微生物标本采集与处理 课件

微生物学检验

标本采集与处理微生物学检验

标本采集与处理血液培养标本采集和运送1、血液采集时间：

⑴发热（≥38℃）或低温（≤36℃）寒战。⑵WBC增多。⑶皮肤粘膜出血。⑷血压降低。⑸昏迷。⑹特殊患者出现粒细胞减少,血小板减少等。应在以上一种或几种体征出现，而临床可疑菌血症时采集血培养，并且尽量在使用抗生素之前进行。为提高阳性率，在24小时内采集2~3份血培养。血液培养标本采集和运送2、采血部位及抽血量：一般抽取肘静脉血，成人采血量是5~10ml，儿童为3~5ml（尽量多抽提高阳性率），原则为血液与肉汤之比为1:5~1:10。3、采集血标本和接种时要严格无菌操作，避免杂菌污染。如果双相培养基则从冰箱取出，应将其平衡到室温，方才采集血标本接种。2、采血部位及抽血量：4、无菌操作采血后应立即送检,如不能立即送检,需室温保存或置35℃~37℃培养箱中,切勿冷藏！4、无菌操作采血后应立即送检,如不能立即送检,需室温保存或置实验室处理标本验收、登记：1、如发现血培养瓶标识与化验单申请单不符，如瓶破裂或明显污染。应立即与临床医师联系，报告拒收的具体理由.2、如发现标本采集放置12小时以上,用不适当类型的培养瓶收集标本、用过期的培养瓶收集标本、采血量不足等。应立即与临床医师联系，报告标本不合格的具体理由，建议补做血培养。3、对延迟送检的血培养瓶注意肉眼观察瓶内是否有絮状物、混浊、溶血、凝块、薄膜等。如发现应立即直接涂片镜检和划线转种。4、如验收合格，给标本和申请单进行标识编号，并在血培养专用澄记本上澄记病人的姓名、性别、年龄、科室、住院号、标本编号，然后置于35℃～37℃培养箱中培养。实验室处理标本验收、登记：下呼吸道感染标本培养标本采集1、自然咳痰法:以晨痰为佳,采集前应用清水清洁口腔牙齿,用力咳出呼吸道深部的痰,直接吐入痰培养无菌杯中,标本量应≥1ml.咳痰困难患者可雾化吸入取痰,采集完标本后应尽快送检,不能及时送检的标本,室温保存≤2h.2、支气管镜采集法:由临床医师按相应操作规程采集,应注意咽喉部正常菌群污染.3、小儿取痰法：用弯压舌板向后压舌，将拭子伸入咽部，小儿经压舌刺激咳嗽时，可喷出肺部或气管分泌物粘在拭子上送检。幼儿还可用手指轻叩胸骨柄上方，以诱发咳痰。下呼吸道感染标本培养标本采集痰标本验收1、呼吸道定植有大量的正常菌群,咽试子、痰厌氧培养无临床意义。2、肉眼观察痰标本呈水样或唾液样，或者标本涂片细胞学检查，WBC<10/低倍镜和鳞状上皮细胞>25/低倍镜，提示该标本已污染正常菌群，建议重送标本。

3、标本容器溢漏、无盖或送检时间超过2h拒收。

4、同时同部位或同一天两份相同检测的标本，应及时与申请医师协商处理。

5、遇有不合格标本,应及时与临床联系,报告不合格标本拒收的具体理由。痰标本验收1、呼吸道定植有大量的正常菌群,咽试子、痰厌氧培养痰标本培养显微镜检查：涂片革兰氏染色镜检（或直接涂片低倍镜镜检）并记录。1.如WBC>25/低倍镜和鳞状上皮细胞<10/低倍镜,提示该标本合格可用于细菌培养;2.WBC>25/低倍镜和鳞状上皮细胞10—25/低倍镜,提示该标本尚合格可用于细菌培养;3.WBC<10/低倍镜和鳞状上皮细胞>25/低倍镜,提示该标本不合格,重送标本.

