《特殊杂质的检查》教学课件

四、特殊杂质的检查

〔一〕对乙酰氨基酚中的特殊杂质检查。〔二〕盐酸普鲁卡因注射液中对氨基苯甲酸的检查。四、特殊杂质的检查

〔一〕对乙酰氨基酚中的特殊杂质检查。1〔一〕对乙酰氨基酚中的特殊杂质检查对乙酰氨基酚的合成：以对硝基氯苯为原料，水解后制得对硝基酚，经复原生成对氨基酚，再经乙酰化后制得。以酚为原料，经亚硝化及复原反响制得。〔一〕对乙酰氨基酚中的特殊杂质检查对乙酰氨基酚的合成：2乙醇溶液的澄清度与颜色对以下氨基酚的生产工艺中使用铁粉作为还原剂，致使乙醇溶液产生浑浊。中间体对氨基酚的有色氧化产物，在乙醇中显橙红色或棕色。检查方法〔目视比色法P40〕取本品1.0g，加乙醇10ml溶解后，溶液应澄清，无色；如遇1号浊度标准液比较，不得更浓；如显色，与棕红色2号或橙红色2号标准比色液比较，不得更深。

《特殊杂质的检查》教学课件3目视比色法所用比色液系：由比色用重铬酸钾液、比色用氯化钴液和比色用硫酸铜液按一定比配成五种不同色调的贮备液，再加不同量的水制成10个色号〔详见P40〕有关物质这些有机杂质主要包括中间体，副产物及分解产物。例如：对氨基酚，对氯乙酰苯胺，O-乙酰基对乙酰氨基酚，偶氮苯，氧化偶氮苯，苯醌和醌亚胺等。药典对本品“有关物质〞项下检查，以对氯苯乙酰胺为对照品。

目视比色法所用比色液系：4

检查方法取本品的细粉，乙醚溶解后至澄清，取上清液作为供试品溶液；另取含对氯苯乙酰胺的乙醇溶液适量，用乙醚稀释成每1ml中含50μg的溶液作为对照溶液。在同一硅胶GF254薄层板上点样，展开后，置紫外灯〔254nm〕下检视，供试品溶液如显杂质斑点，与对照溶液的主斑点比较，不得更大，更深。

5对氨基酚本品在合成过程中，由于乙酰化不完全或贮藏不当发生水解，均可引入对氨基酚。其毒性较大并使本品产生色泽。利用对氨基酚在碱性条件下可与亚硝基铁氰化钠生成蓝色配位化合物，而对乙酰氨基酚无此反响的特点，与对照品比较，进展限量检查。Na2[Fe(NO)(CN)5]+H2ONa2[Fe(CN)5H2O]+NONa2[Fe(CN)5H2O]+H2NOHNa2Fe(CN)5H2NOH+H2O蓝色对氨基酚本品在合成过程中，由于乙酰化不完全或贮藏不当6

检查方法本品1.0g，加甲醇溶液〔12〕20ml溶解后，加碱性亚硝基铁氰化钠试液1ml，摇匀放置30min；如显色，与对乙酰氨基酚对照品1.0g加对氨基酚50μg用同一方法制成的对照品比较，不得更深〔0.005%〕对氨基酚对照溶液不稳定，应临用前新鲜配制。

7〔二〕盐酸普鲁卡因注射液中对氨基苯甲酸的检查。

普鲁卡因分子构造中有酯键，易发生水解反响。其注射液制备过程中受灭菌温度、时间、溶液PH值、贮藏时间以及光线和金属离子等因素影响，可发生水解反响生成对氨基苯甲酸和2-二乙氨基醇。其中对氨基苯甲酸随贮藏时间的延长或高温加热，可进一步脱羧转化为苯胺，而苯胺又可被氧化为有色物，使注射液变黄。已变黄注射液不仅疗效下降，而且毒性增加。故药典中规定检查水剂产物对氨基苯甲酸，其限度不得超过1.2%。〔二〕盐酸普鲁卡因注射液中对氨基苯甲酸的检查。

8CO2[O]H2NCOOHH2NOO检查方法精细量取本品加乙醇稀释使成每1ml中含盐酸普鲁卡因2.5mg的溶液,作为供试品溶液;另取对氨基苯甲酸对照品,加乙醇制成每1ml中含30μg的溶液,作为对照品溶液去上述两种溶液各10μl,在硅胶H薄层板上点样,用展开剂展开后用对二甲氨基苯甲醛(2%对二甲氨基苯甲醛乙醇溶液100ml,加冰醋酸5ml制成)喷雾显色.供试品溶液如显与对照品溶液相应的杂质斑点,其颜色与对照品溶液的主斑点比较,不得更深.

