物质⑥血清中含有pH缓冲物质⑦血清中含有蛋白酶抑制剂2embryonicextract〕是早期动物细胞培育中应用的自然培育基，如鸡胚浸进细胞生长的作用。3〕水解乳蛋白〔lactalbuminhydrolysate〕为乳白蛋白经蛋白酶水解的产物，含有富的氨基酸，是常用的自然培育基，可用于很多细胞系和原代细胞的培育。血清的优缺点：1〕优点：①血清中含有根本的养分物质②血清中含有激素与生长调整因子③血清中含有促进细胞粘附和铺展的因子④血清中含有结合蛋白⑤血清中含有抗机械损害的非特异性保护物质⑥血清中含有pH缓冲物质⑦血清中含有蛋白酶抑制剂2〕缺点：①血清中也存在不少有害于细胞生长和生殖的物质②血清的成分不明确，影响对结果的分析③对多数动物细胞来讲，血清并不是细胞在体时直接接触的生理性液体，只有在伤口愈合以及血液凝固过程中才接触血清，因此使用血清有可能转变某种细胞在体的正常状态。分之外，还含有多胺氧化酶等。要分批筛选，而且永久不行能保持批次间的全都；用胎牛血清培育的状况更如此；⑦血清中有时所含的生长因子水平缺乏而需要补充，假设补充过量会抑制细胞生长。培育批次与血清批次不同，生长因子水平是难以掌握的。简述体外培育细胞的主要生物学特点去分化；贴壁铺；接触抑制；密度依靠性生长抑制7.体外培育用液的种类及用途主要包括：培育液〔维持体外细胞生存和生长的根本溶液，是组织细胞培育时最重要的条pH调整液和抗生素等其它常用液。8.比较自然和合成培育基的优缺点1〕自然培育基：最初的体外细胞培育，均承受自然培育基。其主要取自动物体液或从动物组织中别离提取。优点：养分丰富，培育效果良好；缺点：成分简单，来源受限，影响对某些试验产物的提取和结果的分析，易发生支原体染。2〕合成培育基：细胞在体生存生长所需物质的种类和数量，用人工方法模拟合成的。优点：标准化生产，组分和含量相对固定本钱低。缺点：缺少某些成分，不能完全满足体外细胞生长需要。9.试述细胞体外培育的条件体外培育细胞的根本要求主要包括细胞接种、培育液成分、酸碱度、气体条件、温度、水的纯度及无菌条件。1〕细胞接种：接种细胞密度10-4-10-5。选择对数期的细胞接种。2〕养分物质：①自然培育基：养分成分简单，包括血清、组织浸出液、淋巴液、水解乳蛋白等；②合成培育基：包括水、无机盐、葡萄糖、维生素、氨基酸等；3〕酸碱度：细胞能耐受的pH围是6.6-7.8，最是的pH为7.2-7.4，要依靠缓冲系统调节，主要是CO-NaHCO系统。2 34)气体：细胞生长需要，主要用于调整细胞培育的pH，同时也用于合成细胞物质。535~37℃；6〕水：一般使用的是去离子水或三蒸水，适宜细胞培育；7〕抗生素：参与两性霉素可掌握微生物的生长。10.体外培育肿瘤细胞的三个显著特征：永生性、不受控增殖性、致瘤性。〔转化细胞系的特征〕1细胞系〔株〕都表现有这种性状。2〕细胞接种同种动物或裸鼠后的致瘤性是客观反映细胞恶性程度的指标。3〕失去接触抑制，细胞能相互重叠向三维空间开展，形成积存物。失去锚着依靠性〔停靠依靠性癌细胞或培育中发生恶性转化后的单细胞培育时，形成集落的力量比正常细胞强。11.简述原代肿瘤细胞制备过程及其本卷须知及如何建成永久性细胞系冻存、复等过程。1〕取材：取材部位格外重要，要选择活力较好的部位，一般是癌组织最外层最活泼细胞。留意去除标本中混杂的间质组织。2〕别离：机械方法、酶消化法，其中酶消化法是分散癌细胞的好方法。3〕接种细胞：消化后制备的癌细胞，培育时应有足够的细胞密度，通常接种细胞浓度为5×105／ml，37℃培育。