第十五章风湿性疾病实验诊断

第十五章风湿性疾病的实验诊断第一临床学院实验诊断学教研室李士军教授Tel：e-mail:风湿性疾病风湿性疾病（rheumaticdiseases）是指一大类病因各不相同，但累及机体多个器官与组织的疾病。许多风湿性疾病与自身免疫密切相关,因自身免疫导致的组织器官损伤或功能障碍所致疾病又称自身免疫病。

泛指影响骨、关节及其周围软组织，包括：肌肉、韧带、滑囊、筋膜等结构的一大组疾病。自身免疫病结缔组织病风湿病免疫耐受（autoimmunetolerance）自身免疫（autoimmunity）自身免疫病（autoimmunedisease,AID）当某种原因使自身免疫应答过分强烈，导致相应的自身组织器官损伤或功能障碍，这种病理状态就称为自身免疫病。自身抗体（auto-antibody)

机体产生的针对自身组织器官或细胞、细胞成分的抗体。风湿性疾病相关机制第一节概述自身免疫病的临床特征:女性多见高滴度的自身抗体有重叠现象病因多数不明:自发性、病毒感染、药物病程较长易反复免疫抑制药物治疗有一定疗效常见自身免疫病的分类→器官特异性常见自身免疫病的分类→非器官特异性病名自身抗原类风湿性关节炎变性IgG、类风湿相关的核抗原干燥综合征细胞核（SSA、SSB）、唾液腺管系统性红斑狼疮胞核成分（DNA、DNP、RNP、Sm）混合性结缔组织病细胞核（u1RNP）第二节风湿性疾病常用的筛查实验一、常规检测试验

1、ASO；2、ESR；3、CRP；4、尿蛋白二、常用筛查试验

1、抗核抗体ANA

2、类风湿因子RF3、免疫球蛋白测定Ig4、补体C3、C4测定1、抗链球菌溶血素“O”测定（anti-streptolysin“O”,ASO）溶血素“O”是A族溶血性链球菌的一种具有溶血活性的粘蛋白，ASO是链球菌溶血素“O”的对应抗体一、常规检测试验临床意义1、ASO升高：常见于A族溶血性链球菌感染引起的疾病，如风湿热、肾小球肾炎、扁桃体炎等。2、ASO阳性不一定是近期感染的指标，应多次动态观察。3、病人确有A族溶血性链球菌感染，但ASO持续阴性，可能是发病早期用过大量的抗生素或免疫抑制剂等。脓庖病扁桃体炎2、C反应蛋白测定

C－reactiveprotein,CRP

CRP是一种能与肺炎链球菌的细胞壁C多糖反应的急性时相反应蛋白。具有激活补体，促进吞噬和免疫调理作用。临床意义：1、组织损伤，CRP常于发病后数小时迅速升高，病变好转时迅速下降。2、细菌性感染和病毒性感染的鉴别诊断指标，细菌性感染CRP常升高明显。3、风湿热活动期，CRP明显升高，而治疗好转后，CRP逐渐降至正常。4、超敏CRP（hs-CRP）作为心血管病变的生物标志物。

抗核抗体是一组将自身真核细胞的各种细胞核成分作为靶抗原的自身抗体的总称。特点：IgG为主，无器官和种属特异性，主要存在于自身免疫病患者的血清中。抗核抗体的首选方法是间接免疫荧光法（IIF）原理：被检血清中存在抗细胞核成分的抗体，可以特异的和抗原基质片上的细胞核抗原成份结合，形成抗原抗体复合物，再与荧光素标记的抗人IgG抗体结合，在荧光显微镜下可观察到细胞核位置发生特异的亮绿色荧光为ANA阳性。根据细胞内靶抗原分子理化特性和分布部位分类：ANA亚型:anti-dsDNA,anti-Sm,anti-SSA,SSB,Scl-70antibodies,etc.1、抗核抗体测定（anti-nuclearantibody,ANA）二、常用筛查试验细胞结构DetectingmethodofANAIndirectimmunofluorescence（IIF）荧光显微镜下核型分析①均质型Homogeneous抗dsDNA与抗组蛋白抗体。细胞胞浆荧光染色阳性。与抗不溶性DNP，抗组蛋白抗体有关。主要见于SLE。②斑点型（SpeckledPattern）：与可提取性核抗原抗体有关（ENA，extractablenuclearantigen

antibodies），如：anti-U1RNP,anti-Sm,anti-Scl-70,anti-SSA,SSB.常见于MCTD，SLE。③核膜型membranous与抗dsDNA有关，荧光染色在核膜周围主要见于ＳＬＥ④核仁型（nucleolar）抗核糖体、RNA聚合酶的抗体。常见于硬皮病2、类风湿因子

（rheumatoidfactor,RF）类风湿因子（rheumatoidfactor，RF）是一种抗人或动物IgG分子Fc片段抗原决定簇的抗体，是以变性IgG为靶抗原的自身抗体。RF在RA中检出率达79.6%。RF并不是RA独有的特异性抗体,在SLE病人约有50％阳性，在其他结缔组织病如SS、硬皮病、慢性活动性肝炎及老年人中均可有不同程度的阳性率。RF阴性不能排除RA的诊断。3、免疫球蛋白测定自身免疫性疾病中免疫球蛋白常升高，并与疾病活动性有一定的相关性。

