食品微生物检验方法ISOFDA

食品微生物检验方法中国检验检疫科学研究院北京陆桥技术有限有限责任公司何艳玲内容提要菌落总数检测大肠菌群及大肠杆菌检测金黄色葡萄球菌检测沙门氏菌检测单核细胞增生李斯特氏菌检测菌落总数测定——菌落总数的概念菌落总数是指在被检样品的单位重量（g）、容积（ml）或表面积（cm2）内，所含能于某种固体培养基上，在一定条件下培养后所生成的菌落的总数。菌落总数测定——卫生学意义判定食品被细菌污染的程度及卫生质量。及时反映食品加工过程是否符合卫生要求，为被检食品卫生学评价提供依据。通常认为，食品中细菌数量越多，则可考虑致病菌污染的可能性越大，菌落总数的多少在一定程度上标志着食品卫生质量的优劣。

FDABAM菌落总数测定流程检样xg/mL+9xml稀释液（磷酸盐缓冲液）适当十倍稀释样品选择2~3个连续适宜稀释度各取1mL分别加入灭菌平皿内（每个稀释度做两个平行）每皿内加入适量平板计数琼脂（PCA）35℃，48±2h菌落计数FDABAM菌落计数方法选择25~250CFU之间的菌落进行计数，计算公式如下：N=∑C/（1*n1+0.1*n2）*d所有平板的菌落数都不足25CFU，报告EAPC/ml（g）为＜25*1/d。EAPC：estimatedaerobicplatecount所有平板的菌落数都超过250CFU，但不足100/cm2，报告EAPC/ml（g）为最接近250CFU的平板菌落数的估计值，乘以相应的稀释度。所有平板的菌落数都超过100/cm2，计算平板的面积（直径为90mm的平板面积为65cm2），估计最高稀释度每cm2的菌落数，乘以相应平板面积作为该稀释度的菌落计数结果，报告EAPC/ml（g）为＞65*100*1/d。无法计数的平板报告LA（LaboratoryAccident）。最终结果保留前两位有效数字。按照4舍6入，5是奇进偶不进。

ISO4833-2003菌落总数测定流程检样xg/mL+9xml稀释液（磷酸盐缓冲液）适当十倍稀释样品选择2~3个连续适宜稀释度各取1mL分别加入灭菌平皿内（每个稀释度做两个平行）每皿内加入适量（12~15mL）平板计数琼脂（PCA），30±1℃，72±3h菌落计数如果怀疑样品中含有在培养基表面蔓延生长的菌落，待琼脂凝固后，在其上覆盖一层（4mL）水琼脂。平板叠放不超过6个ISO4833-2003菌落计数方法选择连续2个稀释度不超过300CFU的平板，且一个平板至少含15CFU进行计数，计算公式如下：N=∑C/（n1+0.1*n2）*d所有平板的菌落数都不足15CFU，计算2平板菌落的算术平均值m，液体样品：NE=m固体样品：NE=m×d-1无菌生长：液体样品：lessthan1;固体样品：lessthan1×d-1最终结果保留前两位有效数字。菌落总数测定几点说明由于检样中采用30/35℃有氧条件下培养，因而并不是样品中实际的总活菌数，一些特殊营养要求的细菌、厌氧菌、微需氧菌、以及非嗜中温细菌，均难以反映出来。鉴于食品检样中的细菌细胞是以单个、成双、链状、葡萄状或成堆的形式存在，因而在平板上出现的菌落可以来源于细胞块，也可以来源于单个细胞，因而平板上所得菌落的数字不应报告活菌数，而应以单位重量、容积或表面积内的菌落数或菌落形成单位（colonyformingunits，CFU）报告。菌落总数测定几点要求每个样品从开始稀释到倾注最后一个平皿所用的时间不得超过15min，主要为防止细菌增殖和产生片状菌落。样液与琼脂应充分混合，避免将混合物溅到平皿壁和皿盖上。皿内琼脂凝固后，不要长时间放置，然后倒置培养，可避免菌落蔓延生长。检样过程中应用稀释剂做空白对照，用以判定稀释液、培养基、平皿或吸管可能存在的污染。