何宣鹏答辩(定稿)201101020132课件

姓名：何宣鹏专业：化学学号：201101020132指导教师：吴娜（讲师）草果GC-MS指纹图谱研究姓名：何宣鹏草果GC-MS指纹图谱研究目录实验研究的主要内容结论Clicktoaddtitleinhere2344Clicktoaddtitleinhere论文研究背景及意义1参考文献5研究内容及技术路线13结果与讨论目录实验研究的主要内容结论Clicktoad1论文研究背景及意义

草果为姜科豆蔻属多年生草本植物，全株有辛香味。目前，研究者对草果的研究主要集中在基源植物、栽培技术研究、生药材鉴定、中药化学成分、炮制的研究、药理作用、临床用药、生理功能研究等方面，对草果GC-MS指纹图谱研究的文章很很少报道。论文通过对HS-GC-MS条件优化，对草果不同部位（果、壳、仁、茎、叶、芽）挥发性成分进行测定，同时建立草果不同部位、不同产地（红河、楚雄、丽江、大理、玉溪、文山）、不同炮制方法（炒制、盐制、姜制、净制、醋制）的挥发性GC-MS指纹图谱，采用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A版”软件对指纹图谱进行相似度计算，采用SPSS19.0软件对指纹图谱进行聚类分析、主成分分析，为草果的快速鉴别、品质的评价、质量的控制、生产工艺提供参考。1论文研究背景及意义草果为姜科豆蔻属多年生草本植物，全2实验研究的主要内容

净制：除去外壳，搓散，筛去膜质的假种皮。炒制：取原药材放入锅内，用文火炒至外表黑褐，发泡，有香气时取出，放冷，筛去灰屑，用时捣碎。盐制：每草果100Kg，用食盐2Kg。姜制：每草果仁100Kg，用生姜10Kg或干姜3Kg。醋制：醋煮。

草果的炮制国样品预处理

将草果不同部位（壳、仁、果、茎、叶、芽）、不同产地（红河、楚雄、丽江、大理、文山、玉溪）、不同炮制方法（净制、炒制、盐制、姜制、醋制）的草果于万能中药粉碎机中粉碎，过100目中药筛，并储存在密封袋中，贴上标签。草果的茎、叶、芽放入放入电热鼓风干燥箱中，于50℃下烘60h，再粉碎。2实验研究的主要内容净制：除去外壳，搓散，筛去膜质的假种皮2实验研究的主要内容

准确称取三份1.00g的草果干粉样品，其中两份置于50mL的具塞三角烧瓶中，加入15.00mL正己烷溶剂，超声处理30min，超声功率：200W，过滤，加5.00mL的正己烷洗涤残渣，过滤，合并滤液，取适量体积的溶液分别加入直接进样瓶和顶空进样瓶；另一份草果干粉样品直接加入顶空进样瓶，待测。