细菌涂片染色检查:挑取标本脓性或带血部份涂片革兰氏染色镜检,报告所见细菌的量和吞噬细胞内是否有细菌等.痰标本培养显微镜检查：涂片革兰氏染色镜检（或直接涂片低倍镜镜痰标本培养分离培养挑取脓痰分别接种于羊血琼脂平板、麦康凯平板、巧克力琼脂平板上,置于35℃培养箱培养24-48小时。巧克力平板放入5%~10%CO2环境中培养24-48小时。痰标本培养分离培养初级报告即标本涂片染色细胞学和细菌学显微镜镜检的描述报告，如发现有诊断价值时及时口头报告，但应按要求详细记录。1.细胞学镜检的描述报告：包括WBC数/低倍镜和细胞内是否含有细菌且胞内细菌的染色形态特性。2.细菌学镜检的描述报告：如见到排列成葡萄状的革兰氏阳性球菌，可报告“找到革兰氏阳性球菌，形似葡萄球菌”；如找到不识别的细菌时则报告“找到革兰×性×形细菌”。初级报告即标本涂片染色细胞学和细菌学显微镜镜检的描述报告，如尿液细菌培养尿培养检查的临床指征:1有典型的尿路感染症状;2肉眼脓尿或血尿3尿常规白细胞和/或亚硝酸盐阳性4不明原因的发热,无其他局部症状5泌尿系统疾病手术前和膀胱排空功能受损等.6留置导尿管的病人出现发热。尿液细菌培养尿培养检查的临床指征:尿标本的采集1.清洁中段尿:晚睡前少饮水,女性病人用手分开大阴唇,男性病人翻上包皮,用肥皂将阴部清洗干净后,用清水冲洗尿道口周围。将前段尿排去，将中段尿约10ml直接排入专用的无菌管中。2.耻骨上膀胱穿刺法：严格按无菌操作，用注射器直接从耻骨上皮穿入膀胱，吸取尿液置于专用的无菌管中。3.直接导尿法：按常规方法局部消毒后，用导尿管直接经尿道插入膀胱，获取膀胱尿。4.留置导尿：先消毒导尿管外部，按无菌操作用注射器通过导尿管吸取尿液置于专用的无菌管中。6.其他方法：收集特定部位的尿标本可以通过侵入的方式如膀胱镜或手术中进行采集。尿标本的采集1.清洁中段尿:晚睡前少饮水,女性病人用手分开尿标本的运送标本采集后应及时送检，2h内进行接种,否则应置4—8℃冰箱保存，冷藏保存标本时间不得超过8h。禁止尿中加入防腐剂和消毒剂。尽量在未使用抗生素前采集标本培养。尿标本的运送标本采集后应及时送检，2h内进行接种,否则应置4尿标本验收检查申请单所提供的信息（姓名、床号）和标本标鉴上的信息是否相同，所用的容器（10ml无菌管）是否合格等。对不合格的标本应注明原因，拒收，并做记录。尿标本验收检查申请单所提供的信息（姓名、床号）和标本标鉴上的尿分离培养一般培养：将标本轻轻旋转混匀，用定量接种环或无菌微量加样器取尿液0.001ml接种于血平板和麦康凯平板，35℃～37℃培养18—24h。特殊培养：对怀疑有苛氧菌感染者应采用耻骨上膀胱穿刺法或导尿法采集标本，接种时加一块巧克力平板，并置5%CO2环境中培养24-48小时。经18～24h培养无菌生长者，应将所有培养基继续培养24小时。建议：为提高检出率，要求10ml尿液置于无菌管内离心3000r/h，5~10分钟。取尿沉渣接种尿分离培养一般培养：将标本轻轻旋转混匀，用定量接种环或无菌微脓汁与创伤感染分泌物培养标本采集开放性感染分必物或脓液先用无菌生理盐水冲洗表面，用2支无菌棉拭子取创伤或溃疡深处的脓液及分泌物送检，一支涂片检查用，一支为培养用，将棉拭子放入无菌管内或增菌培养基内送检。闭性脓肿常局部消毒后，用注射器抽取脓液置于无菌试管内送检。如果怀疑厌氧菌感染时，当即作床边接种或置于厌氧运送培养基内送检。脓汁与创伤感染分泌物培养标本采集细菌对干燥敏感或只能采集少量标本时，用棉拭子采集标本后立即放入增菌培养基内。对于不能立即送检的标本，应放4℃保存，培养淋病奈瑟菌和及脑膜炎奈瑟菌的标本除外。对放线菌标本，常用无菌棉拭子挤压瘘管，选取流出脓液中的“硫磺样颗粒”置于无菌试管内送检。也可无菌纱布条塞入瘘管，次日拨出送检。胸腔、腹腔、心包腔和滑膜腔等标本采集，应严格按无菌操作程序，由临床医生进行采集及时送检。细菌对干燥敏感或只能采集少量标本时，用棉拭子采集标本后立即放分泌物分离培养需氧菌的分离培养：化脓性感染的标本用划线分离法将标本接种于血平板、巧克力平板上，经35—37℃24—48h培养，巧克力平板放入5%~10%CO2环境中培养24-48小时。分泌物分离培养需氧菌的分离培养：分泌物涂片检查及初级报告涂片、显微镜下观察细菌的形态、大小、排列及染色特点，可初步报告“找到革兰氏×性×菌，呈×状排列。如镜检未见细菌时，可初步报告“直接涂片未找到细菌”对怀疑有结核分枝杆菌感染的标本，采用抗酸性染色镜检，并报告镜检测结果。

