临床微生物质量控制概述课件

临床微生物质量控制

广州达安临床检验中心临床微生物质量控制1内容提要概述涉及内容 室内质控 室间质评内容提要概述2质量控制概述质量控制（Qualitycontrol）是临床微生物学实验室为了保证检验结果实事求是地反映客观存在而建立的操作程序体系包括室内质量控制和室间质量控制评价

室内质量控制是质量保证的核心和基础

室间质量控制评价是由实验室外部的组织或机

构对实验室进行的质量评价质量控制概述质量控制（Qualitycontrol）是临床3微生物室内质控微生物检验人员及其培养教育微生物检验过程的基本要求仪器设备的质量控制培养基的质量控制试剂质量控制抗微生物药物质量控制纠控微生物室内质控微生物检验人员及其培养教育4细菌检验人员及其培养教育（1）培养临床细菌室工作人员树立质量控制概念什么是细菌检验中的质量：结果真实显示标本中存在的病原菌及其生化特征和抗药性什么是细菌检验中的质量控制：制定细菌检验的质量水平，并采取监测手段，这一过程称为质量控制。质量保证：为达到应有的质量水平而采纳的措施质量评价：用一个客观的公认的标准来评定一个实验室或实验室中某项试验是否达到标准的过程细菌检验人员及其培养教育（1）培养临床细菌室工作人员树立质量5细菌检验人员及其培养教育（2）操作手册的建立规章制度检验项目细菌鉴定的最低要求及药敏试验培养基及其制备试剂、染色剂的制备生物安全防护参考数据及书籍室内及室间质量控制细菌检验人员及其培养教育（2）操作手册的建立6微生物检验过程的基本要求标本的采集和运送实验室收到临床标本后，应做好标本的验收工作，严格执行标本的拒收标准（如：直接涂片→ 除血标本外的临床标本特别是痰标本应做直接涂片）根据培养目的的不同，合理选择培养基，及时接种微生物检验过程的基本要求标本的采集和运送7微生物检验过程的基本要求对阳性培养要分离纯化，然后进行分群、种属鉴定和药敏试验如实记录检验过程中所见现象和发现的问题，以便于系统分析实验结果，得出正确的结论和发出可信的报告对于疑难菌株，要查阅文献，组织会诊，不能轻易作出诊断微生物检验过程的基本要求对阳性培养要分离纯化，然后进行分群、8微生物检验过程的基本要求痰及下呼吸道分泌物

肉眼观察培养前处理涂片检查血琼脂平板巧克力平板伊红美兰琼/中国蓝或麦康凯必要时可增加一个作厌氧培养CO2培养需氧培养35℃；18-24h观察菌落和涂片染色镜检各种鉴定试验药敏试验报告微生物检验过程的基本要求9仪器设备的质量控制

随着检验医学的不断发展，临床微生物检验已经进入微量化和自动化的时代,使微生物的培养、鉴定及药敏结果更加快速准确。对于这些仪器的质量控制可根据厂家推荐的方法做，确保测试系统的准确度和精密度仪器设备的质量控制

随着检验医学的不断发展，临床微生物检验已10

仪器设备的质量控制

临床微生物室常见仪器设备质量控制仪器设备的11培养基的质量控制(1)一般性状液体培养基透明清亮，颜色符合要求固体培养基表面湿润但无水汽、平整光滑、厚度均匀，一般厚度为3cm（M-H平板厚度为4cm）斜面培养基的斜面长度不得超过斜面2/3，基底层至少有1cm的直立段PH值应在规定值±0.2的范围内培养基的质量控制(1)一般性状12培养基的质量控制(2)无菌试验

每批培养基在高压或过滤除菌后均要进行抽样培养，以证实无细菌污染培养基的质量控制(2)无菌试验13培养基的质量控制对于分装后进行灭菌的培养基，一般随机抽取5%~10%的量，置35℃孵箱培养24h，证明无菌生长为合格无菌手续分装的培养基则应对全部培养基置35℃孵箱培养24h，无菌生长为合格选择性培养基应取部分培养基加入10~20倍无抑制性肉汤培养基稀释后，置35℃孵箱培养24h，证明无菌生长为合格培养基的质量控制对于分装后进行灭菌的培养基，一般随机抽取5%14培养基的质量控制(3)生长抑制试验

