选1-3-1菊花的组织培养

菊花的组织培养（1）细胞的分化①概念：在个体发育中，相同细胞的后代在形态、结构、生理功能上发生稳定性差异的过程.②过程：如：受精卵增殖、生长、分化形成组织、器官、系统.③原因：基因选择性表达的结果.分化后细胞的异同相同点是遗传物质相同不同点是形态结构和功能不同一、基础知识（2）细胞的全能性①定义：生物体的细胞具有使后代细胞形成完整个体的潜能的特性.②原理：生物体的每一个细胞都包含有该物种所特有的全套遗传物质，都有发育成为完整个体所必需的全部基因.受精卵>生殖细胞>体细胞③全能性的比较:植物细胞表现全能性的条件1.必须离题2.一定的营养物质3.适宜的培养条件一、基础知识

指植物的离体部分（包括任何器官、组织、细胞或原生质体），在人工控制的培养基及环境条件（温度及光照）下，得以生长和分化成完整植株的一种无菌培养技术。又称：植物离体培养一、基础知识(3)植物组织培养二、植物组织培养的基本过程植物组织培养细胞离体①必要条件：一定的营养物质、激素和其他外界条件②原理:细胞的全能性A.外植体：从活植物体上切下进行培养的那部分细胞、组织或器官.③相关概念:B.脱分化：由高度分化的植物器官、组织或细胞产生愈伤组织的过程，又称去分化。C.再分化：脱分化产生的愈伤组织在培养过程中重新分化根或芽等器官的过程D.愈伤组织:细胞排列疏松而无规则,是高度液泡化的、成无定形状态的薄壁细胞.愈伤组织三、影响植物组织培养的因素：1、外植体的选取

不同植物的组织培养难度不同同一种植物的不同组织培养难度不同2、培养基的配制(MS培养基)

大量元素：C、H、O、N、P、K、Ca、Mg、S

微量元素：B、Mn、Cu、Zn、Fe、Mo、I、Co

有机物：甘氨酸、烟酸、肌醇、维生素、蔗糖等

植物激素：生长素、细胞分裂素、赤霉素等未开花植物的茎上部新萌生的侧枝1.培养基的各种营养物质的作用是什么？

2.MS培养基的配房与微生物的培养基配方相比有哪些明显不同？（1）微量元素和大量元素提供植物细胞生活所必须的无机盐；（2）蔗糖提供碳源、同时维持细胞渗透压（3）甘氨酸等主要是为了满足特殊的营养需求微生物培养基以有机营养为主，MS培养基则需要提供大量的无机营养，包括植物生长所必须的大量元素和微量元素。3、不同植物激素使用顺序使用顺序实验结果先生长素，后细胞分裂素

先细胞分裂素，后生长素

同时使用

有利于细胞分裂但不分化细胞既分裂也分化分化频率提高4、不同植物激素使用量生长素/细胞分裂素比值结果比值高时比值低时

比值适中促根分化，抑芽形成

促芽分化，抑根形成促进愈伤组织生长5、pH、温度、光照（菊花组培）

pH=5.8

温度控制在18—22℃

每日光照12h6、消毒在培养的整个过程中，都需要是一个无菌环境离体组织或细胞植物体脱分化细胞分裂素≈生长素愈伤组织芽根细胞分裂素>生长素细胞分裂素<生长素再分化植物细胞培养不需要光需要光制备MS固体培养基外植体消毒接种培养栽培四、实验操作移栽1.洗衣粉软刷刷洗，流水冲20min；2.70％酒精摇动2-3次，持续6-7s，无菌水冲洗；3.0.1％氯化汞1-2min，无菌水冲洗至少三次之上配制各种母液配制培养基灭毒制备MS固体培养基外植体消毒接种培养栽培四、实验操作移栽无菌箱温度18-22℃每日光照12h1.70％酒精工作台擦拭一遍2.点燃酒精灯，每次操作酒精灯旁边进行3.每次使用的器械都要灼烧灭菌1、培养基的灭菌（高压蒸汽灭菌）2、外植体的消毒（酒精、氯化汞）3、接种的无菌操作（酒精、酒精灯——灼烧）4、无菌箱中的培养；5、移栽到消过毒的环境中生存一段时间。在整个操作过程中，是如何来实现无菌环境的？