分泌物涂片检查及初级报告涂片、显微镜下观察细菌的形态、大小、穿刺液标本培养标本采集和运送：1．由临床医师无菌操作经皮肤抽吸或手术中采集标本。为防止穿刺液的凝固，应在无菌容器内预先加入灭菌肝素（0.5mg肝素，可抗凝5ml标本）再注入各种穿刺液。2．标本采集量为细菌≥1ml,真菌≥10ml,分枝杆菌≥10ml。标本采集完后应立即送检，最迟不超过2小时。穿刺液标本培养标本采集和运送：实验室检查显微镜检查：标本如为浆液，可先经3000r/min离心，取沉淀涂片。如为脓液，可直接涂片。固定后，革兰染色和抗酸染色镜检。根据细菌形态、染色特征即可初步报告。分离培养：无菌操作取离心后的沉淀物接种于血平板、巧克力平板和麦康凯平板，为提高检出细菌阳性率，并接种肉汤增菌培养。置于35℃培养箱中培养18～24小时，其中巧克力平板置于CO2环境中。实验室检查显微镜检查：标本如为浆液，可先经3000r/min女性生殖道感染标本培养标本采集：由临床医生标准采集，立即送检，最迟应在2小时内。分离培养：无菌操作将标本接种于血平板、巧克力平板和麦康凯平板，置于35℃培养24～48h，其中巧克力平板置于5%~10%CO2环境中。女性生殖道感染标本培养标本采集：精液、前列腺液培养标本采集：前列腺液由临床医生进行无菌采集，精液收集于无菌瓶中。1小时内及时送检。分离培养：无菌操作将标本接种于血平板、巧克力平板和麦康凯平板，置于35℃培养24～48h，其中巧克力平板置于5%~10%CO2环境中。精液、前列腺液培养标本采集：粪便细菌培养标本采集：1、标本采集尽可能在发病早期和使用抗生素之前。2、自然排便采集粪便标本时，取有脓血、粘液、组织碎片部分的粪便2~3g。液体粪便则取絮状物，一般取2~3ml，直接装入无菌管或运送培养基（GN培养基）中送检。粪便细菌培养标本采集：标本采集3、直肠拭子采集粪便标本，适于排便困难患者或婴儿。可用肥皂水将肛门周围洗净，用无菌盐水湿润的棉拭子插入肛门，成人约4~5cm，儿童约2~3cm，与直肠粘膜表面接触，轻轻旋转，必须将拭子置于GN培养基内送检。标本采集3、直肠拭子采集粪便标本，适于排便困难患者或婴儿。可标本验收容器应是清洁、带盖、广口（不宜使用纸盒）、标本勿加入防腐剂。标本送检应在2小时内；直肠拭子应置于运送培养基内；不被尿液污染；标本不干燥等，不合格者拒收。标本验收容器应是清洁、带盖、广口（不宜使用纸盒）、标本勿加入分离培养先将粪便接种于GN选择性液体培养基中，置35℃培养增菌3~4h。将GN增菌液转种于SS平板、麦康凯平板置于35℃培养24～48h，分离培养先将粪便接种于GN选择性液体培养基中，置35℃培养谢谢谢谢！谢谢谢谢！微生物学检验