4〕成纤维细胞过度生长的去除：常承受机械刮除法、反复贴壁法等。5选择性培育基的应用是提高癌细胞体外存活、抑制成纤维细胞生长的关键技术改进。6胞生长和抑制癌组织中正常成纤维细胞过度生长。7〕准时换液癌细胞系建立本卷须知：取材应选择活力较好的部位，尽快培育且要防止污染。准时去除生长的成纤维细胞。把握好传代时间，细胞没有长到足够量时不要急于传代。早期应先以高浓度接种，再渐渐降低。对于增殖力量低的细胞，应放入饲养层中培育，并参与一些促生长物质。细心传代、换液、防止污染，需经半年以上的细胞培育，方能够到达建立细胞系的目的。如何建成永久性细胞系：建立癌细胞系需要在体外进展长期培育和传代，传代50次以上才能被认为是永久性细胞系。建系过程需要不断冻存以防细胞系中断。杂交瘤技术产生的三个技术根底〔关键1〕B淋巴细胞与骨髓瘤细胞：①B淋巴细胞〔Blymphocytes针对该抗原的特异性抗体，在体液免疫中具有重要功能。本身是一种终末分化细胞，通(myelomacells)：恶性增殖的转化细胞，只要养分条件适合可永久分裂和存活——长命细胞。没有抗体分泌。经筛选HGPRTˉ或TKˉ。2(B淋巴细胞)、长命不分泌抗体骨髓瘤细胞、分泌抗体长命杂交瘤细胞。3〕杂交瘤细胞的筛选：用HAT选择培育基进展筛选，只有杂交瘤细胞被筛选出。试述杂交瘤技术制备单克隆抗体三个根本环节和两个打算因素三个根本环节1〕浆细胞瘤细胞系，骨髓瘤细胞NS1或SP2/0，需通过8-氮鸟嘌呤选择出来，有利于HAT选择培育基筛选。而且NS1或SP2/0必需是对数生长期，细胞密度掌握在105／ml，细胞951.5*108细胞数。2〕免疫鼠脾细胞良好、适宜，大多数状况下，并不需要高度免疫；3〕融合剂良好适宜，50%PEG。两个打算因素1〕选择培育基〔HAT〕 2〕饲养细胞〔104／ml以上：来自同系小鼠的胸腺细胞或腹腔巨噬细胞与胚胎干细胞相比较，成体干细胞有以下几个特点：成体干细胞体积小，细胞器稀有，RNA含量较低，在增殖过程中处于相对静止状态，在组织构造中位置相对固定。成体干细胞数量很少，其根本功能是参与组织更，创伤修复及维持机体环境稳定。(3)成体干细胞常处于一个有干细胞细胞基质、对干细胞的增殖和分化起调控作用的各种信的微环境和自身的功能状态。(4)成体干细胞没有确定的来源。15.干细胞争论的意义物的生产、细胞组织和器官的修复、组织工程等有着宽阔的应用前景。1〕移植治疗：移植治疗目前已成为治疗疾病的一个重要手段，如器官移植、细胞移植等。2〕克隆动物及转基因动物的生产：利用这项技术人们还可以将一些在发育过程中非必需的基因敲除〔knockout特定基因在发育的某一时期表达，从而争论该基因在胚胎不同发育时期中的作用。3〕转基因干细胞基因治疗：现有的基因治疗有两类：①转基因细胞治疗②核酸治疗。4〕为发育生物学争论供给抱负的体外模型：胚胎干细胞供给了在细胞和分子水平上争论个体发育过程中极早期大事的良好材料和方法。5〕高效型药物的觉察、筛选及动物和人类疾病的模型：胚胎干细胞供给了药物的药织检验筛选药，可大大削减药物试验所需试验动物的数量及其人群数量。总之，干细胞争论对细胞组织移植治疗，体外争论动物、人胚胎的发生、开展，的人类因觉察，药物的筛选和致畸试验及克隆动物、转基因动物等领域将产生重要的影响。试述进展成体干细胞争论有哪些优势1使异体成体干细胞的治疗成为可能。2〕成体干细胞不会引发畸胎瘤。3胞是存留在多种组织中具有多系分化力量的亚全能干细胞群体的细胞表型，在适合的微环境下可分化成多种组织细胞。