同时，检样过程中应在工作台上打开一块空白平板计数琼脂，其暴露时间应与检样时间相当，以了解检样在检验操作过程中有无受到来自空气的污染。检样稀释液有时带有食品颗粒，为避免与细菌菌落发生混淆，可作一检样稀释液与平板计数琼脂混合的平皿，不经培养，于4℃放置，以便在计数检样时用作对照。大肠菌群的定定义大肠菌菌群系系指一一群能能发酵酵乳糖糖、产产酸产产气、、需氧氧和兼兼性厌厌氧的的革兰兰氏阴阴性无无芽孢孢杆菌菌。大肠菌菌群不不是细细菌学学上的的分类类命名名，而而是根根据卫卫生学学方面面的要要求，，提出出的与与粪便便污染染有关关的细细菌，，即作作为食食品、、水体体等是是否受受过人人畜粪粪便污污染的的指示示菌，，这些些细菌菌在生生化及及血清清学方方面并并非完完全一一致。。根据据进一一步的的生化化试验验，可可将这这群细细菌再再分为为大肠肠艾希希氏菌菌（俗俗称大大肠杆杆菌））、弗弗氏柠柠檬酸酸杆菌菌、肺肺炎克克雷伯伯氏菌菌和阴阴沟肠肠杆菌菌等。。大肠杆杆菌的的定义义大肠杆杆菌（（也称称大肠肠埃希希氏菌菌），，分类类于肠肠杆菌菌科，，归属属于埃埃希氏氏菌属属。大肠杆杆菌指指革兰兰氏阴阴性无无芽孢孢杆菌菌、乳乳糖发发酵产产酸产产气、、IMViC试试验（（靛基基质、、MR、V-P、柠柠檬酸酸盐试试验））为++--或或-+--的细细菌。。与人类类有关关的大大肠杆杆菌统统称为为致泻泻性大大肠杆杆菌，，包括括五种种：肠肠毒素素性大大肠杆杆菌（（ETEC）、、致病病性大大肠杆杆菌（（EPEC）、、出血血性大大肠杆杆菌（（EHEC）、、侵袭袭性大大肠杆杆菌（（EIEC）、、黏附附性大大肠杆杆菌（（EAEC）。。大肠菌菌群和和大肠肠杆菌菌的关关系耐热大大肠菌菌群的的定义义：能在液液体乳乳糖培培养基基中35/37℃℃培培养48h产酸酸产气气，并并在44.5℃℃培养养24h产产酸产产气的的细菌菌（依依据ISO标准准）卫生学学意义义大肠菌菌群和和大肠肠杆菌菌是评评价卫卫生质质量的的重要要指标标，作作为食食品中中的粪粪便污污染指指标。。食品中中检出出大肠肠菌群群，表表明该该食品品有粪粪便污污染，，既可可能有有肠道道致病病菌存存在，，因而而也就就有可可能通通过污污染的的食品品引起起肠道道传染染病的的流行行。大大肠菌菌群数数的高高低，，表明明了粪粪便污污染的的程度度，也也反映映了对对人体体健康康危害害性的的大小小。大肠杆杆菌在在外界界存活活时间间与一一些主主要肠肠道致致病菌菌接近近，它它的出出现预预示着着某些些肠道道病原原菌的的存在在，因因此该该菌是是国际际上公公认的的卫生生监测测指示示菌。。近年年来，，有些些国家家在执执行HACCP管理理中，，将大大肠杆杆菌检检测作作为微微生物物污染染状况况的监监测指指标和和HACCP实实施效效果的的评估估指标标。大肠杆杆菌的的生物物学特特性基本形形态：：此菌为为两端端钝圆圆的短短小杆杆菌，，一般般约0.5-0.8μm*1.0-3.0μμm，，多单单独存存在或或成双双，但但不呈呈长链链排列列。约约50%的的菌株株有周周生鞭鞭毛，，但多多数只只有1-4根，，一般般不超超过10根根，故故菌体体动力力弱。。多数数菌株株有菌菌毛，，有的的有荚荚膜或或微荚荚膜，，不形形成芽芽孢，，对普普通碱碱性染染料着着色良良好，，革兰兰氏染染色阴阴性。。大肠杆杆菌的的生物物学特特性培养特特性：：大肠杆杆菌合合成代代谢能能力强强，在在含无无机盐盐、铵铵盐、、葡萄萄糖的的普通通培养养基上上生长长良好好。最最适生生长温温度为为37℃，，在42-44℃℃条件件下仍仍能生生长，，生长长温度度范围围15-46℃℃。。