标本采集与处理微生物学检验

标本采集与处理血液培养标本采集和运送1、血液采集时间：

⑴发热（≥38℃）或低温（≤36℃）寒战。⑵WBC增多。⑶皮肤粘膜出血。⑷血压降低。⑸昏迷。⑹特殊患者出现粒细胞减少,血小板减少等。应在以上一种或几种体征出现，而临床可疑菌血症时采集血培养，并且尽量在使用抗生素之前进行。为提高阳性率，在24小时内采集2~3份血培养。血液培养标本采集和运送2、采血部位及抽血量：一般抽取肘静脉血，成人采血量是5~10ml，儿童为3~5ml（尽量多抽提高阳性率），原则为血液与肉汤之比为1:5~1:10。3、采集血标本和接种时要严格无菌操作，避免杂菌污染。如果双相培养基则从冰箱取出，应将其平衡到室温，方才采集血标本接种。2、采血部位及抽血量：4、无菌操作采血后应立即送检,如不能立即送检,需室温保存或置35℃~37℃培养箱中,切勿冷藏！4、无菌操作采血后应立即送检,如不能立即送检,需室温保存或置实验室处理标本验收、登记：1、如发现血培养瓶标识与化验单申请单不符，如瓶破裂或明显污染。应立即与临床医师联系，报告拒收的具体理由.2、如发现标本采集放置12小时以上,用不适当类型的培养瓶收集标本、用过期的培养瓶收集标本、采血量不足等。应立即与临床医师联系，报告标本不合格的具体理由，建议补做血培养。3、对延迟送检的血培养瓶注意肉眼观察瓶内是否有絮状物、混浊、溶血、凝块、薄膜等。如发现应立即直接涂片镜检和划线转种。4、如验收合格，给标本和申请单进行标识编号，并在血培养专用澄记本上澄记病人的姓名、性别、年龄、科室、住院号、标本编号，然后置于35℃～37℃培养箱中培养。实验室处理标本验收、登记：下呼吸道感染标本培养标本采集1、自然咳痰法:以晨痰为佳,采集前应用清水清洁口腔牙齿,用力咳出呼吸道深部的痰,直接吐入痰培养无菌杯中,标本量应≥1ml.咳痰困难患者可雾化吸入取痰,采集完标本后应尽快送检,不能及时送检的标本,室温保存≤2h.2、支气管镜采集法:由临床医师按相应操作规程采集,应注意咽喉部正常菌群污染.3、小儿取痰法：用弯压舌板向后压舌，将拭子伸入咽部，小儿经压舌刺激咳嗽时，可喷出肺部或气管分泌物粘在拭子上送检。幼儿还可用手指轻叩胸骨柄上方，以诱发咳痰。下呼吸道感染标本培养标本采集痰标本验收1、呼吸道定植有大量的正常菌群,咽试子、痰厌氧培养无临床意义。2、肉眼观察痰标本呈水样或唾液样，或者标本涂片细胞学检查，WBC<10/低倍镜和鳞状上皮细胞>25/低倍镜，提示该标本已污染正常菌群，建议重送标本。

3、标本容器溢漏、无盖或送检时间超过2h拒收。

4、同时同部位或同一天两份相同检测的标本，应及时与申请医师协商处理。

5、遇有不合格标本,应及时与临床联系,报告不合格标本拒收的具体理由。痰标本验收1、呼吸道定植有大量的正常菌群,咽试子、痰厌氧培养痰标本培养显微镜检查：涂片革兰氏染色镜检（或直接涂片低倍镜镜检）并记录。1.如WBC>25/低倍镜和鳞状上皮细胞<10/低倍镜,提示该标本合格可用于细菌培养;2.WBC>25/低倍镜和鳞状上皮细胞10—25/低倍镜,提示该标本尚合格可用于细菌培养;3.WBC<10/低倍镜和鳞状上皮细胞>25/低倍镜,提示该标本不合格,重送标本.

