医学标书范文

色素上皮衍生因子（PEDF）在膀胱癌中的表达及其对膀胱癌治疗作用的研究一、趋势判断和需求分析（含知识产权状况和技术标准状况设和社会发展需求；科学技术价值、特色和创新点。8位，在男性其标准万；在女性，其标准发病率为25位。死亡率在男性为万，占全身肿916占全身恶性肿瘤的3.219957/108.6/10万人目前膀胱癌的治疗仍以手术切除为主，辅以膀胱灌注化疗和免疫治疗、全身化疗、放疗和生物治疗等措施,但这些治疗方法效果都不满意，主要是治疗后易复发，复发率高达80%，其中大约16%-25%复发的肿瘤其恶性程度增加，有10%发展为浸润性或转移性癌，因此,寻找一种新的、更有效的生物治疗方法，是当前临床迫切需要解决的问题。阻断肿瘤细胞分裂或诱导细胞调亡的方式来抑制肿瘤生长。做为一种实体性肿瘤生长，肿瘤细胞的增殖固然重要，而新生血管的形成在肿瘤的生长和复发、转移过程中也发挥非常重要作用。在正常状态下，人体内的脉管系统在血管生长因子和抑制因子网络式的相互作用下处于平衡状态；病理状态下，尤其是2mm时就会有新生血管形成，如果没有新生血管生成，肿瘤生长明显受到抑制，甚至停止[近来研究发现，色素上皮衍生因子pigmentepitheliumderivedfacto,PD种对肿瘤有抑制作用的细胞因子。这种细胞因子是Tombran-Tink等在实验中发现的，由人视网膜色素上皮细胞分泌的一50KD[5serpi/PAT-16k17p13.1-pter[6]多项研究表明，PEDF是一种天然的高效的新生血管抑制剂[7]，并通过诱导肿瘤细胞分化起到抑制肿瘤生长的作用。Tombran-Tink等将PEDF基因定位于染色体17p13.1肿,瘤发生与该区域关系密切，提示该基因可能是抑癌基因或肿瘤相关基因[5]。对肿瘤细胞进行编码PEDF的腺病毒转染，在血管内皮生长因子（Vascularendothelial