非选择性培养基配好后，要求抽

样接种标准质控菌株，常规培养后生长良好选择性培养基应至少分别选1株可生长、1株被抑制的标准菌株进行接种培养，可生长菌应生长良好，被抑制菌应不能生长或部分生长培养基的质量控制(3)生长抑制试验15培养基的质量控制(4)演变试验

实验室应保存一整套质控菌株，用来观察培养基各种性能的演变特征(如肠杆菌科、非发酵菌微量生化鉴定管)。生化反应培养基至少应分别选阳性和阴性反应菌株各1株，以证实应有的生化反应培养基的质量控制(4)演变试验实验室应保存一整套质16试剂质量控制（1）染色液质量控制染液在使用过程中，应该适时用质控菌株进行阴、阳性质控。微生物室最常见的染色液是革兰染液和抗酸染液。自制的染液应严格按照SOP规定配制，要求将整个配制过程的操作步骤形成记录并保存，瓶签上应注明染色液名称、配制日期、配制人、有效期试剂质量控制（1）染色液质量控制染液在使用过程中，应17试剂质量控制商品化的染色液应对厂家、试剂名称、批号存放条件加以说明并要求厂家提供质量保证书超过保质期的或已经混浊、沉淀、变色的染液应该及时处理和废弃试剂质量控制商品化的染色液应对厂家、试剂名称、批号存放条件加18

试剂质量控制(2)试纸和试剂

无论是外购的还是自制的，在使用时一定要注明开启时间和失效日期测定代谢产物的试纸或试剂，要用已知阳性和阴性的质控菌株进行测试，并作好测试记录，防止细菌的污染试剂质量控制(2)试纸和试剂19

试剂质量控制

常用生化试剂的质量鉴定

20

试剂质量控制(3)抗血清的质量控制

来源必须可靠，应从有资质的单位购买抗血清的使用与保存抗血清的效价必须用阳性反应质控菌株进行质量控制，合格者方可使用试剂质量控制(3)抗血清的质量控制21抗微生物药物质量控制药敏试验质量控制的主要目的是监测试验步骤的精密度和准确度，监测试验所用试剂的质量和工作人员对试验操作和结果判读的熟练程度抗微生物药物质量控制药敏试验质量控制的主要目的是监测试验步骤22抗微生物药物质量控制为达到这些目的，实验室通常选用遗传性能稳定的标准质控菌株，对药敏试验过程中培养基的质量、抗微生物药物及纸片的效价以及工作人员的试验操作进行监测，及时发现影响药敏结果的因素抗微生物药物质量控制为达到这些目的，实验室通常选用遗传性能稳23抗微生物药物质量控制1.药敏试验的标准质控菌株美国临床实验室标准化协会（CLSI）从美国菌种收集中心（ATCC）选择推荐了一些菌株作为质控标准株抗微生物药物质量控制1.药敏试验的标准质控菌株24抗微生物药物质量控制常见标准菌株的种类和应用细菌名称 菌号

用途金黄色葡萄球菌 ATCC25923 纸片扩散质控金黄色葡萄球菌 ATCC29213 MIC测定质控大肠杆菌 ATCC25922 纸片和MIC绿脓假单胞菌 ATCC27853 纸片和MIC粪肠球菌 ATCC29212 胸腺嘧啶测定淋病奈瑟菌 ATCC49226 淋球菌药敏流感嗜血杆菌 ATCC49247 嗜血杆菌药敏肺炎克雷伯菌 ATCC700603