在普通通营养养琼脂脂上有有3中中菌落落形态态：1）光光滑型型：菌菌落边边缘整整齐，，表面面有光光泽、、湿润润、光滑、、呈灰灰色，，在生生理盐盐水中中易分分散；；2）粗粗糙型型：菌菌落扁扁平、、干涩涩、边边缘不不整齐齐，易易在生理理盐水水中自自凝；；3）黏液液型：常常为含有有荚膜的的菌株。。大肠菌群群及大肠肠杆菌测测定———MPN法法检验流流程（FDABAM）检样50g+450ml稀释释液适当十倍倍稀释样样品选择3个个适宜的的连续稀稀释度的的样品稀稀释液，，每个稀释释度接种种三管LST肉肉汤（每每管9mlLST肉汤汤并加有有导管）），每管接种种1mL35℃，，24±2h~48±2h没有产气气管有有产产气管报告阴性性接种BGLB肉肉汤管接接种EC肉汤汤35±±℃，，48±2h44.5±0.5℃℃（（水浴培培养）24±±2h~48±±2h查MPN表报告告结果产气管接接种EMB平板板（35℃、18~24h））（大肠菌菌群）从EMB平板上上挑取5个可疑疑菌转接接到PCA斜面，进行行革兰氏氏染色、、IMVC生化化鉴定、、接种LST复检产产气查MPN表报告告结果（大肠杆杆菌）大肠菌群群测定———MPN法法检验几几点说明明MPN检检索表：：MPN为为最大大可能数数(MostProbableNumber)的简简称。这这种方法法，对样样品进行行连续系系列稀释释，加入入培养基基进行培培养，从从规定的的反应呈呈阳性管管数的出出现率，，用概率率论来推推算样品品中菌数数最近似似的数值值。MPN检检索表只只给了三三个稀释释度，如如改用不不同的稀稀释度，，则表内内数字应应相应降降低或增增加10倍。初发酵和和证实试试验：1）两步步法进行行了两次次乳糖发发酵试验验。初发发酵和证证实实验验所用培培养基不不同，但但都是为为了证实实培养物物是否符符合大肠肠菌群的的定义，，即“在在37℃℃分解乳乳糖产酸酸产气””。LST中中提供了了磷酸盐盐缓冲体体系，氯氯化钠可可维持渗渗透压，，月桂基基硫酸钠钠可抑制制非大肠肠菌群的的生长，，这个缓缓冲蛋白白胨乳糖糖肉汤允允许“缓缓慢乳糖糖发酵（（Slowlactosefermentations））”来促促进菌体体产气。。BGLB中胆胆盐和煌煌绿可以以抑制革革兰氏阳阳性细菌菌和除了了大肠菌菌群的很很多革兰兰氏阴性性细菌。。2）初发酵阳阳性管，，不能肯肯定就是是大肠菌菌群细菌菌，经过过证实试试验后，，有时可可能成为为阴性。。有数据表表明，食食品中大大肠菌群群检验步步骤的符符合率，，初发酵酵与证实实试验相相差较大大。因此此，在实实际检测测工作中中，证实实试验是是必需的的。产气量与与倒管：：在乳糖发发酵试验验工作中中，经常常可以看看到在发发酵倒管管内极微微少的气气泡（有有时比小小米粒还还小），，有时可可以遇到到在初发发酵时产产酸或沿沿管壁有有缓缓上上浮的小小气泡。。实验表表明，大大肠菌群群的产气气量，多多者可以以使发酵酵倒管全全部充满满气体，，少者可可以产生生比小米米粒还小小的气泡泡。如果果对产酸酸但未产产气的乳乳糖发酵酵如有疑疑问时，，可以用用手轻轻轻打动试试管，如如有气泡泡沿管壁壁上浮，，即应考考虑可能能有气体体产生，，而应作作进一步步试验。。不适于用用大肠菌菌群作为为粪便污污染指示示菌的食食品冷冻食品品经射线照照射处理理的食品品pH较高高的食品品在上述食食品中大大肠菌群群的细菌菌比许多多肠道病病原微生生物更易易死亡。。