培养几天后若有颜色的绒毛菌落，属于_________菌落，肯能是植物体材料灭菌不当；若是有光泽的粘液状菌落，属于__________污染，可能是由接种人员造成的，比如：未戴口罩，接种时说话，手及器具消毒不净。真菌细菌

发现的被污染的培养基，特别是真菌性的污染，一定不能打开培养基，而应用高压蒸汽锅灭菌。结果分析与评价（一）对接种操作中污染情况的分析（二）是否完成了对植物组织的脱分化和再分化（三）是否进行了统计、对照与记录（四）生根苗的移栽是否合格菊花的组织培养再分化材料性质、营养物质、调节物质、环境条件外植体的消毒接种基本原理:细胞的全能性基本过程:脱分化愈伤组织影响因素：操作流程：配制MS固体培养基培养移栽栽培离体组织或细胞植物体芽根练习答案1.答：植物组织培养所利用的植物材料体积小、抗性差，对培养条件的要求较高。用于植物组织培养的培养基同样适合于某些微生物的生长，如一些细菌、真菌等的生长。而培养物一旦受到微生物的污染，就会导致实验前功尽弃，因此要进行严格的无菌操作。2.答：外植体的生理状态是成功进行组织培养的重要条件之一。生长旺盛的嫩枝生理状况好，容易诱导脱分化和再分化。

为了探究6-BA和IAA对某菊花品种茎尖外植体再生丛芽的影响，某研究小组在ＭＳ培养基中加入6-BA和IAA，配制成四种培养基（见下表），灭菌后分别接种数量相同、生长状态一致、消毒后的茎尖外植体，在适宜条件下培养一段时间后，统计再生丛芽外植体的比率（m），以及再生丛芽外植体上的丛芽平均数（n），结果如下表。

１）按照植物的需求量，培养基中无机盐的元素可分为

和

两类。上述培养基中，6-BA属于

类生长调节剂。２）在该实验中，自变量是，因变量是

，

自变量的取值范围是

。３）从实验结果可知，诱导丛芽总数最少的培养基是号培养基。４）为了诱导该菊花试管苗生根，培养基中一般不加入

（填“6-BA”或“IAA”）。大量元素微量元素细胞分裂素IAA浓度从芽外植体的比率及

从芽平均数0~0.5mg/L16-BA

辣椒素作为一种生物碱广泛用于食品保健、医药工业等领域。辣椒素的获得途径如图。

（1）图中①和②分别表示辣椒组织培养中细胞的_________和_________过程。（2）图中培养外植体的培养基中常用的凝固剂是________。培养基中的生长素和细胞分裂素用量的比值______（填“高”或“低”）时，有利于芽的分化。对培养基彻底灭菌时，应采用的灭菌方法是__________。（3）图中外植体的消毒所需酒精的体积分数是_______。用酶解法将愈伤组织分离成单细胞时，常用的酶是__________和纤维素酶。（4）提取辣椒素过程中，萃取加热时需安装冷凝回流装置，其目的是_________。

低再分化琼脂脱分化高压蒸汽灭菌70%果胶酶防止有机溶剂挥发②③练习1、下图是植物组织培养的简略表示。据此回答：（1）①表示__________________，它能被培养成为④的根本原因是______________________________________。（2）②表示____________，它与①相比分化程度__________，全能性____________.（3）若想制成人工种子，应选用____________。（4）若①是花药，则④是____________，继续对其使用____________处理可获得____________正常植株，该过程称为__。（5）若①是胡萝卜根尖细胞，则培养成④的叶片的颜色为____________，这说明____________。（6）若利用此项技术制造治疗烫伤、割伤的药物——紫草素，培养将进行到____________。④①脱分化②再分化③答案：（1）离体的植物组织或器官植物细胞具有全能性（2）愈伤组织低高（3）③（4）单倍体植株秋水仙素纯合体单倍体育种（5）绿色含有表达叶绿体的基因（6）②练习2、基因型为AaBb的水稻（含24条染色体）的花药通过无菌操作接入试管后，在一定条件下形成试管苗，问：（1）愈伤组织是花粉细胞不断分裂后形成的不规则的细胞团，愈伤组织形成过程中，必须从培养基中获得_____________等营养物质。（2）要促进花粉细胞分裂生长，培养基中应有_____________和_____________两类激素。（3）愈伤组织分化是指愈伤组织形成