临床输血学检验(技术)：6血小板血型系统及检测技术

第五章血小板血型系统重庆医科大学检验医学院血小板血小板是血液中的有形成分之一，是血细胞中的一种。平均直径只有3.1μm,体积4.0～7.6μm3。由巨核细胞脱落的胞质构成，无细胞核，表面覆有细胞膜。它可以变形，在静止状态下，呈两面凸的圆盘状。血小板只见于哺乳动物体内。血小板的功能止血功能：在小血管破裂处，血小板聚集成血栓，堵住破裂口，并释放肾上腺素、5-羟色胺等具有收缩血管作用的物质，是促进血液凝固的重要因子之一。营养和支持毛细血管内皮细胞：如果血小板数量显著减少或功能有障碍，都会导致出血倾向。血小板表面具有复杂的血型抗原系统

血小板血型系统抗原

血小板表面具有复杂的抗原系统，由遗传决定。分为两大类:1.血小板相关性抗原（platelet-associatedantigen）

与白细胞共有的抗原有HLA

与红细胞共有的抗原有ABO等2.血小板特异性抗原（platelet-specificantigen）

血小板血型抗原研究的重要性

血小板具有最复杂的血型抗原系统,由于其表面的抗原众多且复杂,因此反复大量输注血小板的患者产生血小板同种抗体的频率比红细胞产生同种抗体的频率高几十倍。检测血小板血型抗体种类,交叉配型，从而选择血小板血型相同的血小板进行输注是解决血小板输注无效的较好方法。

第一节血小板血型抗原P83

定义：用同种免疫抗体检测出的血小板表面抗原。分类：1.血小板非特异性抗原（HLA抗原、ABO抗原）2.血小板特异性抗原（HPA）（一）血小板非特异性抗原

1954年发现，血小板表面存在的与其它细胞和组织共有的抗原。1.血小板上的红细胞血型抗原血小板表面存在ABH、Lewis、I、P等红细胞血型系统抗原但无Rh、Duffy、Kell等红细胞血型系统抗原。

血小板上红细胞血型抗原的来源1.血小板上的ABH抗原是从血浆中吸附的。2.血小板表面的ABH血型抗原是血小板膜糖蛋白（glycoprotein，GP）本身所表达的，如GPIIb、GPIIIa等。部分非O型个体血清中的糖基转移酶表达水平较高，血小板膜上含有极高水平的A/B物质，这也就是临床出现血小板输注无效或新生儿同种免疫性血小板减少性紫癜的主要原因之一。ABO血型同型输注血小板目前临床血小板输血推荐ABO血型同型输注。ABO血型不相合的血小板输注，更容易产生HLA抗体和HPA抗体。ABO血型非配合输注血小板A/B型血小板输注给O型患者：

ABO主侧不合：受血者体内的抗A或抗B抗体与输入的血小板表面的A/B抗原相互作用，导致血小板破坏或寿命缩短；O型血小板输注给A/B型患者：ABO次侧不合：供者血液中的ABO抗体与受者体内可溶性的ABO抗原物质形成复合物，被血小板膜上的Fc受体和补体受体吸附，再被单核-巨噬细胞吞噬破坏。2.血小板上的白细胞抗原系统存在：HLA-A、HLA-B和HLA-C位点等HLAⅠ类抗原无：HLA-II类分子(DP,DQ,DR)来源：一般情况，血小板表面的HLA抗原大部分为内源生成的血小板膜蛋白，小部分是从血浆中吸附的。（二）血小板特异性抗原血小板特异性抗原，又称人类血小板抗原（humanplateletantigen，HPA），是血小板膜糖蛋白携带的一类特异性抗原，由特定的抗原决定簇组成。HPA并非血小板所特有，HPA也分布于其他细胞上，如HPA-1和HPA-4存在于内皮细胞。HPAHPA：humanplateletantigen,是位于血小板膜糖蛋白(glycoprotein，GP)上的抗原表位。组成：GPIa,GPIb,IIb,IIIa,CD109。特点：具有独特的遗传多态性，与同种免疫有关。HPA的命名2003年国际输血协会（ISBT）和国际血栓与止血协会（ISTH）建立的血小板命名委员会（PNC）。