样品的制备国仪器条件

GC条件：柱箱温度80℃；进样口温度220℃；分流比20:1；柱流量1.0ml/min；载气：He（纯度≥99.999%气相毛细管色谱柱HP-FFAP（30m×0.250mm×0.25um）；程序升温：初始温度80℃，保持3min，以6℃/min升至180℃，保持2min；总运行时21.67min。MS条件：离子源温度200℃；接口温度220℃；检测器电压0.88KV；溶剂延迟时间2min2实验研究的主要内容准确称取三份1.00g的草果干粉样实验流程图实验流程图3结果与讨论3.1草果GC-MS条件选择不同分流比对草果超声提取直接进样挥发性成分影响的GC-MS图谱注：从下往上分流比分别为不分流、10:1、20:1、50:1不同分流比对草果超声提取直接进样挥发性成分影响的时间、信号三维图谱分流比选择3结果与讨论3.1草果GC-MS条件选择不同分流比对草果超声3结果与讨论3.1草果GC-MS条件选择不不同柱流量对草果超声提取直接进样挥发性成分影响的GC-MS图谱注：从下往上柱流量分别为0.5、1.0、1.5不同分流比对草果超声提取直接进样挥发性成分影响的时间、信号三维图谱柱流量比较3结果与讨论3.1草果GC-MS条件选择不不同柱流量对草果超3结果与讨论3.1草果GC-MS条件选择不同色谱柱对草果超声提取直接进样挥发性成分影响的GC-MS图谱注：从下往上色谱柱分别为Rtx-5MS、DB-1701、HP-FFAP不同色谱柱对草果超声提取直接进样挥发性成分影响的时间、信号三维图谱色谱柱的优化3结果与讨论3.1草果GC-MS条件选择不同色谱柱对草果超声3结果与讨论3.2HS条件选择不同振荡温度对草果超声提取顶空进样挥发性成分影响的GC-MS图谱注：从下往上振荡温度分别为120℃、130℃、140℃、150℃不同振荡温度对草果超声提取顶空进样挥发性成分影响的时间、信号三维图谱超声提取顶空进样振荡温度选择3结果与讨论3.2HS条件选择不同振荡温度对草果超声提取顶3结果与讨论3.2HS条件选择不同振荡时间对草果超声提取顶空进样挥发性成分影响的GC-MS图谱注：从下往上振荡时间分别为10min、15min、20min、25min不同振荡时间对草果超声提取顶空进样挥发性成分影响的时间、信号三维图谱超声提取顶空进样振荡时间选择3结果与讨论3.2HS条件选择不同振荡时间对草果超声提取顶3结果与讨论3.2HS条件选择不同振荡温度对草果干粉顶空进样挥发性成分影响的GC-MS图谱注：从下往上振荡温度分别为80℃、100℃、120℃、150℃不同振荡温度对草果干粉顶空进样挥发性成分影响的时间、信号三维图谱干粉顶空进样振荡温度选择3结果与讨论3.2HS条件选择不同振荡温度对草果干粉顶空进3结果与讨论3.2HS条件选择不同振荡时间对草果干粉顶空进样挥发性成分影响的GC-MS图谱注：从下往上振荡时间分别为10min、15min、20min不同振荡时间对草果干粉顶空进样挥发性成分影响的时间、信号三维图谱干粉顶空进样振荡时间选择3结果与讨论3.2HS条件选择不同振荡时间对草果干粉顶空进3结果与讨论3.3提取和进样方式的优化不同提取进样方式对草果挥发性成分影响的GC-MS图谱注：从下往上提取进样方式分别为超声提取直接进样、超声提取顶空进样、干粉顶空进样不同提取进样方式对草果挥发性成分影响的时间、信号三维图谱

提取进样方式的优化3结果与讨论3.3提取和进样方式的优化不同提取进样方式对优化结果

基线平稳、出峰较多、峰形对称、重叠峰少、杂峰少、峰形高大。

优化方式国优化结果

GC-MS的优化条件为：分流比为20:1、柱流量为1.0ml/min、色谱柱为HP-FFAP；草果超声提取顶空进样的振荡温度为140℃，振荡时间为20min；草果干粉顶空进样振荡温度为150℃，振荡时间为10min；草果的最佳提取进样方式为：干粉顶空进样。优化结果基线平稳、出峰较多、峰形对称、重叠峰少、杂峰少结果与讨论国挥发性成分