9

采用硅胶H-CMC薄层色谱法检查时,对氨基苯甲酸的最低检出量为0.01μg.检查久贮变色的产品发现除主斑点盐酸普鲁卡因和分解产物对氨基苯甲酸外,还有一个杂质斑点,经和构造物质对照,确证为苯胺,最低检出量为0.01μg

10五.含量测定亚硝酸钠滴定法原理:芳伯氨基药物在酸性溶液中与亚硝酸钠定量反响,生成重氮盐,用永停法指示反响终点H+Ar-NHCOR+H2OAr-NH2+RCOOHAr-NH2+NaNO2+2HClAr-N2+Cl-+NaCl+2H2O

五.含量测定亚硝酸钠滴定法11测定的主要条件重氮化反响的速度受多种因素的影响,亚硝酸钠滴定液及反响生成的重氮盐也不够稳定,。(1)加适量溴化钾加快反响速度:在盐酸存在下,重氮化反响历程为:NaNO2+HClHNO2+NaClHNO2+HClNOCl+H2ONO+Cl-Ar-NH2Ar-NH-NOAr-N=N-OHAr-N2+Cl-慢快快测定的主要条件12注意：第一步反响的快慢与含芳伯氨基化合物中芳伯氨基的游离程度有密切关系：芳伯氨基的碱性较弱在一定强度酸性溶液中成盐比例较小游离的芳伯氨基多重氮化反应速度就快；反之亦反。KBr使重氮化反响加速的原理HCl+KBrKCl+HBrHNO2+HBrNOBr+H2O〔1〕假设供试液中仅含HCl,那么：HNO2+HClNOCl+H2O〔2〕〔1〕式的平衡常数比〔2〕式约大300倍，生成NOBr量大的多从而加速了重氮化反响的进展。

注意：13〔2〕加过量盐酸加速反响因胺类药物的盐酸盐较其硫酸盐的溶解度大，反响速度也较快，所以多采用盐酸。故量盐酸有利于：1.重氮化反响速度加快；2.重氮盐在酸性溶液中稳定；3.防止生成偶氮氨基化合物，而影响测定结果。Ar-N2+Cl-+H2N-ArAr-N=N-NH-Ar+HCl假设酸度过大:可阻碍芳伯氨基的游离，影响重氮化反响速度;还可使亚硝酸分解。所以参加盐酸量一般按芳胺类药物与酸的摩尔比约为1：2.5~6。〔2〕加过量盐酸加速反响14〔3〕温度〔10-30℃〕条件下滴定：通常温度高重氮化反响速度快；但温度太高，可使亚硝酸逸失，并可使重氮盐分解：Ar-N+Cl-+H2OAr-OH+N2+HCl一般温度每升高10℃，重氮化反响速度加快2.5倍，但重氮盐的分解速度相应加速2倍；所以滴定一般在低温下进展。由于低温时反响太慢，经试验可在室温下进展。 〔3〕温度〔10-30℃〕条件下滴定：通常温度高重氮化反响速15〔4〕滴定管尖端插入液面下滴定：重氮化反响是分子反响，反响速度较慢，故滴定不宜过快。为了防止滴定过程中亚硝酸的挥发和分解滴定时将滴定管尖端插入液面下约2/3处，一次将大局部亚硝酸钠滴定液在搅拌条件下参加，使其尽快反响。然后将滴定管尖端提出液面，用少量水淋洗尖端，再缓缓滴定。尤其在近终点时，因尚未反响的芳伯氨基药物浓度极稀，须在最后一滴参加后，搅拌1min~5min，再确定重点是否真正到达。〔4〕滴定管尖端插入液面下滴定：16终点指示方法：有电位法，永停滴定法，外指示剂法和内指示剂法等。〔1〕永停滴定法：中国药典规定用永停法指示亚硝酸钠滴定法。装置如P150图7-3

1.Ve2.Ve3.Ve在永停滴定法中，根据滴定剂和被侧物电位是否可逆可分为几种情况〔横轴为V，纵轴为I〕终点指示方法：有电位法，永停滴定法，外指示剂法和内指示剂法等17永停滴定法:(又称双电流法或双安培滴定法)原理：见课本P149电极：两个铂电极优点：装置简单，准确和简便意义：是药典上进展重氮化滴定和用KarlFischer法进展水分测定的法定方法。