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）存在的情况下，PEDF明显阻止了血管内皮细胞管CNV/AMDPEDF,CrawfordPEDF在神经母细胞瘤中是肿瘤细胞分化调控的主要的抗血管生成的抑制剂[7]作为VEGFPEDF对肿瘤的抑制作用。其机制乃因PEDF我们最近对PEDF在膀胱癌中表达情况的初步研究发现，PEDF在膀胱癌组织中表达明显低于正常膀胱组织，而且PEDF表达情况与膀胱癌的恶性程度以及癌组织中微血管密度呈负相关，提示PEDF在膀胱癌的发生、发展中具有一定的作用，PEDF的正常表达可能抑制膀胱癌细胞的生长、增殖，PEDF有可能成为膀胱癌生物学治疗的一种有效的新方法。目前国内、外尚未见此项研究的相关报道。因此我们PEDF的表达水平，进一步研究PEDFPEDF表达与膀胱癌分期、分级、转移及预后的关系；通过研究膀胱癌组织中PEDF与VEGF表达的相关性，与血小板反应素-1PEDF表达与肿瘤血管形成的相关性及可能的作用机制；通过研究PEDF表达与金属蛋）PEDFPEDF表达与已知的对肿瘤生长有明确调节作用的肿瘤坏死因子α（TNF-α、白细胞介素1α（IL-α、血栓调节蛋白（thrombomodulin）和白介素8（IL-8）等细胞因子表达的相关性，探讨PEDF表达对膀癌细胞调节的可能机制，从而探讨PEDF在膀胱癌发生、发展过程中的可能作用机制；在此基础上，以连接有PEDF编码基因的腺病毒载体转染膀胱癌细胞株、以PEDF蛋白治疗裸鼠膀胱癌模型，进一步探讨PEDF表达对膀胱癌细胞生长的抑制作用以及对膀胱癌的治疗效果,为膀胱癌的生物学治疗探索一种有效的新方法。参考文献[2]二、研究内容和技术关键研究的总体目标：PEDF表达与膀胱癌的发生、分期、分级、转移及预后的关系，探讨PEDF发生、发展及转移过程中可能的作用机制。研究PEDF研究的创新点：PEDF表达与膀胱癌的发生、分期、分级、转移及预后的关系入手，探讨PEDF表达在膀胱癌发生、发展和转移中可能的作用机制。PEDFPEDF蛋白治疗裸鼠膀胱癌模型，探讨PEDF研究的主要内容：膀胱癌组织和非癌膀胱组织中PEDF和相关细胞因子表达的检测及相关性研究：应用分子生物学技术研究膀胱癌组织和非癌膀胱组织中PEDF表达状况，并检测VEGF、TSP-1MMP-9、TNF-α、、血栓调节蛋白和IL-8测膀胱癌组织和非癌膀胱组织中的微血管密（microvasculardenD分析PEDF与VEGFTSP-1MMP-9、TNF-α、IL-8与MVD的相关性；并结合临床资料分析研究PEDF5PEDF分级、转移及预后的关系，探讨PEDF表达在膀胱癌发生、发展中的可能机制。PEDF对膀胱癌细胞株的治疗：以连接有PEDF观察检测VEGF、TNF-α的表达情况及膀胱癌细胞的凋亡、增殖情况。PEDF对裸鼠膀胱癌模型的治疗：PEDF蛋白（购自吉泰生物科技有限公司PEDFMVD、VEGF及肿瘤增殖情况，探讨PEDF表达在膀胱癌发生、发展中的作用机制，评估PEDF对膀胱癌的治疗效果，为进一步过度到临床应用提供依据。需要解决的技术关键：连接有PEDF编码基因的腺病毒载体转染膀胱癌细胞株的转染成功率。PEDFPEDF定量分析的基础，已形成较成熟技术条件、设备和研究经验。膀胱癌裸鼠模型的构建。我们已有成功构建裸鼠膀胱癌和前列腺癌模型的经验。研究方法：方法（1）膀胱癌组织和非癌膀胱组织中PEDF和相关细胞因子表达的检测及相关性研究：实验组