草果不同部位共鉴定出86个化合物，草果的果中鉴定出43个化合物，无特征化合物；草果果壳中鉴定出55个化合物，有7个是特征化合物；草果果仁中鉴定出44个化合物，有5个是特征化合物；草果的茎中鉴定出35个化合物，有4个是特征化合物；草果的叶中鉴定出50个化合物，有13个为特征化合物；草果芽中鉴定出31个化合物，无特征化合物；草果的果、壳、仁、茎、叶、芽中都含有的化合物有13个，这13个化合物中，又以1,8-桉叶素（1,8-cineole）含量最大，含量都在4.00%以上。结果与讨论国挥发性成分草果不同部位共鉴定出86个化合结果与讨论挥发性成分测定结果（局部）结果与讨论挥发性成分测定结果指纹图谱建立指纹图谱建立相似度计算结果不同部位果壳仁茎叶芽R果1.0000.8910.5510.6170.5500.3180.884壳0.8911.0000.5020.7900.6970.4260.872仁0.5510.5021.0000.4120.4780.2560.843茎0.6170.7900.4121.0000.6320.3730.685叶0.5500.6970.4780.6321.0000.4470.707芽0.3180.4260.2560.3730.4471.0000.408R0.8840.8720.8430.6850.7070.4081.000产地红河楚雄丽江大理玉溪文山R红河1.0000.8640.7220.5500.8050.7780.924楚雄0.8641.0000.7200.6260.9180.9320.958丽江0.7220.7201.0000.4330.7000.6000.825大理0.5500.6260.4331.0000.6180.6650.698玉溪0.8050.9180.7000.6181.0000.9070.931文山0.7780.9320.6000.6650.9071.0000.905R0.9240.9580.8250.6980.9310.9051.000炮制方法净制炒制盐制姜制醋制R净制1.0000.8450.9570.8770.8720.960炒制0.8451.0000.8500.9920.7280.944盐制0.9570.8501.0000.8940.8570.964姜制0.8770.9920.8941.0000.7590.966醋制0.8720.7280.8570.7591.0000.883R0.9600.9440.9640.9660.8831.000相似度计算结果不同部位果壳仁茎叶芽R果1.0000.8910相似度分布曲面图相似度分布曲面图聚类分析树状图聚类分析树状图主成分碎石图主成分碎石图主成分三维投影图主成分三维投影图4结论

草果不同部位样品差异大，分布不稳定；不同产地的草果挥发性成分和含量虽然有差异，但是分布比较稳定；不同炮制方法的草果挥发性成分很相近，而且样品分布很稳定，说明草果通过炮制后药性很稳定。

相似度评价结果国聚类、主成分分析结果

聚类分析结果：草果果不同部位样品可以分为2类；草果不同产地样品可以分为2类；草果不同炮制方法样品可以分为3类。主成分分析结果：草果不同部位样品共提取了3个主成分；草果不同部位共有化学成分共提取了4个主成分；草果不同产地样品共提取了3个主成分；草果不同炮制方法样品共提取了3个主成分。4结论草果不同部位样品差异大，分布不稳定；不同产地参考文献1

[1]孟大威，李伟，王鹏君等.草果香气成分研究[J].中国实验方剂学杂志.2012，28(6):703-707.[2]StarkenmannC,MayenzetF,BrauchliR.Structureelucidationofapungentcompoundinblackcardamom:Amomumtsao-koCrevostetLemarie(Zingiberaceae)[J].JAgricFoodChem,2007,55(26):10902-109071.[3]吴惠勤，黄晓兰，黄芳等.草果挥发油的气相色谱-质谱指纹图谱[J].草果挥发油的气相色谱-质谱指纹图谱.2004，25(2):92-95.[4]何俏明，覃洁萍，黄艳等.草果果仁及果壳挥发油化学成分的GC-MS分析[J].中国实验方剂学杂志.2013，19(14):112-117.[5]马洁，彭建明，吴志红等.国产草果化学成分研究进展[J].中国中医药信息杂志.2005,12(9):97-98.参考文献1[1]孟大威，李伟，王鹏君等.草果香气成分研究[参考文献2[6]彭川丛，梁英娇.中药指纹图谱研究进展[J].中实用中医药杂志.2010,26（11）:810-812.[7]彭黄最，谷莉，黄河舟等.中药色谱指纹图谱研究进展[J].药学实践杂志.2003，21（6）:326-329.[8]柴欣生，付时雨，莫淑欢等.静态顶空气相色谱技术[J].化学进展.2008,20(5):762-766.[9]郭勇，宋芸娟，缪剑华.静态顶空-气相色谱-质谱法测定八角挥发性成分[J].药物分析杂志.2009,29(1):91-95.[10]/view/1011070.htm.[11]郭李爽，吴国学.草果炮制历史沿革及现代研究[J].中国卫生产业.2011,8(3):107-108.[12]四川省卫生厅.四川省中药饮片炮制规范[S].四川:四川人民出版社,1977:1984.参考文献2[6]彭川丛，梁英娇.中药指纹图谱研究进展[J].参考文献3[13]云南省卫生局.云南省中药咀片炮制规范[S].1974.[14]贵州省革委会卫生局.贵州中药饮片炮制规范[S].1975.[15]中华人民共和国药典委员会.中华人民共和国药典[S].北京:化学工业出版社,2005.[16]清.景冬阳.嵩崖尊生全书[M].扫叶山房石印本.[17]聂磊，曹进，罗国安等.中药指纹图谱相似度评价方法的比较[J].中成药.2005,27(3):249-252.[18]王骏，王士同，邓赵红.聚类分析研究中的若干问题[J].控制与决策.2012,27(3):321-326.参考文献3[13]云南省卫生局.云南省中药咀片炮制规范[S参考文献4[19]陈伟.主成份分析法用于评价需注意的若干问题[J].类工效学.2002,8(1):30-33.[20]丁艳霞，崔秀明，戴云等.草果的研究进展[J].中国科技核心期刊.2005,4:60-63.[21]丁艳霞，崔秀明，李雪玲等.草果挥发油的GC-MS指纹图谱[J].光谱实室.2006，23(1):81-84.[22]李海丽.中药指纹图谱研究进展概况[J].医药卫生.2006,35(6):237-238.[23]斯林林，汪阳东，陈益存等.山鸡椒挥发油GC-MS指纹图谱及模式识别研[J].激光生物学报.2012,21(5):453-457.参考文献4[19]陈伟.主成份分析法用于评价需注意的若干问题感谢各位老师和同学的聆听感谢各位老师和同学的聆听姓名：何宣鹏专业：化学学号：201101020132指导教师：吴娜（讲师）草果GC-MS指纹图谱研究姓名：何宣鹏草果GC-MS指纹图谱研究目录实验研究的主要内容结论Clicktoaddtitleinhere2344Clicktoaddtitleinhere论文研究背景及意义1参考文献5研究内容及技术路线13结果与讨论目录实验研究的主要内容结论Clicktoad1论文研究背景及意义