大肠杆菌菌测定———EMB选选择性分分离鉴别别EMB平平板典型型大肠杆杆菌菌落特特征：中心黑色或紫红色，有或无绿色金属光泽泽大肠杆菌菌测定———EMB选选择性分分离鉴别别EMB是是一种弱弱选择性性培养基基，一些些球菌也也可在该该培养基基上生长长；高压灭菌菌可使得得美蓝还还原从而而使培养养基的颜颜色呈不不均一橘橘黄色，，轻轻摇摇动培养养基可以以恢复原原有的正正常紫色色，倾注注平板前前应先摇摇匀；大肠杆菌菌在该培培养基上上并不一一定总是是呈现绿绿色的金金属光泽泽；该培养基基受可见见光易使使其中的的成分氧氧化，储储存及培培养细菌菌时都应应在避光光条件。。菌名菌落形态大肠埃希氏菌紫黑色，有绿色金属光泽肺炎克雷伯氏菌粉色，中心色深阴沟肠杆菌粉色，中心色深弗氏志贺氏菌无色鼠伤寒沙门氏菌无色粪链球菌无色大肠杆菌菌测定——革兰兰氏染色色基本原理理：革兰氏染染色法是是细菌学学中广泛泛使用的的一种重重要的鉴鉴别染色色法。1884年由丹丹麦医师师Gram创立立。此法法可将细细菌分为为革兰氏氏阴性菌菌和革兰兰氏阳性性菌两大大类。革兰氏染染色的机机理主要要是利用用两类细细菌的细细胞壁成成分和结结构的不不同。革兰氏阴阴性菌的细胞胞壁中含含有较多多的类脂脂质，而而肽聚糖糖的含量量较少。。当用酒酒精或丙丙酮酸脱脱色时，，类脂质质被溶解解，增加加了细胞胞壁的通通透性，，使初染染后的结结晶紫和和碘的复复合物易易于渗出出，结果果细胞被被脱色，，经复染染后，又又染上复复染液的的颜色。。而革兰氏阳阳性菌细胞壁壁中肽聚聚糖的含含量多而而且交联联度大，，类脂质质含量少少，经乙乙醇或丙丙酮洗脱脱后，肽肽聚糖层层的孔径径变小，，通透性性降低，，因此细细胞仍保保留初染染时的颜颜色。大肠杆菌菌测定——革兰兰氏染色色GramnegativeGrampositiveGramstraining大肠杆菌菌测定——革兰兰氏染色色基本步骤骤：将涂片在在火焰上上固定，，滴加结结晶紫染染液，染染1min，水水洗；滴加革兰兰氏碘液液，作用用1min，水水洗；滴加95%乙醇醇脱色约约15～～30s,直至至染色液液被洗掉掉，不要要过分脱脱色，水水洗；滴加番红红复染液液，复染染1min，水水洗、待待干、镜镜检。结果：革革兰氏阳阳性菌呈呈紫色，革兰氏氏阴性菌菌呈红色。大肠杆菌菌测定——生化化鉴定Testpositivenegativebiotype1biotype2reagentIndole红色环不变色+-Kovacs’MR红色不变色++甲基红V-P玫瑰红色环不变色--V-P甲、乙液Citrate生长不生长---IMViC生化化试验金黄色葡葡萄球菌菌——生生物学特特性金黄色葡葡萄球菌菌呈球形形，直径0.8μm左左右，排排列成葡葡萄串状，，无芽孢孢，无荚荚膜。革兰氏染染色阳性性，但衰衰老、死亡或被被白细胞胞吞噬的的菌体，，常呈革兰兰氏阴性性。金黄色葡葡萄球菌菌——生生长特性性金黄色葡葡萄球菌菌在肉汤汤中呈浑浑浊生长长，在胰胰酪胨大大豆肉汤汤内有时时液体澄澄清，菌菌量多时时呈浑浊浊生长。。血平板上上金黄色色葡萄球球菌呈金金黄色，，有时也也为白色色，大而而突起、、圆形、、不透明明、表面面光滑，，周围有有溶血圈圈。Baird-Parker平平板上金金黄色葡葡萄球菌菌圆形突突起、光光滑、湿湿润，颜颜色呈灰灰色到黑黑色，边边缘淡色色，周围围为一浑浑浊带，，在其外外层有一一透明圈圈。用接接种针接接触菌落落似有奶奶油树胶胶的硬度度。金黄色葡葡萄球菌菌检验———方法法适用性性MPN法法：适用用于检测测带有大大量竞争争菌的食食品及其其原料和和未经处处理的含含少量金金黄色葡葡萄球菌菌的食品品。直接平板计计数法：适适用于检查查金黄色葡葡萄球菌数数不小于10/g（（ml）的的食品。增菌培养法法：适用于于检查含有有受损伤的的金黄色葡葡萄球菌的的加工食品品。