细菌涂片染色检查:挑取标本脓性或带血部份涂片革兰氏染色镜检,报告所见细菌的量和吞噬细胞内是否有细菌等.痰标本培养显微镜检查：涂片革兰氏染色镜检（或直接涂片低倍镜镜痰标本培养分离培养挑取脓痰分别接种于羊血琼脂平板、麦康凯平板、巧克力琼脂平板上,置于35℃培养箱培养24-48小时。巧克力平板放入5%~10%CO2环境中培养24-48小时。痰标本培养分离培养初级报告即标本涂片染色细胞学和细菌学显微镜镜检的描述报告，如发现有诊断价值时及时口头报告，但应按要求详细记录。1.细胞学镜检的描述报告：包括WBC数/低倍镜和细胞内是否含有细菌且胞内细菌的染色形态特性。2.细菌学镜检的描述报告：如见到排列成葡萄状的革兰氏阳性球菌，可报告“找到革兰氏阳性球菌，形似葡萄球菌”；如找到不识别的细菌时则报告“找到革兰×性×形细菌”。初级报告即标本涂片染色细胞学和细菌学显微镜镜检的描述报告，如尿液细菌培养尿培养检查的临床指征:1有典型的尿路感染症状;2肉眼脓尿或血尿3尿常规白细胞和/或亚硝酸盐阳性4不明原因的发热,无其他局部症状5泌尿系统疾病手术前和膀胱排空功能受损等.6留置导尿管的病人出现发热。尿液细菌培养尿培养检查的临床指征:尿标本的采集1.清洁中段尿:晚睡前少饮水,女性病人用手分开大阴唇,男性病人翻上包皮,用肥皂将阴部清洗干净后,用清水冲洗尿道口周围。将前段尿排去，将中段尿约10ml直接排入专用的无菌管中。2.耻骨上膀胱穿刺法：严格按无菌操作，用注射器直接从耻骨上皮穿入膀胱，吸取尿液置于专用的无菌管中。3.直接导尿法：按常规方法局部消毒后，用导尿管直接经尿道插入膀胱，获取膀胱尿。4.留置导尿：先消毒导尿管外部，按无菌操作用注射器通过导尿管吸取尿液置于专用的无菌管中。6.其他方法：收集特定部位的尿标本可以通过侵入的方式如膀胱镜或手术中进行采集。尿标本的采集1.清洁中段尿:晚睡前少饮水,女性病人用手分开尿标本的运送标本采集后应及时送检，2h内进行接种,否则应置4—8℃冰箱保存，冷藏保存标本时间不得超过8h。禁止尿中加入防腐剂和消毒剂。尽量在未使用抗生素前采集标本培养。尿标本的运送标本采集后应及时送检，2h内进行接种,否则应置4尿标本验收检查申请单所提供的信息（姓名、床号）和标本标鉴上的信息是否相同，所用的容器（10ml无菌管）是否合格等。对不合格的标本应注明原因，拒收，并做记录。尿标本验收检查申请单所提供的信息（姓名、床号）和标本标鉴上的尿分离培养一般培养：将标本轻轻旋转混匀，用定量接种环或无菌微量加样器取尿液0.001ml接种于血平板和麦康凯平板，35℃～37℃培养18—24h。特殊培养：对怀疑有苛氧菌感染者应采用耻骨上膀胱穿刺法或导尿法采集标本，接种时加一块巧克力平板，并置5%CO2环境中培养24-48小时。经18～24h培养无菌生长者，应将所有培养基继续培养24小时。建议：为提高检出率，要求10ml尿液置于无菌管内离心3000r/h，5~10分钟。取尿沉渣接种尿分离培养一般培养：将标本轻轻旋转混匀，用定量接种环或无菌微脓汁与创伤感染分泌物培养标本采集开放性感染分必物或脓液先用无菌生理盐水冲洗表面，用2支无菌棉拭子取创伤或溃疡深处的脓液及分泌物送检，一支涂片检查用，一支为培养用，将棉拭子放入无菌管内或增菌培养基内送检。闭性脓肿常局部消毒后，用注射器抽取脓液置于无菌试管内送检。如果怀疑厌氧菌感染时，当即作床边接种或置于厌氧运送培养基内送检。脓汁与创伤感染分泌物培养标本采集细菌对干燥敏感或只能采集少量标本时，用棉拭子采集标本后立即放入增菌培养基内。对于不能立即送检的标本，应放4℃保存，培养淋病奈瑟菌和及脑膜炎奈瑟菌的标本除外。对放线菌标本，常用无菌棉拭子挤压瘘管，选取流出脓液中的“硫磺样颗粒”置于无菌试管内送检。也可无菌纱布条塞入瘘管，次日拨出送检。胸腔、腹腔、心包腔和滑膜腔等标本采集，应严格按无菌操作程序，由临床医生进行采集及时送检。细菌对干燥敏感或只能采集少量标本时，用棉拭子采集标本后立即放分泌物分离培养需氧菌的分离培养：化脓性感染的标本用划线分离法将标本接种于血平板、巧克力平板上，经35—37℃24—48h培养，巧克力平板放入5%~10%CO2环境中培养24-48小时。分泌物分离培养需氧菌的分离培养：分泌物涂片检查及初级报告涂片、显微镜下观察细菌的形态、大小、排列及染色特点，可初步报告“找到革兰氏×性×菌，呈×状排列。如镜检未见细菌时，可初步报告“直接涂片未找到细菌”对怀疑有结核分枝杆菌感染的标本，采用抗酸性染色镜检，并报告镜检测结果。

分泌物涂片检查及初级报告涂片、显微镜下观察细菌的形态、大小、穿刺液标本培养标本采集和运送：1．由临床医师无菌操作经皮肤抽吸或手术中采集标本。为防止穿刺液的凝固，应在无菌容器内预先加入灭菌肝素（0.5mg肝素，可抗凝5ml标本）再注入各种穿刺液。2．标本采集量为细菌≥1ml,真菌≥10ml,分枝杆菌≥10ml。标本采集完后应立即送检，最迟不超过2小时。穿刺液标本培养标本采集和运送：实验室检查显微镜检查：标本如为浆液，可先经3000r/min离心，取沉淀涂片。如为脓液，可直接涂片。固定后，革兰染色和抗酸染色镜检。根据细菌形态、染色特征即可初步