草果为姜科豆蔻属多年生草本植物，全株有辛香味。目前，研究者对草果的研究主要集中在基源植物、栽培技术研究、生药材鉴定、中药化学成分、炮制的研究、药理作用、临床用药、生理功能研究等方面，对草果GC-MS指纹图谱研究的文章很很少报道。论文通过对HS-GC-MS条件优化，对草果不同部位（果、壳、仁、茎、叶、芽）挥发性成分进行测定，同时建立草果不同部位、不同产地（红河、楚雄、丽江、大理、玉溪、文山）、不同炮制方法（炒制、盐制、姜制、净制、醋制）的挥发性GC-MS指纹图谱，采用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A版”软件对指纹图谱进行相似度计算，采用SPSS19.0软件对指纹图谱进行聚类分析、主成分分析，为草果的快速鉴别、品质的评价、质量的控制、生产工艺提供参考。1论文研究背景及意义草果为姜科豆蔻属多年生草本植物，全2实验研究的主要内容

净制：除去外壳，搓散，筛去膜质的假种皮。炒制：取原药材放入锅内，用文火炒至外表黑褐，发泡，有香气时取出，放冷，筛去灰屑，用时捣碎。盐制：每草果100Kg，用食盐2Kg。姜制：每草果仁100Kg，用生姜10Kg或干姜3Kg。醋制：醋煮。

草果的炮制国样品预处理

将草果不同部位（壳、仁、果、茎、叶、芽）、不同产地（红河、楚雄、丽江、大理、文山、玉溪）、不同炮制方法（净制、炒制、盐制、姜制、醋制）的草果于万能中药粉碎机中粉碎，过100目中药筛，并储存在密封袋中，贴上标签。草果的茎、叶、芽放入放入电热鼓风干燥箱中，于50℃下烘60h，再粉碎。2实验研究的主要内容净制：除去外壳，搓散，筛去膜质的假种皮2实验研究的主要内容

准确称取三份1.00g的草果干粉样品，其中两份置于50mL的具塞三角烧瓶中，加入15.00mL正己烷溶剂，超声处理30min，超声功率：200W，过滤，加5.00mL的正己烷洗涤残渣，过滤，合并滤液，取适量体积的溶液分别加入直接进样瓶和顶空进样瓶；另一份草果干粉样品直接加入顶空进样瓶，待测。