定量方法定性方法金黄色葡萄萄球菌检验验——直接平平板计数法法检样（50g+450mL稀稀释液）适当十倍稀稀释样品选择2~3个连续适适宜稀释度度吸取1ml菌液按照照0.3mL、0.3mL、、0.4mL分别涂涂布于3块90mmBaird-Parker平板上上（做平行试试验）35℃，，45~48h确证试验报告或涂布于1块140mm平板板上FDABAM金金黄色葡萄萄球菌检验验——MPN法检样（50g+450mL稀稀释液）适当十倍稀稀释样品选择3个适适宜的连续续稀释度的的样品稀释释液，每个稀释度度接种三管管10%NaClTSB肉肉汤，每管接种1mL35℃，，48±±2h从生长的管管中接种1环划线于于Baird-Parker平板上上35℃，，48h确证试验报告含1%丙酮酮酸钠FDABAM金金黄色葡萄萄球菌确证证试验1.凝固酶酶试验方法：从平板上至至少挑取1个可疑金金黄色葡萄萄球菌菌落落，移种到到TSB/BHI肉肉汤中，置置35℃培培养18-24h。。取肉汤培培养物0.3mL同同0.5mL凝固酶酶试验兔血血浆充分混混合，置35℃培养养，定时观观察是否有有凝块形成成，至少观观察6h。。试验中需同同时做已知知阳性和阴阴性对照。。结果判定：：以内容物完完全凝固，，使试管倒倒置或倾斜斜时不流动动为阳性。。部分凝固固（2+和和3+）的的必须进行行生化鉴定加以证实。。FDABAM金黄黄色葡萄球球菌确证试试验2.革兰氏氏染色对所有的可可疑培养物物都要进行行革兰氏染染色。3.生化鉴鉴定过氧化氢酶酶试验葡萄糖厌氧氧利用试验验甘露醇厌氧氧利用试验验金葡溶菌酶酶敏感性试试验耐热核酸酶酶试验（辅辅助）StaphylococcusaureusonDNaseAgarFDABAM2种葡萄球球菌和微球球菌的典型型特性特性S.aureusS.epidermidisMicrococci过氧化氢酶+++凝固酶+--耐热核酸酶+--溶菌酶++-厌氧利用葡萄糖++-甘露醇+--ISO金金黄色葡萄萄球菌检验验——MPN法检样（xg+9xmL稀释液液）适当十倍稀稀释样品选择3个适适宜的连续续稀释度的的样品稀释释液，每个稀释度度接种三管管modifiedGiolittiandCantonibroth，37℃，，24~48h从变黑或出出现黑色沉沉淀的管中中接种1环培培养物于Baird-Parker平板上37℃，，48h确证试验报告接种10mL于10mL双双料肉汤，，接种1mL于9mL单料料肉汤。小心的于接接种管中培培养基顶部部倾注一定定量的水琼琼脂，使其其凝固形成成密封塞。。ISO金金黄色葡萄萄球菌确证证试验凝固酶试验验结果判定：：-1+2+3+4+negativepositive沙门氏菌属属简介1880年E.Berth首先发现伤伤寒沙门氏氏菌，1885年Salmon与Smith又分离出猪猪霍乱沙门门氏菌，以以后取Salmon氏之名为本本菌属之名名。沙门氏菌属属是一群符符合肠杆菌菌科定义并并与其血清清学相关的的革兰氏阴阴性、需氧氧性、无芽芽孢杆菌。。本菌属种种类繁多，，抗原结构构复杂，现现已发现2000多多个血清型，，我国已发发现血清型型近200个。沙门氏菌属属——生物学特性性形态特征：：革兰氏阴性性，大小为为1~3××0.4~0.9μμm的两端端钝圆的短短杆菌，无无芽孢，一一般无荚膜膜，除鸡沙沙门氏菌和和雏沙门氏氏菌以外，，都有周身身鞭毛，运运动力强。。培养特性：：沙门氏菌需需氧或兼性性厌氧，10-42℃都可可生长，最最适生长温温度为37℃，最适适pH为6.8~7.8。营养琼脂平平板上：35~37℃培养18~24h，其菌菌落大小一一般为2~3mm，，光滑、湿湿润、无色色、半透明明、边缘整整齐。血平板上：：中等大小小的灰白色色菌落。生化特性：：绝大多数沙沙门氏菌有有规律的发发酵葡萄糖糖产酸产气气，但也有有不产气者者，不发酵酵蔗糖和侧侧金盏花醇醇、不产生生吲哚、不不分解尿素素。