BACK《特殊杂质的检查》教学课件181.滴定剂属可逆电对，如I2/I〔I2+2e2I־〕;被测物属不可逆电对，如用含I2的KI溶液滴定Na2S2O3溶液：只能发生：2S2O32-S4O62-+2e不能发生：S4O62-+2e2S2O32-2.滴定剂属不可逆电对，被测物属可逆电对。〔用Na2S2O3滴定含I2的KI溶液〕3.滴定剂和被测物属可逆电对，如用Ce4+滴定Fe2+。〔Ce4+/Ce2+与Fe2+/Fe3+均属可逆电对〕1.滴定剂属可逆电对，如I2/I〔I2+2e2I־〕19本实验中滴定剂与酸反响后是可逆滴定剂〔NaNO2与酸反响后生成NO2-,NO2-/NO3-是可逆电对〕，而被测物中芳伯氨基药物和其他离子为不可逆电对。本实验中滴定剂与酸反响后是可逆滴定20〔2〕外指示剂法：常用碘化钾-淀粉糊剂或指示液，滴定到达终点时，稍过量的亚硝酸钠在酸性溶液中氧化碘化钾，析出碘遇淀粉即显蓝色。2NaNO3+2KI+4HCl2NO+I2+2KCl+2NaCl+2H2O以碘化钾-淀粉作外指示剂的方法，适用于多种药物及其制剂的亚硝酸钠滴定法。应用外指示剂法时，应注意其灵敏度与反响的体积有关。为防止偏差，可是测定时溶液体积与标化时亚硝酸钠滴定液的体积一致或测定与标化均进展空白校正。

〔2〕外指示剂法：常用碘化钾-淀粉糊剂或指示液，滴定到达终点21谢谢！谢谢！22四、特殊杂质的检查

〔一〕对乙酰氨基酚中的特殊杂质检查。〔二〕盐酸普鲁卡因注射液中对氨基苯甲酸的检查。四、特殊杂质的检查

〔一〕对乙酰氨基酚中的特殊杂质检查。23〔一〕对乙酰氨基酚中的特殊杂质检查对乙酰氨基酚的合成：以对硝基氯苯为原料，水解后制得对硝基酚，经复原生成对氨基酚，再经乙酰化后制得。以酚为原料，经亚硝化及复原反响制得。〔一〕对乙酰氨基酚中的特殊杂质检查对乙酰氨基酚的合成：24乙醇溶液的澄清度与颜色对以下氨基酚的生产工艺中使用铁粉作为还原剂，致使乙醇溶液产生浑浊。中间体对氨基酚的有色氧化产物，在乙醇中显橙红色或棕色。检查方法〔目视比色法P40〕取本品1.0g，加乙醇10ml溶解后，溶液应澄清，无色；如遇1号浊度标准液比较，不得更浓；如显色，与棕红色2号或橙红色2号标准比色液比较，不得更深。

《特殊杂质的检查》教学课件25目视比色法所用比色液系：由比色用重铬酸钾液、比色用氯化钴液和比色用硫酸铜液按一定比配成五种不同色调的贮备液，再加不同量的水制成10个色号〔详见P40〕有关物质这些有机杂质主要包括中间体，副产物及分解产物。例如：对氨基酚，对氯乙酰苯胺，O-乙酰基对乙酰氨基酚，偶氮苯，氧化偶氮苯，苯醌和醌亚胺等。药典对本品“有关物质〞项下检查，以对氯苯乙酰胺为对照品。

目视比色法所用比色液系：26

检查方法取本品的细粉，乙醚溶解后至澄清，取上清液作为供试品溶液；另取含对氯苯乙酰胺的乙醇溶液适量，用乙醚稀释成每1ml中含50μg的溶液作为对照溶液。在同一硅胶GF254薄层板上点样，展开后，置紫外灯〔254nm〕下检视，供试品溶液如显杂质斑点，与对照溶液的主斑点比较，不得更大，更深。

27对氨基酚本品在合成过程中，由于乙酰化不完全或贮藏不当发生水解，均可引入对氨基酚。其毒性较大并使本品产生色泽。利用对氨基酚在碱性条件下可与亚硝基铁氰化钠生成蓝色配位化合物，而对乙酰氨基酚无此反响的特点，与对照品比较，进展限量检查。Na2[Fe(NO)(CN)5]+H2ONa2[Fe(CN)5H2O]+NONa2[Fe(CN)5H2O]+H2NOHNa2Fe(CN)5H2NOH+H2O蓝色对氨基酚本品在合成过程中，由于乙酰化不完全或贮藏不当28

检查方法本品1.0g，加甲醇溶液〔12〕20ml溶解后，加碱性亚硝基铁氰化钠试液1ml，摇匀放置30min；如显色，与对乙酰氨基酚对照品1.0g加对氨基酚50μg用同一方法制成的对照品比较，不得更深〔0.005%〕对氨基酚对照溶液不稳定，应临用前新鲜配制。

29〔二〕盐酸普鲁卡因注射液中对氨基苯甲酸的检查。

普鲁卡因分子构造中有酯键，易发生水解反响。其注射液制备过程中受灭菌温度、时间、溶液PH值、贮藏时间以及光线和金属离子等因素影响，可发生水解反响生成对氨基苯甲酸和2-二乙氨基醇。其中对氨基苯甲酸随贮藏时间的延长或高温加热，可进一步脱羧转化为苯胺，而苯胺又可被氧化为有色物，使注射液变黄。已变黄注射液不仅疗效下降，而且毒性增加。故药典中规定检查水剂产物对氨基苯甲酸，其限度不得超过1.2%。〔二〕盐酸普鲁卡因注射液中对氨基苯甲酸的检查。