样品的制备国仪器条件

GC条件：柱箱温度80℃；进样口温度220℃；分流比20:1；柱流量1.0ml/min；载气：He（纯度≥99.999%气相毛细管色谱柱HP-FFAP（30m×0.250mm×0.25um）；程序升温：初始温度80℃，保持3min，以6℃/min升至180℃，保持2min；总运行时21.67min。MS条件：离子源温度200℃；接口温度220℃；检测器电压0.88KV；溶剂延迟时间2min2实验研究的主要内容准确称取三份1.00g的草果干粉样实验流程图实验流程图3结果与讨论3.1草果GC-MS条件选择不同分流比对草果超声提取直接进样挥发性成分影响的GC-MS图谱注：从下往上分流比分别为不分流、10:1、20:1、50:1不同分流比对草果超声提取直接进样挥发性成分影响的时间、信号三维图谱分流比选择3结果与讨论3.1草果GC-MS条件选择不同分流比对草果超声3结果与讨论3.1草果GC-MS条件选择不不同柱流量对草果超声提取直接进样挥发性成分影响的GC-MS图谱注：从下往上柱流量分别为0.5、1.0、1.5不同分流比对草果超声提取直接进样挥发性成分影响的时间、信号三维图谱柱流量比较3结果与讨论3.1草果GC-MS条件选择不不同柱流量对草果超3结果与讨论3.1草果GC-MS条件选择不同色谱柱对草果超声提取直接进样挥发性成分影响的GC-MS图谱注：从下往上色谱柱分别为Rtx-5MS、DB-1701、HP-FFAP不同色谱柱对草果超声提取直接进样挥发性成分影响的时间、信号三维图谱色谱柱的优化3结果与讨论3.1草果GC-MS条件选择不同色谱柱对草果超声3结果与讨论3.2HS条件选择不同振荡温度对草果超声提取顶空进样挥发性成分影响的GC-MS图谱注：从下往上振荡温度分别为120℃、130℃、140℃、150℃不同振荡温度对草果超声提取顶空进样挥发性成分影响的时间、信号三维图谱超声提取顶空进样振荡温度选择3结果与讨论3.2HS条件选择不同振荡温度对草果超声提取顶3结果与讨论3.2HS条件选择不同振荡时间对草果超声提取顶空进样挥发性成分影响的GC-MS图谱注：从下往上振荡时间分别为10min、15min、20min、25min不同振荡时间对草果超声提取顶空进样挥发性成分影响的时间、信号三维图谱超声提取顶空进样振荡时间选择3结果与讨论3.2HS条件选择不同振荡时间对草果超声提取顶3结果与讨论3.2HS条件选择不同振荡温度对草果干粉顶空进样挥发性成分影响的GC-MS图谱注：从下往上振荡温度分别为80℃、100℃、120℃、150℃不同振荡温度对草果干粉顶空进样挥发性成分影响的时间、信号三维图谱干粉顶空进样振荡温度选择3结果与讨论3.2HS条件选择不同振荡温度对草果干粉顶空进3结果与讨论3.2HS条件选择不同振荡时间对草果干粉顶空进样挥发性成分影响的GC-MS图谱注：从下往上振荡时间分别为10min、15min、20min不同振荡时间对草果干粉顶空进样挥发性成分影响的时间、信号三维图谱干粉顶空进样振荡时间选择3结果与讨论3.2HS条件选择不同振荡时间对草果干粉顶空进3结果与讨论3.3提取和进样方式的优化不同提取进样方式对草果挥发性成分影响的GC-MS图谱注：从下往上提取进样方式分别为超声提取直接进样、超声提取顶空进样、干粉顶空进样不同提取进样方式对草果挥发性成分影响的时间、信号三维图谱

提取进样方式的优化3结果与讨论3.3提取和进样方式的优化不同提取进样方式对优化结果

基线平稳、出峰较多、峰形对称、重叠峰少、杂峰少、峰形高大。

优化方式国优化结果

GC-MS的优化条件为：分流比为20:1、柱流量为1.0ml/min、色谱柱为HP-FFAP；草果超声提取顶空进样的振荡温度为140℃，振荡时间为20min；草果干粉顶空进样振荡温度为150℃，振荡时间为10min；草果的最佳提取进样方式为：干粉顶空进样。优化结果基线平稳、出峰较多、峰形对称、重叠峰少、杂峰少结果与讨论国挥发性成分

