实验五 血红蛋白含量的测定、血型鉴定课件

实验五血红蛋白含量的测定、血型鉴定实验目的掌握血红蛋白的测定方法；学习鉴定血型的基本方法，观察红细胞凝集现象，掌握ABO血型鉴定的原理。测定血红蛋白的意义人血红蛋白参考值成年男性：13--15克/dl；成年女性：11--14克/dl；儿童：（依年龄而异）12--14克/dl。临床意义：大致与红细胞增减相似。高原地区居民的血红蛋白浓度一般比平原居民为高，这是机体对低气压环境的一种适应现象。一般来说，在疾病状况下，血红蛋白的增减是与红细胞的改变相平行的，即引起红细胞增多的疾病，也会使血红蛋白含量增加。使红细胞减少的疾病，也使血红蛋白含量减少。在贫血时，血液中的红细胞数量和血红蛋白浓度都有不同程度的下降，但不一定按相同的比例变化。有时红细胞数量可以减少很多，而血红蛋白的浓度的降低却相对地不那么显著，见于大细胞性贫血，由于单个红细胞所含的血红蛋白量较正常者为多。相反，也有的红细胞减少得不很多，而血红蛋白浓度却显著降低，例如缺铁性贫血，这是由于每个红细胞的血红蛋白含量比正常明显减少，故血红蛋白减低的程度较红细胞减少更为显著。依据检验结果，分析病因，做到准确的诊断和治疗都是很必要的。实验原理-血型鉴定血型一般指红细胞的血型，是根据红细胞膜外表面存在的特异性抗原（镶嵌于红细胞膜上的糖蛋白和糖脂）来确定的，这种抗原或凝集原是由遗传决定的。抗体或凝集素存在于血清中，与红细胞的不同抗原起反应，产生凝集，最后溶解，由于这种现象，临床上在输血前必须注意鉴定血型，以确保安全输血。ABO血型鉴定实验原理抗原抗体反应——在ABO血型系统中，红细胞膜上抗原分A和B两种抗原，而血清抗体分抗A和抗B两种抗体。A抗原加抗A抗体或B抗原加抗B抗体，则产生凝集现象→从而测知受试者红细胞膜上有无A或/和B抗原→判断血型抗体在相邻的红细胞表面抗原决定簇之间搭桥形成肉眼可见的颗粒状凝集团块.见图IgM抗体凝集红细胞示意图IgM抗体凝集红细胞示意图

IgGM在盐水介质中产生凝集方法与步骤-血红蛋白测定于测定管内加入0.1mol/L盐酸溶液至百分刻度20处。取20μl被检血液,迅速将吸血管插入测定管底部盐酸液中，缓慢挤出血液，再吸取上部清液，反复冲洗吸血管2~3次，并混匀，静置10min。沿着管壁加入蒸馏水，逐步稀释至与标准色柱色调一致后，读取重量（或百分）刻度值报告结果。标准制换算：血红蛋白(g/L)=血红蛋白(g/dl)×10方法与步骤-血红蛋白测定

用滤纸片或棉球擦净吸管口周围的血液，将吸管插入血红蛋白稀释管的盐酸内，轻轻吹出血液至管底部，反复吸入并吹出稀释管内上层的盐酸，洗涤吸管多次，使吸管内的血液完全洗入稀释管内。摇匀或用小玻璃棒搅匀后，放置10min，使盐酸与血红蛋白充分作用。把稀释管插入标准比色架两色柱中央的空格中，使无刻度的两侧面位于空格的前后方，便于透光和比色。用滴管向稀释管内逐滴加入蒸馏水（每加一滴要搅拌），边滴边观察颜色，直至颜色与标准玻璃色柱相同为止。稀释管上液面的刻度读数即为每100ml血液血红蛋白的克数。方法与步骤-血型鉴定（1）取双凹玻片一块，用干净纱布轻拭使之洁净，在玻片两端用记号笔标明A及B，并分别各滴入A及B标准血清一滴。（2）用滴管吸取红细胞悬液，分别各滴一滴于玻片两端的血清上，注意勿使滴管与血清相接触。（3）竹签两头分别混合，搅匀。用两根分别用来混合A型和B型标准

（4）观察结果。如有凝集反应可见到呈红色点状或小片状凝集块浮起。先用肉眼看有无凝集现象，肉眼不易分辨时，则在低倍显微镜下观察，如有凝集反应，可见红细胞聚集成团。（5）判断血型根据被试者红细胞是否被A，B型标准血清所凝集，判断其血型。血型判定正定型反定型结果抗A抗BA型RBCB型RBCO型RBC--++-O+--+-A-++--B++---AB注意事项吹血液入稀释管及洗净吸管时，不宜用力过猛。蒸馏水需逐滴加入，多做几次比色，以免稀释过量。每次比色时，应将搅拌用的玻璃棒取出，以免影响比色。由于操作过程过长而造成吸管内血液凝固，堵塞管孔时，则要按下列溶液的顺序重复冲洗吸管，即用水→95%酒精→乙醚或丙酮。五注意事项玻片、试管都要标记！！！，A及B标准血清绝对不能相混,不要依靠用染料颜色标记血清。工作中要形成自己的习惯！所用玻片、试管实验前必须清洗干净，以免出现假凝集现象。红细胞悬液滴管头不能接触标准血清液面，竹签一端去混匀一侧就不能去接触另一侧。一般先加血清，然后再加红细胞悬液，便于核