30CO2[O]H2NCOOHH2NOO检查方法精细量取本品加乙醇稀释使成每1ml中含盐酸普鲁卡因2.5mg的溶液,作为供试品溶液;另取对氨基苯甲酸对照品,加乙醇制成每1ml中含30μg的溶液,作为对照品溶液去上述两种溶液各10μl,在硅胶H薄层板上点样,用展开剂展开后用对二甲氨基苯甲醛(2%对二甲氨基苯甲醛乙醇溶液100ml,加冰醋酸5ml制成)喷雾显色.供试品溶液如显与对照品溶液相应的杂质斑点,其颜色与对照品溶液的主斑点比较,不得更深.

31

采用硅胶H-CMC薄层色谱法检查时,对氨基苯甲酸的最低检出量为0.01μg.检查久贮变色的产品发现除主斑点盐酸普鲁卡因和分解产物对氨基苯甲酸外,还有一个杂质斑点,经和构造物质对照,确证为苯胺,最低检出量为0.01μg

32五.含量测定亚硝酸钠滴定法原理:芳伯氨基药物在酸性溶液中与亚硝酸钠定量反响,生成重氮盐,用永停法指示反响终点H+Ar-NHCOR+H2OAr-NH2+RCOOHAr-NH2+NaNO2+2HClAr-N2+Cl-+NaCl+2H2O

五.含量测定亚硝酸钠滴定法33测定的主要条件重氮化反响的速度受多种因素的影响,亚硝酸钠滴定液及反响生成的重氮盐也不够稳定,。(1)加适量溴化钾加快反响速度:在盐酸存在下,重氮化反响历程为:NaNO2+HClHNO2+NaClHNO2+HClNOCl+H2ONO+Cl-Ar-NH2Ar-NH-NOAr-N=N-OHAr-N2+Cl-慢快快测定的主要条件34注意：第一步反响的快慢与含芳伯氨基化合物中芳伯氨基的游离程度有密切关系：芳伯氨基的碱性较弱在一定强度酸性溶液中成盐比例较小游离的芳伯氨基多重氮化反应速度就快；反之亦反。KBr使重氮化反响加速的原理HCl+KBrKCl+HBrHNO2+HBrNOBr+H2O〔1〕假设供试液中仅含HCl,那么：HNO2+HClNOCl+H2O〔2〕〔1〕式的平衡常数比〔2〕式约大300倍，生成NOBr量大的多从而加速了重氮化反响的进展。

注意：35〔2〕加过量盐酸加速反响因胺类药物的盐酸盐较其硫酸盐的溶解度大，反响速度也较快，所以多采用盐酸。故量盐酸有利于：1.重氮化反响速度加快；2.重氮盐在酸性溶液中稳定；3.防止生成偶氮氨基化合物，而影响测定结果。Ar-N2+Cl-+H2N-ArAr-N=N-NH-Ar+HCl假设酸度过大:可阻碍芳伯氨基的游离，影响重氮化反响速度;还可使亚硝酸分解。所以参加盐酸量一般按芳胺类药物与酸的摩尔比约为1：2.5~6。〔2〕加过量盐酸加速反响36〔3〕温度〔10-30℃〕条件下滴定：通常温度高重氮化反响速度快；但温度太高，可使亚硝酸逸失，并可使重氮盐分解：Ar-N+Cl-+H2OAr-OH+N2+HCl一般温度每升高10℃，重氮化反响速度加快2.5倍，但重氮盐的分解速度相应加速2倍；所以滴定一般在低温下进展。由于低温时反响太慢，经试验可在室温下进展。 〔3〕温度〔10-30℃〕条件下滴定：通常温度高重氮化反响速37〔4〕滴定管尖端插入液面下滴定：重氮化反响是分子反响，反响速度较慢，故滴定不宜过快。为了防止滴定过程中亚硝酸的挥发和分解滴定时将滴定管尖端插入液面下约2/3处，一次将大局部亚硝酸钠滴定液在搅拌条件下参加，使其尽快反响。然后将滴定管尖端提出液面，用少量水淋洗尖端，再缓缓滴定。尤其在近终点时，因尚未反响的芳伯氨基药物浓度极稀，须在最后一滴参加后，搅拌1min~5min，再确定重点是否真正到达。〔4〕滴定管尖端插入液面下滴定：38终点指示方法：有电位法，永停滴定法，外指示剂法和内指示剂法等。〔1〕永停滴定法：中国药典规定用永停法指示亚硝酸钠滴定法。装置如P150图7-3

1.Ve2.Ve