草果不同部位共鉴定出86个化合物，草果的果中鉴定出43个化合物，无特征化合物；草果果壳中鉴定出55个化合物，有7个是特征化合物；草果果仁中鉴定出44个化合物，有5个是特征化合物；草果的茎中鉴定出35个化合物，有4个是特征化合物；草果的叶中鉴定出50个化合物，有13个为特征化合物；草果芽中鉴定出31个化合物，无特征化合物；草果的果、壳、仁、茎、叶、芽中都含有的化合物有13个，这13个化合物中，又以1,8-桉叶素（1,8-cineole）含量最大，含量都在4.00%以上。结果与讨论国挥发性成分草果不同部位共鉴定出86个化合结果与讨论挥发性成分测定结果（局部）结果与讨论挥发性成分测定结果指纹图谱建立指纹图谱建立相似度计算结果不同部位果壳仁茎叶芽R果1.0000.8910.5510.6170.5500.3180.884壳0.8911.0000.5020.7900.6970.4260.872仁0.5510.5021.0000.4120.4780.2560.843茎0.6170.7900.4121.0000.6320.3730.685叶0.5500.6970.4780.6321.0000.4470.707芽0.3180.4260.2560.3730.4471.0000.408R0.8840.8720.8430.6850.7070.4081.000产地红河楚雄丽江大理玉溪文山R红河1.0000.8640.7220.5500.8050.7780.924楚雄0.8641.0000.7200.6260.9180.9320.958丽江0.7220.7201.0000.4330.7000.6000.825大理0.5500.6260.4331.0000.6180.6650.698玉溪0.8050.9180.7000.6181.0000.9070.931文山0.7780.9320.6000.6650.9071.0000.905R0.9240.9580.8250.6980.9310.9051.000炮制方法净制炒制盐制姜制醋制R净制1.0000.8450.9570.8770.8720.960炒制0.8451.0000.8500.9920.7280.944盐制0.9570.8501.0000.8940.8570.964姜制0.8770.9920.8941.0000.7590.966醋制0.8720.7280.8570.7591.0000.883R0.9600.9440.9640.9660.8831.000相似度计算结果不同部位果壳仁茎叶芽R果1.0000.8910相似度分布曲面图相似度分布曲面图聚类分析树状图聚类分析树状图主成分碎石图主成分碎石图主成分三维投影图主成分三维投影图4结论

草果不同部位样品差异大，分布不稳定；不同产地的草果挥发性成分和含量虽然有差异，但是分布比较稳定；不同炮制方法的草果挥发性成分很相近，而且样品分布很稳定，说明草果通过炮制后药性很稳定。

相似度评价结果国聚类、主成分分析结果

聚类分析结果：草果果不同部位样品可以分为2类；草果不同产地样品可以分为2类；草果不同炮制方法样品可以分为3类。主成分分析结果：草果不同部位样品共提取了3个主成分；草果不同部位共有化学成分共提取了4个主成分；草果不同产地样品共提取了3个主成分；草果不同炮制方法样品共提取了3个主成分。4结论草果不同部位样品差异大，分布不稳定；不同产地参考文献1

[1]孟大威，李伟，王鹏君等.草果香气成分研究[J].中国实验方剂学杂志.2012，28(6):703-707.[2]StarkenmannC,MayenzetF,BrauchliR.Structureelucidationofapungentcompoundinblackcardamom:Amomumtsao-koCrevostetLemarie(Zingiberaceae)[J].JAgricFoodChem,2007,55(26):10902-109071.[3]吴惠勤，黄晓兰，黄芳等.草果挥发油的气相色谱-质谱指纹图谱[J].草果挥发油的气相色谱-质谱指纹图谱.2004，25(2):92-95.[4]何俏明，覃洁萍，黄艳等.草果果仁及果壳挥发油化学成分的GC-MS分析[J].中国实验方剂学杂志.2013，19(14):112-117.[5]马洁