对照组膀胱癌组织标本 B期A期 C期 D期例数 30 30 30 30

织120

非癌膀胱组织织120

织120①．应用SYBRGreenIPCR）进行定量测定。②．Westernblot法检测VEGF、TSP-1、MMP-9。③．ELISA法检测TNF-α、IL-1α、血栓调节蛋白、IL-8浓度。④．免疫组化方法检测标本MVD。⑤．整理临床资料：膀胱癌患者性别、年龄、组织病理、分期、分级、是否转移、5年生存率。⑥．数据统计分析(使用SPSSPEDFVEGFPEDFTSP-1PEDFMMP-9PEDFTNF-α、IL-8PEDFMVDPEDF与膀胱癌分期的相关性。PEDF与膀胱癌恶性程度（分级）PEDFPEDF与膀胱癌5年生存率的相关性。方法（2）PEDF对膀胱癌细胞株的治疗：以连接有PEDF编码基因的腺病毒载体转染膀胱癌细胞,以空载转染膀胱癌细胞作为对照，检测VEGF、TNF-α浓度，观察细胞的增殖、凋亡情况，分析相关性。①．以RT-PCR法扩增PEDF基因。②．将扩增后的PEDF基因连接入腺病毒载体，转染膀胱癌细胞。并以空载转染为对照。③．Westernt检测VEGF、TSP-1、MMP-9④．观察膀胱癌细胞增殖、侵袭、凋亡情况。⑤．统计分析。方法（3）PEDF对裸鼠膀胱癌模型的治疗：以人膀胱癌细胞种植于裸鼠皮下，建立裸鼠膀胱癌模型。以PEDF蛋白直接注射于裸鼠皮下肿瘤内作为治疗组，以未注射PEDF为阴性对照组。观察两组膀胱癌组织MVD、VEGF表达情况、肿瘤增殖情况，评价PEDF对膀胱癌的治疗效果。①．以人膀胱癌细胞种植于裸鼠皮下构建膀胱癌裸鼠模型。②．将PEDF蛋白注射于裸鼠瘤体内。③．应用免疫组化方法检测MVDWesternblotVEGFTSP-1、MMP-9亡情况。分析PEDFVEGF技术路线：膀胱癌组织和非癌膀胱组织中PEDF膀胱癌标本癌旁膀胱组织标正常膀胱组织标炎性膀胱组织标RT-PCR 检测PEDF膀胱癌标本癌旁膀胱组织标正常膀胱组织标炎性膀胱组织标RT-PCR 检测PEDFmRNA表达Westernblot法检测VEGF、ELISA法检测TNF-α、血栓调免疫组化方法检测标本微血管密度结合临床资料，数据统计分析结合临床资料，数据统计分析PEDF将PEDF转染膀胱癌细胞株，检测VEGF、TSP-1、MMP-9、TNF-α浓度，观察肿瘤细胞的增殖、凋亡RTPCR法扩增PEDF基因RTPCR法扩增PEDF基因空载体连接入腺病毒载体转染膀胱癌细胞株Westernblot法检ELISA观察细胞凋VEGF空载体连接入腺病毒载体转染膀胱癌细胞株Westernblot法检ELISA观察细胞凋VEGFTSP-1、TNF-α亡、增殖情结果分析情况。结果分析PEDFPEDFVEGFMVD构建膀胱癌裸鼠模型注射PEDF蛋白未注射（对照）观察微血管密度VEGF、TSP-1、MMP-9肿瘤凋亡、增构建膀胱癌裸鼠模型注射PEDF蛋白未注射（对照）观察微血管密度VEGF、TSP-1、MMP-9肿瘤凋亡、增殖、侵袭情况结果分析结果分析先后开展了膀胱癌、前列腺癌等的一系列基础研究（包括分子生物学研究）和临床研究，如：裸CD44基因、端粒酶、P53RasVEGF表达与膀胱RT-PCR、DNA测序、拥有独立的泌尿外科免疫、病理、分子生物学和细胞学实验室，实验室设备完善，技术方法先进，拥有PCR-累了较丰富的研究经验。最近我们开展了对膀胱癌、前列腺癌组织中PDEF表达的初步研究，掌握了对肿瘤组织包括膀胱癌组织中PDEF表达的检测方法，对本课题的顺利进行提供了便利条件。例如：已完成对膀胱肿瘤与正常膀胱组织PEDF表达情况的对照性研究，初步结果显示如下:PCR产物琼脂糖凝胶电泳结果可见：表达明显降低（见图1。注：N1，N2，N3T1，T2，T3：内参照M：为标记分子量1：正常膀胱组织与膀胱癌组织PEDF定量PCR(2PEDF低表达与微血管增殖相关（见图2预期成果：明确测定出PEDF在膀胱癌中的表达情况以及其与相关细胞因子表达之间的关系。PEDF在膀胱癌发生、发展过程中起重要作用。PEDF对膀胱癌的治疗有效，为最终过渡到临床应用提供强有力的实验依据。成果以论文的形式表达，并申请“PEDF治疗裸鼠膀胱癌模型技术”的专利；拟发表论著5－7篇，其中国内权威杂志4－5篇，SCI收录杂志2篇。申请成果鉴定。PEDF子生物学实验室和细胞学实验室提供新的研究条件和技术，并为以后此类研究的开展奠定扎实基础。本课题研究过程中，拟培养硕士研究生2名，博士研究生2名，技术员一名。六、预期效果和风险分析课题成果对社会发展所起的作用；经济效益和产业化前景（预计年产值、年利润、年节汇、年创汇、年节能等可能的技术风险；可能的市场风险。PEDFPEDF表达对膀癌细胞调节的可能机制，从而探讨PEDFPEDFPEDF蛋白治疗裸鼠膀胱癌模型，进一步探讨PEDF表