沙门氏菌属属——生物学特性性沙门氏菌属属的抗原菌体抗原（（O抗原））表面抗原（（K抗原））：Vi抗抗原和M抗抗原鞭毛抗原（（H抗原））纤毛抗原FDABAM沙门门氏菌检验验流程前增菌25g样+225mL乳糖肉肉汤（肉制品、、肉副产品品、动物产产品）匀质2min，室温温放置60±5min混合均匀，，测定调节节PH6.8±0.235℃、24±2h选择性增菌菌0.1ml+10mlMM（（RV）1ml+10mlTTB42℃、24h（水浴培养养）35℃、24h43℃℃、24h（水浴培养养）含菌量高含含菌量低低分离培养划线接种选选择性培培养基（BS、XLD、HE）35℃、24~48h（BS）生化鉴定每个平板挑挑取至少2个可疑菌菌（包括典典型和非典典型各2个个）接种TSI三糖铁、、LIA赖赖氨酸铁高高层斜面（LIA高高层深4cm）（松盖以保保持有氧条条件防止产产生过多H2S）35℃、24±2h弃去尿尿素酶酶试验卫卫矛醇、氰氰化钾钾、丙二酸酸钠、吲哚哚试验阳性阴性血清学血清学试验验——沙门氏氏菌的分类类报告结果生鲜食物、、严重污染染的食品和和动物饲料料ISO6579沙门门氏菌检验验流程前增菌25g样+225mLBPW匀质37±1℃℃、18±±2h选择性增菌菌0.1ml+10mlRVS1ml+10mlMKTTn41.5±±1℃℃、24±±3h37±±1℃℃、24±±3h（水浴培养养）分离培养划线接种选选择性培养养基（XLD和第二二种选择性性培养基，，如BS）37℃、24~48h（BS）每个平板挑挑取至少5个可疑菌菌进行纯培养和确认试验验37℃、24±3h生化鉴定TSI、尿尿素酶、赖赖氨酸脱羧羧酶、β-牛乳糖、、V-P、、吲哚试试验血清学血清学试验验——沙门氏氏菌的分类类报告结果ISO6579沙门门氏菌生化化试验表试验沙门氏菌属伤寒A型副伤寒B型副伤寒C型副伤寒其他菌属反应%b反应%b反应%c反应%c反应%bTSI葡萄糖产酸+100+100+++100TSI葡萄糖产气-d0+100+++92TSI乳糖产酸-2-100---1TSI蔗糖产酸-0-0---1TSI硫化氢产生+97-10+++92尿素水解-0-0---1赖氨酸脱羧酶+98-0+++95β-牛乳糖反应-0-0---2eV-P反应-0-0---0吲哚反应-0-0---1b：百分率表明并不是所有分离到的沙门氏菌血清型都会显示+或-的结果。c：这些百分率不能从现有的文献中获得。d：伤寒沙门氏菌不产气e：亚利桑那亚型肠炎沙门氏菌为乳糖阳性或阴性反应，但通常β-牛乳糖反应阳性。沙门氏菌检检验选择性性分离培养养XLD琼脂脂：FDABAM———典型菌落落：粉色菌菌落，带或或不带黑色色中心。许许多沙门氏氏菌培养物物可呈现大的具光光泽的黑色色中心或几几乎为全部部黑色的菌菌落。——非典型型菌落：黄黄色带或不不带黑色中中心。ISO———中心黑色色、周围由由于指示剂剂颜色的改改变而出现现红色的轻轻微透明带带。菌名菌落形态鼠伤寒沙门氏菌红色，有黑心伤寒沙门氏菌红色，有黑心弗氏志贺氏菌红色大肠埃希氏菌黄色，有胆盐沉淀环粪链球菌-沙门氏菌检检验选择性性分离培养养BS琼脂：：FDABAM———典型菌落落：产硫化化氢菌落黑黑色有金属属光泽、棕棕褐色或灰灰色，菌落落周围的培养基基通常开始始呈褐色，，但伴随培培养时间的的延长而变为黑色，，并有晕环环效应；——非典型型菌落：有有些菌株不不产生硫化化氢，形成成灰绿色菌菌落，周围围培养基不变色。。菌名菌落形态伤寒沙门氏菌黑色，有金属光泽鼠伤寒沙门氏菌黑色，有金属光泽奇异变形杆菌褐色或呈黑色，无金属光泽弗氏志贺氏菌棕色至绿