ESBL阳性菌抗微生物药物质量控制常见标准菌株的种类和应用25抗微生物药物质量控制菌株的保存方法冷冻干燥为防止变异，必须将标准菌株冻干保存冷冻如无冻干条件，可于肉汤、脱纤维羊血或脱脂牛奶中加入10%-15%的甘油，或使用含50%小牛血清的肉汤，然后接种标准菌株，存于-20℃以下环境中抗微生物药物质量控制菌株的保存方法26抗微生物药物质量控制冷藏每月复苏1次，种入大豆酪蛋白消化肉汤中（厌氧菌可用GAM肉汤等）作为工作株。工作株宜4-8℃保存，并每周转种1次。通常工作株转种4~5次后即须弃去。在质控过程中，如发现工作株结果有疑问，应予以更换抗微生物药物质量控制冷藏每月复苏1次，种入大豆酪蛋白27抗微生物药物质量控制2.药敏试验方法学及影响因素方法学简介（纸片扩散法、肉汤和琼脂稀释法、Etest法、仪器法）抗微生物药物质量控制2.药敏试验方法学及影响因素28抗微生物药物质量控制影响因素操作步骤的规范性操作人员的素质质控菌株的污染或变异0.5麦氏标准管的不均或变质细菌悬液的浓度试验用的培养基、药敏纸片及药敏板条的质量问题错误的孵育时间、温度或孵育气体结果判读错误数据录入时抄写错误抗微生物药物质量控制影响因素29抗微生物药物质量控制3.质控方法建立药敏质控系统每种药物/细菌组合的30个数据中，允许3个以下数据超出规定范围满足以上数据可将质控改为每周一次每周质控时，如果有一个数据超出允许范围，要查找原因5日数据在控表明找到原因5次结果只要有一次失控，应恢复每日质控在恢复每周质控之前，应再有30日连续质控数据抗微生物药物质量控制3.质控方法30抗微生物药物质量控制3.质控方法(续)使用新批号的药敏纸片、M-H培养基、药敏板条时应做质控试验参加能力比对试验时，应做质控检测时应开展质控一旦发现药敏试验数据失控时，不应对外发放报告

抗微生物药物质量控制3.质控方法(续)31纠控鉴定从以下几个方面进行（操作程序）标本的采集和运送培养鉴定培养基的选择鉴定方法流程（包括涂片染色）培养条件仪器法的注意事项纠控鉴定从以下几个方面进行（操作程序）32纠控药物敏感性试验从以下几个方面进行：质控菌株培养基的制备（配方、厚度）抗生素的选择（效期、剂量）接种及贴纸片的过程培养条件判读纠控药物敏感性试验从以下几个方面进行：33纠控仪器硬件设备的维护与检修软件程序的更新升级纠控仪器34微生物室间质控历史 起源于美国，1966年开始，国内于1985年卫生部临检中心正式组织了全国性的细菌学质控工作，质控工作使我国临床细菌室在鉴定和药敏试验的正确性和标准化方面有了长足的进步，并且逐渐与国际标准接轨。微生物室间质控历史35微生物室间质控必要性发现系统误差促进和提高参控试验室的理论水平和技术水平室间质控是对室内质控的一种评价促进各临床细菌室间的交流有利于操作程序、方法的标准化和诊断 试剂的统一及商品化微生物室间质控必要性36微生物室间质控卫生部行业标准对临床细菌室室间质评要求：≥50％质控物为混合样本要求操作者根据人口统计资料确定需报告的病原菌标本中含有细菌范围广，包括正常菌群、条件致病菌和致病菌微生物室间质控卫生部行业标准对临床细菌室室间质评要求：37

谢谢！

38临床微生物质量控制

广州达安临床检验中心临床微生物质量控制39内容提要概述涉及内容 室内质控 室间质评内容提要概述40质量控制概述质量控制（Qualitycontrol）是临床微生物学实验室为了保证检验结果实事求是地反映客观存在而建立的操作程序体系包括室内质量控制和室间质量控制评价