试述癌细胞系鉴定要点〔简述体外培育肿瘤细胞生物学检测的常规工程 〕培育的肿瘤细胞生长成形态上单一的细胞群体或细胞系(或株)后物学测定，主要的目的在于：证明所培育的细胞系确实来源于原体具有恶性的细胞，而非正常细胞或其它细胞。1〕形态观看：主要观看细胞的一般形态，如大体形态、核浆比例、染色质和核仁大小、多少等以及细胞骨架微丝微管的排列状态等。2〕细胞生长增殖：检测细胞生长曲线、细胞分裂指数、倍增时间、细胞周期时间。3〕细胞核型分析：检测核型特点，染色体数量、标记染色体的有无、带型等。4〕软琼脂培育：检测集落形成力量。5〕异体动物接种：向异体动物体(皮下)接种细胞悬液，观看成瘤力量。6〕其它：依据需要还可做同位素标记、组织化学成分分析，荧光显微镜观看等。简述细胞系的生长过程及各期细胞的特点1〕原代培育期：取自体颖组织并置于体外条件下生长的细胞在传代之前称为原代培育。组织到第一次传代时间大约为1～4周。特点：①培育细胞成分混杂，呈现异质性。②细胞活泼移动,分裂,但不旺盛,多呈二倍体核型。③原代与体原组织形态构造和功能活动根本相像，适宜进展疫苗制备、药物测试、移植等。为保持二倍体体细胞性质，应在初代或传代后早期冰冻。2〕传代培育期：首次传代开场经反复传代始终到培育细胞开场衰退之前的全部时间。初代培育细胞一经传代便称之为细胞系(cellline核型，也叫二倍体细胞系(diploidcellline)一般细胞在10代以冻存。②细胞渐渐进入去分化状态。③原本成分混杂的培育物中,某一种增殖力量较强的细胞会渐渐处于优势,比例越来越大,而将其它数量较少比例较小的细胞渐渐淘汰掉。3〕衰退期：细胞仍旧生存，但不增殖或增殖很慢，最终衰退死亡。轮廓增加，色泽变暗，胞质消灭颗粒样及空泡状构造。在细胞生命期阶段，少数状况下，在不明缘由的影响，细胞可能发生自发转化。标志之一，倍体，接触抑制消逝。干细胞争论的主要容与问题主要容1〕干细胞的别离与鉴定2〕干细胞的自我更3〕干细胞的定向分化4〕干细胞的临床应用问题胚胎干细胞建系及定向诱导成组织细胞的分子机制；成体干细胞横向分化的条件；各种组织的成体干细胞库的建立及临床治疗试验；细胞移植的免疫排斥问题。粘附生长型细胞依据形态分为几种类型，试述各型主要特点。1〕粘附型细胞〔Monolayercells〕:附着在某一固相支持物外表才能生长的细胞。a成纤维细胞型：①形态：似体成纤维细胞的形态，胞体梭形或不规那么，三角形，胞质向外伸出2—3个长短不等的片状伪足放射状，漩涡状，并不紧靠连成片，细胞—细胞接触易断开而单独行动，游离的单独的成纤维样细胞，常有几个伸长的细胞突起。b上皮细胞型：①形态：类似体的上皮细胞，扁平、不规那么多角形，中有圆形核。②生长特点：易相连成片，相靠—严密相连—成薄层—铺路石状生长时呈膜状移动，很少脱离细胞群而单个活动。c游走型细胞：培育需要支持物，分散生长，不连接成片，在培育皿中生长位置不定，处于活泼的游走或变形运动，因此外形不规那么且不断变化,密度接成片呈多角形不易与其他类型的细胞区分。d多型性细胞：无规律的形态，细胞分胞体和胞突。胞突瘦长形，似丝状伪足，胞体略呈多角形。试述“克隆〞的根本概念并举例说明其在细胞培育工作中的实际意义。1〕克隆：指通过肯定方法获得由单个细胞无性生殖形成的细胞集落。2〕实际意义：a检验医学诊断试剂：单克隆抗体以其特异性强、纯度高、均一性好等优点，广定。b蛋白质的提纯：单克隆抗体是亲和层析中重要的配体。将单克隆抗体吸附在一脱后，转变洗脱液的离子强度或pH，欲别离的抗原与抗体解离，收集洗脱液便可得到欲纯化的抗