P85，表5-1HPA的命名原则P37

系统前以HPA开头,33种血小板同种特异性抗原。6大系统：HPA-1,2,3,4,5,HPA-15.以发现顺序按数字编号.对偶抗原用a,b，a表示基因频率大于50％的等位基因。b表示基因频率小于50％的等位基因。暂未发现对偶抗原的，用等位基因数字后面加后缀w.如：HPA-6bw。举例：HPA-1HPA-1系统：最早发现的血小板同种特异性抗原，位于GPⅢa分子上，HPAcDNA链上的T176C出现多态性，导致GPⅢa分子第33位氨基酸Leu33Pro的变化，决定了HPA-la/HPA-lb的特异性。HPA-l系统抗原可以诱导产生HPA-l特异性抗体，导致输血后紫癜和新生儿同种血小板减少性紫癜等。第二节

血小板血型系统抗体血小板抗原HLA和HPA均具有多态性，可介导同种抗体的产生，如HLA抗体、血小板特异性抗体和血小板自身抗体等，引发同种免疫性血小板减少。HLA抗体：79.9%，HLA抗体+HPA抗体：17.6%HPA抗体：2.7%血小板抗体同种抗体：由输血或妊娠等同种免疫产生，多为IgG型。这些抗体可以造成输血后血小板减少或降低输入血小板的存活。自身抗体：多在特发性血小板减少性紫癜中检出，也多为IgG型。这种抗体可以通过胎盘使新生儿发生一过性免疫性血小板减少症。

（一）HLA抗体HLA抗原的同种免疫：血小板上HLA的同种免疫与输血史、妊娠史、输注血液成分的类型和剂量、患者的疾病情况等有关。反复输血或多次妊娠是引起血小板HLA同种免疫的主要原因。（二）血小板特异性抗体HPA是血小板表面所具有的血小板独特性抗原，具有多态性。受血者因输注与之不配合的血小板，或因多次妊娠等免疫刺激，机体可能会产生抗血小板抗体（如HPA-1a、HPA-2b、HPA-3a、HPA-4a抗体等。）（三）血小板自身抗体

由于患者体内自身免疫系统失调，机体产生针对自身血小板抗原（如HPA、HLA等）的抗体，多为IgG或IgA型抗体，可引起特发性血小板减少性紫癜（ITP）。

第三节血小板血型的临床应用一、血小板输注无效（PTR）二、输血后紫癜(PTP)三、新生儿同种免疫性血小板减少性紫癜(NAITP)四、特发性血小板减少性紫癜－ITP一、血小板输注无效（PTR）P87PTR：platelettransfusionrefractoriness定义：指患者在连续2次接受足够剂量的的血小板输注后，血小板计数未见明显提高，临床出血表现未见明显改善。判定血小板输注效果1.校正后的血小板上升数（correctedcountincrement，CCI）输血后1小时CCI<7.5，24小时CCI<4.5说明血小板输注无效。2.血小板回收率

（percentageplateletrecovery，PPR）输血后24小时PPR<20%判定为血小板输注无效产生PTR的原因

(1)免疫性同种抗体(HLA占80%

、HPA、ABO)或自身抗体(ITP等)导致血小板破坏或血小板寿命显著缩短。(2)非免疫性血小板消耗，血小板本身质量欠佳，多发生于脾肿大、发热、感染、出血和DIC患者中。非免疫性因素逐渐成为血小板输注无效的主要原因。HLA同种抗体引起的PTRHLA抗原性较强多次输血HLA抗体输注随机血小板（血小板膜上存在的HLA-A、B抗原）抗体与输入的血小板起免疫反应血小板破坏血小板输注无效。

HLA致敏是最常见的血小板输注无效的免疫因素。血小板抗体引起的PTR反复输注血小板血小板同种抗体再次输注血小板血小板抗原抗体的免疫反应血小板迅速破坏，计数不升高反而下降血小板输注无效。