室内质量控制是质量保证的核心和基础

室间质量控制评价是由实验室外部的组织或机

构对实验室进行的质量评价质量控制概述质量控制（Qualitycontrol）是临床41微生物室内质控微生物检验人员及其培养教育微生物检验过程的基本要求仪器设备的质量控制培养基的质量控制试剂质量控制抗微生物药物质量控制纠控微生物室内质控微生物检验人员及其培养教育42细菌检验人员及其培养教育（1）培养临床细菌室工作人员树立质量控制概念什么是细菌检验中的质量：结果真实显示标本中存在的病原菌及其生化特征和抗药性什么是细菌检验中的质量控制：制定细菌检验的质量水平，并采取监测手段，这一过程称为质量控制。质量保证：为达到应有的质量水平而采纳的措施质量评价：用一个客观的公认的标准来评定一个实验室或实验室中某项试验是否达到标准的过程细菌检验人员及其培养教育（1）培养临床细菌室工作人员树立质量43细菌检验人员及其培养教育（2）操作手册的建立规章制度检验项目细菌鉴定的最低要求及药敏试验培养基及其制备试剂、染色剂的制备生物安全防护参考数据及书籍室内及室间质量控制细菌检验人员及其培养教育（2）操作手册的建立44微生物检验过程的基本要求标本的采集和运送实验室收到临床标本后，应做好标本的验收工作，严格执行标本的拒收标准（如：直接涂片→ 除血标本外的临床标本特别是痰标本应做直接涂片）根据培养目的的不同，合理选择培养基，及时接种微生物检验过程的基本要求标本的采集和运送45微生物检验过程的基本要求对阳性培养要分离纯化，然后进行分群、种属鉴定和药敏试验如实记录检验过程中所见现象和发现的问题，以便于系统分析实验结果，得出正确的结论和发出可信的报告对于疑难菌株，要查阅文献，组织会诊，不能轻易作出诊断微生物检验过程的基本要求对阳性培养要分离纯化，然后进行分群、46微生物检验过程的基本要求痰及下呼吸道分泌物

肉眼观察培养前处理涂片检查血琼脂平板巧克力平板伊红美兰琼/中国蓝或麦康凯必要时可增加一个作厌氧培养CO2培养需氧培养35℃；18-24h观察菌落和涂片染色镜检各种鉴定试验药敏试验报告微生物检验过程的基本要求47仪器设备的质量控制

随着检验医学的不断发展，临床微生物检验已经进入微量化和自动化的时代,使微生物的培养、鉴定及药敏结果更加快速准确。对于这些仪器的质量控制可根据厂家推荐的方法做，确保测试系统的准确度和精密度仪器设备的质量控制

随着检验医学的不断发展，临床微生物检验已48

仪器设备的质量控制

临床微生物室常见仪器设备质量控制仪器设备的49培养基的质量控制(1)一般性状液体培养基透明清亮，颜色符合要求固体培养基表面湿润但无水汽、平整光滑、厚度均匀，一般厚度为3cm（M-H平板厚度为4cm）斜面培养基的斜面长度不得超过斜面2/3，基底层至少有1cm的直立段PH值应在规定值±0.2的范围内培养基的质量控制(1)一般性状50培养基的质量控制(2)无菌试验

每批培养基在高压或过滤除菌后均要进行抽样培养，以证实无细菌污染培养基的质量控制(2)无菌试验51培养基的质量控制对于分装后进行灭菌的培养基，一般随机抽取5%~10%的量，置35℃孵箱培养24h，证明无菌生长为合格无菌手续分装的培养基则应对全部培养基置35℃孵箱培养24h，无菌生长为合格选择性培养基应取部分培养基加入10~20倍无抑制性肉汤培养基稀释后，置35℃孵箱培养24h，证明无菌生长为合格培养基的质量控制对于分装后进行灭菌的培养基，一般随机抽取5%52培养基的质量控制(3)生长抑制试验

非选择性培养基配好后，要求抽

样接种标准质控菌株，常规培养后生长良好选择性培养基应至少分别选1株可生长、1株被抑制的标准菌株进行接种培养，可生长菌应生长良好，被抑制菌应不能生长或部分生长培养基的质量控制(3)生长抑制试验53培养基的质量控制(4)演变试验

