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文档简介
生物组织中还原性糖、脂肪、蛋白质的鉴定一、实验原理某些化学试剂能够使生物组织中的有关有机化合物产生特定的颜色反应R—CHOCu(OH)2Cu2O
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R—COOH还原糖+斐林试剂砖红色沉淀碱性条件△2mlNaOH+4~5滴CuSO4脂肪+苏丹Ⅲ染液橘黄色苏丹Ⅳ染液红色镜检镜检蛋白质+双缩脲试剂紫色最初是用来检验双缩脲的(NH2—OC—NH—CO—NH2)二、实验流程(1)还原糖的鉴定含糖量高、白色或近于白色的植物组织制浆→过滤→取液组织样液2ml+刚配置好的斐林试剂2ml(蓝色)沸水浴加热2min(变成砖红色)还原糖与斐林试剂在加热煮沸条件下生成砖红色沉淀选材:制备组织样液:颜色反应:结论:二、实验流程(3)蛋白质的鉴定选材与制备:颜色反应:结论:蛋白质与双缩脲试剂发生作用,产生紫色反应
黄豆豆浆滤液(浸泡1~2d)鸡蛋蛋白研磨过滤组织样液2ml+双缩脲试剂A2ml(无色)双缩脲试剂B3~4滴(变成紫色)(1)还原糖——含糖量高、颜色较浅的组织。如苹果、梨、白萝卜等(2)脂肪——富含脂肪的种子,如花生。如果是新鲜种子,不要浸泡;如是干种子,需要浸泡3~4h。(3)蛋白质——富含蛋白质的生物组织。植物材料常用大豆,浸泡1~2d,适于研磨,动物材料常用鸡蛋蛋白。1、实验材料的选择
2、斐林试剂与双缩脲试剂的比较比较项目斐林试剂双缩脲试剂不同点使用方法反应条件反应原理颜色浓度相同点甲、乙液混合均匀后使用,且现配现用先加A液,再加B液需加热煮沸不需加热即可反应醛基被氧化成羧基,Cu(OH)2被还原成Cu2O↓具有二个以上肽键的化合物在碱性条件下与Cu2+反应生成络合物砖红色紫色乙液CuSO4浓度为0.05g/mlB液CuSO4浓度为0.01g/ml都含有NaOH、CuSO4两种成分,且所用NaOH浓度均为0.1g/ml3、斐林试剂与班氏试剂的比较比较项目斐林试剂班氏试剂不同点成分使用方法保存方法相同点CuSO4、NaOH+酒石酸钠混合后可长期保存,随时启用由于NaOH是强碱,产生的Cu(OH)2多,易沉淀,故甲乙液分开保存(1)反应原理相同,均是新制的Cu(OH)2与醛基反应;(2)反应均需要加热煮沸1~2min。CuSO4、Na2CO3+柠
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