临床免疫学检验：11 补体的检测及应用

第十七章补体检测及应用

P197一.概述：（一）补体的定义及性质：complement：补体是存在于人和动物血清中的一组经激活后具有酶活性的球蛋白，一般情况下处于未激活状态。补体的特性：稳定性差，各种理化因素都可使之失活：如酸、碱、紫外线照射、剧烈震荡等约90％的补体成分由肝细胞合成，少数由巨噬细胞、肠上皮细胞、脾细胞等产生补体成分均为糖蛋白，大多为β球蛋白，少数为α或γ球蛋白。实验室灭活补体的条件为：56ºC、30'；室温下2天补体也可自然失活；由于补体的稳定性差，容易失活，因此作补体的检测必须用新鲜血清（二）补体的组成：由三部分组成1.补体的固有成分：C1-C9，其中C1又包括C1q、C1r、C1s，共9种成分11种蛋白分子。其中C9的分子量最小、C3含量最高；2.补体的调节蛋白：如C4调节蛋白、C1抑制物、S蛋白等；3.补体受体；如C1qR、C3aR等；（三）补体的激活：三条途径1.经典激活途径：又称C1途径激活剂：IgG、IgM形成的AgAb复合物参与成分：C1－C9激活过程：这是一个连锁反应，缺少其中任何一个组分，连锁反应都不能进行2.旁路激活途径：又称C3途径激活剂：脂多糖、酵母多糖、IgG4和IgA的聚合物(提供接触表面)参与成分：C3、C5－C9、B因子、D因子、P因子3.甘露糖结合凝集素途径：MBL途径在感染早期，常采用途径2、3；产生Ab后，采用途径1三条激活途径的比较项目经典途径旁路途径MBL途径激活物抗原抗体复合物细菌脂多糖、酵母多糖等细菌N氨基半乳糖或甘露糖参与成分C1-C9C3、C5-C9、B、DC2-C9C3转化酶C4b2bC3bBbC4b2bC5转化酶C4b2b3bC3bBb3bC4b2b3b作用特异性免疫非特异性免疫(早期抗感染)非特异性免疫(早期抗感染)（四）补体的生物学作用：

1.溶菌、溶细胞作用：MAC效应2.调理作用(C3b、C4b和iC3b)

3.清除免疫复合物(C3b、C4b)

4.炎症介质作用

①趋化作用(C3a、C5a)②过敏毒素作用(C3a、C4a、C5a)二.补体的检测：包括两方面的检测功能检测：总补体活性的检测、单一补体活性的检测；量的测定：单一补体量的测定；

活性的检测多采用溶血试验；量的测定多采用免疫比浊法或单扩法溶血试验：绵羊红细胞（Ag）与相应的Ab－兔抗绵羊红细胞抗体（溶血素）结合后形成致敏羊红细胞（一对AgAb复合物），在补体存在的情况下，启动经典激活途径，导致致敏羊红细胞的细胞膜穿孔，释放血红蛋白，从而发生溶血。在溶血反应中，指示系统是绵羊红细胞和溶血素。补体的来源是多只豚鼠的混合血清，其原因为多只豚鼠血清的混合避免了补体成分欠缺，从而使经典途径的连锁反应能顺利进行。溶血反应SRBC+兔抗SRBC抗体(溶血素)新鲜血清(提供补体）溶血+启动经典激活途径（一）总补体活性检测：CH50试验

(ComplementHemolysis50%)原理：组成和功能完整的补体系统能使致敏羊红细胞发生溶血；

羊红细胞的溶血程度与补体的活性成正比；整个曲线呈倒“S”型，即随着补体量增加，溶血程度也增加在50％溶血附近（30％－70%之间），稍微改变补体量，溶血程度变化明显，因此以50％判定溶血终点较100％更为敏感，所以该试验称为50％溶血试验（CH50）。总补体活性的检测方法：见P201试管号1:20稀释血清BB缓冲液溶血素

2%SRBC0.1(ml)1.4(ml)0.5(ml)0.5(ml)0.151.350.50.50.201.300.50.50.251.250.50.50.301.200.50.50.351.150.50.50.401.100.50.50.451.050.50.50.501.000.50.50.001.500.50.5

上述10支试管经37ºC、水浴30min反应离心后与已制备好的50％溶血标准管比较，取吸光度值最接近的一管，则CH50（U/ml）＝1/血清用量×血清稀释度总补体活性参考范围：50－100U/ml（二）单一补体的测定：1.单一补体活性的检测：用免疫溶血法，常用于检测C3、C4、C1q、B因子等原理：将动物或人血清（提供补体）用一些化学试剂特异地灭活某个组分，然后加入致敏羊红细胞，由于补体缺少某一组分，则不能被激活，溶血反应不能发生。当加入待测血清，如其中含有所缺失的补体成分，连锁反应重又发生，即可出现溶血。此法可诊断：补体个别组分先天性缺乏：如C3、C4、C1q、B因子；某一组分有无溶血活性如：多支豚鼠混合血清+氨水（破坏C4）→R4；

R4+致敏羊红细胞（抗原抗体复合物）→

不溶血+待测血清，观察有无溶血

如溶血，说明待测血清有C4，且C4功能正常如不溶血，说明无C4，或C4功能差2.单一补体量的测定：采用免疫化学法

采用免疫比浊法或单扩法，临床上常检测C3。C3含量：1200-1300μg

/ml

（三）补体裂解产物的检测：C3→C3a+C3b；C3b→C3c+C3d如果血清中出现了C3d，说明补体被激活：血清中C3↓，C3d↑，表明分解↑；

C3↓，C3d正常，表明合成↓；这些指标都是以C3d来判断的，其含量一般小于1mg，检测方法多用单扩法或火箭电泳三.补体检测的临床意义：1.补体量↑:多见于急性炎症感染恢复期、组织损伤、癌肿等；2.补体量↓：见于补体消耗↑：体内有Ag、Ab

反应，如SLE、RA、移植排斥反应、G-菌感染等；补体合成↓：肝脏疾患：急慢性肝硬化、肝细胞癌、营养不良患者补体先天性缺乏：具有遗传性和家族史：C3缺陷导致严重感染、C1抑制物缺陷引起遗传性血管神经性水肿四.补体结合试验（CFT）：原理：补体可与任何一组AgAb复合物结合；一旦与某一AgAb复合物结合后，便不再与另一复合物结合。如：已知Ag＋待测物（Ab？）→AgAb＋C（补体）→＋致敏羊红细胞→不溶血结果判断：不溶血为阳性，即待测物中有相应的Ab或Ag；溶血为阴性，即待测物中无相应的Ab或Ag.优点：该试验既可测Ag、又可测Ab；Ag既可以是颗粒性Ag、也可是可溶性Ag、甚至可以是块状物，因此检测Ag的范围广；可以用于病毒、立克次氏体、细菌等多种病原体的