实验室应保存一整套质控菌株，用来观察培养基各种性能的演变特征(如肠杆菌科、非发酵菌微量生化鉴定管)。生化反应培养基至少应分别选阳性和阴性反应菌株各1株，以证实应有的生化反应培养基的质量控制(4)演变试验实验室应保存一整套质54试剂质量控制（1）染色液质量控制染液在使用过程中，应该适时用质控菌株进行阴、阳性质控。微生物室最常见的染色液是革兰染液和抗酸染液。自制的染液应严格按照SOP规定配制，要求将整个配制过程的操作步骤形成记录并保存，瓶签上应注明染色液名称、配制日期、配制人、有效期试剂质量控制（1）染色液质量控制染液在使用过程中，应55试剂质量控制商品化的染色液应对厂家、试剂名称、批号存放条件加以说明并要求厂家提供质量保证书超过保质期的或已经混浊、沉淀、变色的染液应该及时处理和废弃试剂质量控制商品化的染色液应对厂家、试剂名称、批号存放条件加56

试剂质量控制(2)试纸和试剂

无论是外购的还是自制的，在使用时一定要注明开启时间和失效日期测定代谢产物的试纸或试剂，要用已知阳性和阴性的质控菌株进行测试，并作好测试记录，防止细菌的污染试剂质量控制(2)试纸和试剂57

试剂质量控制

常用生化试剂的质量鉴定

58

试剂质量控制(3)抗血清的质量控制

来源必须可靠，应从有资质的单位购买抗血清的使用与保存抗血清的效价必须用阳性反应质控菌株进行质量控制，合格者方可使用试剂质量控制(3)抗血清的质量控制59抗微生物药物质量控制药敏试验质量控制的主要目的是监测试验步骤的精密度和准确度，监测试验所用试剂的质量和工作人员对试验操作和结果判读的熟练程度抗微生物药物质量控制药敏试验质量控制的主要目的是监测试验步骤60抗微生物药物质量控制为达到这些目的，实验室通常选用遗传性能稳定的标准质控菌株，对药敏试验过程中培养基的质量、抗微生物药物及纸片的效价以及工作人员的试验操作进行监测，及时发现影响药敏结果的因素抗微生物药物质量控制为达到这些目的，实验室通常选用遗传性能稳61抗微生物药物质量控制1.药敏试验的标准质控菌株美国临床实验室标准化协会（CLSI）从美国菌种收集中心（ATCC）选择推荐了一些菌株作为质控标准株抗微生物药物质量控制1.药敏试验的标准质控菌株62抗微生物药物质量控制常见标准菌株的种类和应用细菌名称 菌号

用途金黄色葡萄球菌 ATCC25923 纸片扩散质控金黄色葡萄球菌 ATCC29213 MIC测定质控大肠杆菌 ATCC25922 纸片和MIC绿脓假单胞菌 ATCC27853 纸片和MIC粪肠球菌 ATCC29212 胸腺嘧啶测定淋病奈瑟菌 ATCC49226 淋球菌药敏流感嗜血杆菌 ATCC49247 嗜血杆菌药敏肺炎克雷伯菌 ATCC700603

ESBL阳性菌抗微生物药物质量控制常见标准菌株的种类和应用63抗微生物药物质量控制菌株的保存方法冷冻干燥为防止变异，必须将标准菌株冻干保存冷冻如无冻干条件，可于肉汤、脱纤维羊血或脱脂牛奶中加入10%-15%的甘油，或使用含50%小牛血清的肉汤，然后接种标准菌株，存于-20℃以下环境中抗微生物药物质量控制菌株的保存方法64抗微生物药物质量控制冷藏每月复苏1次，种入大豆酪蛋白消化肉汤中（厌氧菌可用GAM肉汤等）作为工作株。工作株宜4-8℃保存，并每周转种1次。通常工作株转种4~5次后即须弃去。在质控过程中，如发现工作株结果有疑问，应予以更换抗微生物药物质量控制冷藏每月复苏1次，种入大豆酪蛋白65抗微生物药物质量控制2.药敏试验方法学及影响因素方法学简介（纸片扩散法、肉汤和琼脂稀释法、Etest法、仪器法）抗微生物药物质量控制2.药敏试验方法学及影响因素66抗微生物药物质量控制影响因素操作步骤的规范性操作人员的素质质控菌株的污染或变异0.5麦氏标准管的不均或变质细菌悬液的