4、补体C3、C4测定第三节风湿性疾病常用的诊断实验抗体靶抗原、特性临床意义抗dsDNA细胞核DNA双螺旋结构，识别嘌呤和嘧啶碱基SLE敏感性30％－50％，SLE重要诊断标准之一。滴度可作为治疗监测指标。抗Sm（smith)snRNP核心蛋白A-GSLE所特有，不与疾病活动相关，敏感性较低30％－40％.抗U1－RNPU1－核糖核蛋白RNP混合性结缔组织病（MCTD），30％－40％SLE也可出现抗SSA／SSBRNA蛋白复合体干燥综合征（灵敏度50％－80％），SLA、RA等也可出现抗Scl－70DNA拓扑异构酶Ⅰ进行性系统性硬化症（PSS）抗J0－1抗体组氨酰-tRNA合成酶为靶抗原多发性肌炎，皮肌炎常见自身抗体检测临床意义提取核抗原(extractablenuclearantigen，ENA)：是可提取核抗原的总称，ENA抗原可用盐水或磷酸盐缓冲液从细胞核中被提取。anti-Smanti-U1-RNPanti-SS-Aanti-SS-Banti-Jo-1anti-Scl-70Anti-Rib抗ENA抗体谱测定PrincipalofdetectingENA

1.Immunoblottechniques

2.ELISA

抗体靶抗原、特性临床意义抗环瓜氨酸肽抗体（anti-CCP）丝集蛋白中的氨基酸-瓜氨酸诊断RA的高度特异性新指标，敏感性80%，特异性96%，尤其早期ＲＡ可阳性。（抗角蛋白抗体AKA辅助诊断）抗心磷脂抗体（ACA）心磷脂为靶抗原SLE等自身免疫病，抗磷脂综合征（习惯性流产、血栓、血小板减少）抗中性粒细胞浆抗体（ANCA)胞浆型cANCA（蛋白酶3，PR3）韦格纳肉芽肿(呼吸、泌尿系统累及时灵敏度高）,阳性率达90%。核周型pANCA抗髓过氧化物酶（MPO）抗体坏死性或新月型肾小球肾炎达80%，多发性微动脉炎。抗平滑肌抗体（SMA）肌动蛋白等，非器官种属特异性自身免疫性肝炎（90%），原发性胆汁性肝硬化PBC常见自身抗体检测临床意义淋巴细胞免疫表型检测

HLA-B27大部分强直性脊柱炎（AS）患者与HLA-B27密切相关，目前，国际上常规检测HLA-B27用于AS辅助诊断。第四节常见风湿性疾病的实验诊断类风湿关节炎（RA）

RA是一种慢性、反复发作、主要累及关节部位的系统性炎症性疾病。

1．主要免疫学特征：血清和滑液中存在类风湿因子（RF）,淋巴细胞活化产生细胞因子。

2、主要抗体：RF、抗CCP抗体、抗核周因子、抗角质蛋白抗体等阳性。JointsMostAffectedbyRheumatoidArthritis(Symmetricaljointinvolvement)ThedetectionRFintheserumisalaboratorydiagnosticcriterion1.Morningstiffness2.Arthritis(softtissueswellingoreffusion)ofatleast3joints3.Arthritisofthehandjointsincludingthemetacarpophalangealandproximalinterphalangealjoints4.Symmetricaljointinvolvement5.Subcutaneousrheumatoidnodules6.RadiologicalchangestypicalofRA.7.Rheumatoidfactors(RF)ispositive系统性红斑狼疮(SLE)

SLE是一种可恶化或缓解的非器官特异性免疫炎性疾病，疾病活动常可累及多个器官系统。主要免疫学特征

1．抗核抗体(ANA)阳性，较为特异的抗核抗体为抗dsDNA。2．出现多种其它自身抗体，如抗磷脂抗体、抗Sm抗体等。

3．IC和补体沿肾小球基底膜、表皮和真皮交界处沉积。

4．病情活动期，血清补体水平下降。SLE的诊断标准1.Characteristicrashacrossthecheek2.Discoidlesionrash3.Photosensitivity4.Oralulcers5.Arthritis6.Inflammationofmembranesinthelungs,theheart,ortheabdomen7.Evidenceofkidneydisease8.Evidenceofsevereneurologicdisease9.

Blooddisorders,includinglowredandwhitebloodcellandplateletcounts10.Immunologicabnormalities11.Positiveantinuclearantibody(ANA)Note:FourofthecriteriamustbeexperiencedbyapatientbeforeaclassificationofSLEcanbemade.Thesecriteria,proposedbytheAmericanCollegeofRheumatology,arenottoberelieduponsolelyfordiagnosis.Characteristicrashacrossthecheek,discoidlesionrash风湿性疾病实验诊断流程免疫球蛋白、补体等检测抗核抗体ANA抗ENA抗体谱抗中性粒细胞浆抗体RF等其他抗体检测+如何诊断风湿性疾病?病史MedicalHistory体格检查Physicalexam

实验室检查LaboratoryTests1.Antinuclearantibody(ANA)，Rheumatoidfactor2.C-reactiveproteintest3.Erythrocytesedimentationrate(ESR)4.Ig,Complement：Ig、C3，C4.5.Completebloodcount6.Urinalysis（＋）病例分析患者女，22岁。