免疫/非免疫性因素引起的PTR二者的区别：

同种异体免疫：输入的血小板很快破坏，输注后1h和24h均不见血小板计数增高。

非免疫性因素：输注后1h血小板计数增高，但是24h计数不增高或受影响。

二、输血后血小板减少性紫癜（PTP）PTP：post-transfusionpurpura，P89输血后血小板减少性紫癜是由于患者多次妊娠或输入不相容的血小板/其他血液成分而产生血小板抗体，破坏输入的和/或自身的血小板，引起急性、暂时性血小板减少的临床综合征。PTP多发生在有妊娠史和/或输血史的女性患者。一般在输红细胞、血浆或血小板后5-10天左右突然发生。预防PTP和PTR的发生血液中心：1.应建立供血者HLA、HPA资料库。2.应紫外线照射血小板制品；3.应采用白细胞滤器减少血小板制品中的白细胞含量。

输血科：1.血小板交叉配血实验2.配合型血小板输注：选用ABO血型同型的血小板RhD阴性育龄妇女最好选用RhD阴性供者的浓缩血小板HPA与HLA血型配合性的血小板选择HLA-1类抗原与患者相合的供者单采血小板临床治疗：血浆置换静脉注射大量免疫球蛋白较大剂量的皮质激素短程治疗三、新生儿同种免疫性血小板减少性紫癜NAITP：neonatalalloimmunethrombocytopenia概要：胎儿和母亲的血小板血型不合，使母亲产生同种抗体，通过胎盘进入胎儿体内，与血小板反应而导致胎儿或新生儿的血小板减少症，其发病机制类似新生儿溶血病。原因：大多由于血小板特异性抗体所导致，如：HPA-1a抗体，HPA-3a、HPA-4a抗体。HLA和ABO血型不合一般不会引起NAITP。诊断：检测母亲血清中的血小板抗体，患儿血小板表面是否结合血小板抗体。治疗：给患儿输入与母体中同种抗体无反应性的血小板，或者换血。预防：给母亲作血浆置换。四、特发性血小板减少性紫癜－ITPITP：idiopathicthrombocytopenicpurpuraITP是一种自身免疫性疾病，其特征为单核-巨噬系统破坏自身抗体覆盖的血小板导致血小板计数的降低。血小板自身抗体可游离于血清中以及吸附在血小板表面上，它不仅能与自身和同种血小板结合，而且也可与巨核细胞结合，因此，不仅引起血小板破坏，也影响了血小板的生成。是免疫性外周血小板破坏增加而引起的最常见的出血性疾病。ITP原因：患者体内存在抗血小板的自身抗体，破坏血小板，表现为出血。检测：PAIgG治疗：皮激素等免疫抑制剂，脾切除，血浆置换以及注射免疫球蛋白，降低血小板抗体效价。PAIgG的产生血小板血型检测的临床意义1.提高血小板输注疗效：选择与患者血小板和HLA相配的供血者，可提高输注浓缩血小板效果。

2.诊断新生儿同种免疫血小板减少性紫癜。

3.诊断特发性血小板减少性紫癜。

第六章血小板血型检测技术P91意义：在现代临床输血工作中，为了能给新生儿同种免疫血小板减少症、输血后紫癜以及血小板输注无效等患者提供正确、及时的诊断和治疗，须对病人和献血者进行血小板特异性抗原的准确分型。由于血小板血型鉴定的实验方法相对复杂,检测费用相对较高,目前尚未广泛应用于临床。血小板血型相关实验技术血清学检测方法：有了很大进展分子生物学技术：开始应用于血小板血型分型。检测血小板上的ABO抗原：借助红细胞检测检测血小板上的HLA抗原检测血小板上的HPA抗原由于方法学和血小板谱抗原等问题，单独血小板特异性抗体的检出非常罕见，血小板特异性抗体一般与HLA抗体共存。为预防和减少血小板输注无效和输血后紫癜的发生，最好是对患者进行血小板抗体筛选。一、单克隆抗体特异的血小板抗原固定试验

MAIPA：monoclonalantibody-specificimmobilizationofplateletantigensassay评价：敏感度高、特异性较好。是检测和鉴定血小板特异性抗体应用最广泛的方法。MAIPA原理MAIPA的应用1.可灵敏地检测血小板特异性抗体。2.血小板交叉配血试验二、简易致敏红细胞血小板血清学实验

SEPSA：simplifedsensitizederythrocyteplateletserologyassay1.血小板抗体筛查（HLA、HPA）2.血小板交叉配血试验：为患者筛选相容性的血小板或血小板供者S